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串联亲和纯化技术联合质谱鉴定RSK4及其变异体的相互作用蛋白: 背景:p90核糖体S6蛋白激酶4(Ribosomal S6 protein kinase4，RSK4)是一新发现的抑制乳腺癌侵袭转移的重要因子，它能抑制乳腺癌细胞的生长并诱导其衰老;而RSK4前体mRNA在可变剪切作用下...; 刘日强; 关键词：乳腺癌质谱分析; 文献传递

核糖体S6蛋白激酶4变异体基因表达对乳腺癌细胞增殖的影响被引量：2: 2016年; 目的探讨核糖体S6蛋白激酶4变异体(RSK4m)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响。方法将RSK4m的过表达载体稳定转染至乳腺癌M DA-M B-231细胞株中,分别设一个阴性对照组(mock组)及过表达RSK4m1组(OE1组)、过表达RSK4m2组(OE2组)、过表达RSK4m3组(OE3组),采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)和Western blotting检测RSK4m的mRNA和蛋白的表达,CCK-8试剂盒检测转染后M DA-M B-231细胞的生长增殖,免疫共沉淀试验(CO-IP)验证热休克蛋白与RSK4变异体的相互作用。结果成功转染RSK4m慢病毒表达载体至乳腺癌MDA-MB-231细胞,其mRNA和蛋白水平均过表达(P均<0.05)。OE1组、OE2组、OE3组在24、48、72、96 h的细胞抑制率(%)与mock组相比,48、72、96 h的差异具有统计学意义(P<0.05),CO-IP结果证实热休克蛋白与RSK4m存在相互作用关系。结论 RSK4m可抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖,并可能与RSK4w的抑制增殖作用存在着不同的调控机制。; 田斯琦刘日强杨宁韦薇杨华伟; 关键词：变异体乳腺肿瘤增殖

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析被引量：11: 2014年; 目的:探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)、乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)和细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法:收集2012-04-13-2012-10-10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果:乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82.98%(39/47)和62.22%(28/45),χ2=5.005,P=0.021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65.96%(31/47)和42.22%(19/45),差异有统计学意义,χ2=5.220,P=0.022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89.36%(42/47)和80.00%(36/45),差异无统计学意义,χ2=1.562,P=0.211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论:SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。; 陈月凤杨华伟莫钦国刘剑仑莫毅刘日强; 关键词：乳腺珠蛋白细胞角蛋白微转移

亲和纯化技术联合质谱分析筛选乳腺癌中p90核糖体S6蛋白激酶4相互作用蛋白被引量：3: 2016年; 背景与目的:p90核糖体S6蛋白激酶4基因(ribosomal S6 kinase 4 gene,RSK4)作为抑癌基因,能够抑制细胞增殖、迁移并诱导细胞的凋亡,但与其配合发挥相应功能的相互作用蛋白尚不明确。该研究利用Flag标签纯化技术和质谱分析筛选鉴定乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的RSK4相互作用蛋白。方法:构建含有RSK4全长和Flag亲和标签的真核表达载体pc DNA3.1/EGFP-RSK4-Flag,将其转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞株,72 h后收集细胞蛋白。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RSK4表达情况。运用标签分离纯化RSK4蛋白,液相质谱/质谱分析技术(liquid chromatography mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定RSK4相互作用蛋白,通过生物信息学的方法(GO分析和IPA分析)归纳分析互作蛋白以及与RSK4相互作用机制。结果:通过标签纯化联合质谱分析成功鉴定出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38(serine/threonine-protein kinase 38,STK38)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38类(serine/threonine-protein kinase 38-like,STK38L)、MOB激酶致活因子2(MOB kinase activator2,MOB2)、蛋白精氨酸N甲基转移酶5(protein arginine N-methyltransferase 5,PRMT5)等24个RSK4相互作用蛋白。对所鉴定出的互作蛋白进行生物信息学分析,提示RSK4互作蛋白组参与包含细胞凋亡和细胞迁移运动等在内的多种生物信号通路。结论:利用亲和纯化技术联合质谱鉴定成功筛选出RSK4相互作用蛋白并通过生物信息学分析获得了RSK4参与乳腺癌细胞的凋亡、迁移相关生物调控网络。; 刘日强刘天华张钦乐江凯郭坤张舒刘银坤杨华伟; 关键词：真核表达基因转染

SBEM、hMAM及CK19预测乳腺癌外周血微转移的临床价值被引量：4: 2013年; 目的探讨生物学标志物乳腺上皮小黏蛋白(SBEM)、乳腺珠蛋白(hMAM)和细胞角蛋白19(CK19)在乳腺癌患者外周血循环中的表达及其作为乳腺癌外周血微转移预测指标的价值。方法采用巢式PCR技术,检测47例乳腺癌患者和45例乳腺良性瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的表达;采用半定量PCR技术10例乳腺癌及对应的癌旁组织以及10例乳腺良性肿瘤组织中SBEM、hMAM和CK19的表达。结果 SBEM和hMAM在乳腺癌组患者外周血中表达率高于乳腺良性肿瘤组患者(P<0.05),而两组外周血CK19表达率差异无统计学意义(P>0.05)。SBEM、hMAM和CK19在乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺良性肿瘤组组织中均呈高表达,3组患者hMAM和CK19表达量没有差异(P>0.05),SBEM在癌组组织中表达量低于癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织组(P<0.05)。结论 SBEM、hMAM、CK19在乳腺组织中呈稳定高表达,作为乳腺癌外周血微转移生物学标志物灵敏性高,但缺乏特异性,联合检测可提高特异性。; 杨华伟陈月凤刘剑仑莫毅刘日强; 关键词：乳腺癌乳腺珠蛋白外周血微转移

串联亲和纯化技术联合质谱鉴定PSK4及其变异体的相互作用蛋白: 刘日强; 文献传递

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