刘明坤
- 作品数：17 被引量：25H指数：3
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 西伯利亚蓼几丁质酶基因Class IV克隆及生物信息学分析
- 2008年
- 根据西伯利亚蓼抑制消减文库(SSH)中获得的几丁质酶(CHI)基因的部分序列,采用RACE技术克隆了具完整编码区的cDNA序列,基因全长1 017 bp,开放阅读框编码270个氨基酸。序列分析表明,该基因的编码蛋白(PsCHI1)以前体形式存在,N端分别有22个氨基酸的信号肽和35个氨基酸的几丁质结合域(CBD),C端199个氨基酸为催化区(CD),连接CBD与CD的14个氨基酸为可变交联区,成熟蛋白为不含信号肽部分,呈碱性,带正电荷。PsCHI1与所选其它植物classⅣCHI前体序列具有高度的同源性(53%～69%),而与classⅠ和classⅡCHI的氨基酸序列同源性较低,推测为植物classⅣCHI。根据日本水稻CHI晶体结构构建了PsCHI1三维分子模型,分析显示PsCHI1可以识别比classⅠ和classⅡCHI短的几丁质片段,并以其它植物CHI的已知结构域和功能为基础,确定PsCHI1具有能够水解真菌细胞壁的结构,推测其可能有抗病原微生物的功能。
- 刘关君刘昌财刘明坤魏志刚刘桂丰
- 关键词：西伯利亚蓼RACE
- 一种构建pROKⅡ植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物
- 一种构建pROK II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问...
- 许志茹王柏臣刘关君刘昌财刘明坤魏志刚刘桂丰杨传平
- 文献传递
- 西伯利亚蓼半胱氨酸合成酶基因的克隆与表达被引量：5
- 2008年
- 半胱氨酸合成酶是植物半胱氨酸合成反应的关键限速酶。文中应用RACE技术从西伯利亚蓼中成功克隆了半胱氨酸合成酶基因(GenBank登录号:EU597481),命名为PcCSase1,该基因全长cDNA为1260bp,编码382个氨基酸。经生物信息学分析,初步确定PcCSase1的N端前16个氨基酸为信号肽,并引导PcCSase1蛋白定位于胞质,为胞质型半胱氨酸合成酶。同源序列分析表明,此蛋白与其他植物半胱氨酸合成酶成熟蛋白序列高度保守,氨基酸相似性达到90%左右。荧光定量RT-PCR分析表明,PcCSase1在西伯利亚蓼的叶、茎和地下茎中均有表达,叶中表达最高,茎和地下茎次之,在3%NaHCO3胁迫过程中,该基因在叶、茎和地下茎中均在第2d表达量最高。将PcCSase1转入酿酒酵母INVSc1,结果显示培养基中半胱氨酸和菌体中谷胱甘肽含量均有显著增加,在10%NaHCO3和5mol/LNaCl胁迫下,转基因INVSc1-pYES2-PcCSase1菌株的存活率明显高于对照INVSc1-pYES2,证明PcCSase1基因具有耐高盐的作用。
- 刘明坤刘关君魏志刚阎秀峰曲春浦王垠刘桂丰杨传平
- 关键词：半胱氨酸合成酶西伯利亚蓼定量RT-PCR
- 西伯利亚蓼PsPIP1基因的克隆及其在NaHCO_3胁迫下的表达被引量：1
- 2008年
- 应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从西伯利亚蓼叶cDNA文库中克隆了质膜内在蛋白基因(PsPIP1)的完整编码区cDNA序列(GenBank accession No.EU626398),长度为1004bp,编码285个氨基酸。基于和其他植物水通道蛋白的氨基酸序列、推测的三维结构的比较以及系统进化分析结果,初步确定此基因为水通道蛋白基因家族中的PIP1亚族成员。RT-PCR结果显示,PsPIP1在西伯利亚蓼的地下茎、茎、叶中均有表达,叶中表达量最高,地下茎次之,茎中最低。在NaHCO3胁迫与去胁迫的过程中,此基因在地下茎、茎、叶中的表达模式也有较明显的差异。
- 王垠刘关君阎秀峰杨传平刘明坤曲春浦
- 关键词：水通道蛋白西伯利亚蓼基因克隆实时定量RT-PCR
- 西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因在盐胁迫条件下的表达分析被引量：5
- 2008年
- 铜伴侣蛋白是细胞质中负责传递铜离子的一种小分子转运蛋白,在逆境胁迫过程中铜伴侣蛋白的ATX1家族具有消除活性氧的作用.本研究应用RACE技术从西伯利亚蓼中克隆了具有完整编码区的铜伴侣蛋白全长cDNA序列,命名为PsATX-1.PsATX-1基因全长516 bp,其中开放读码框为228 bp,编码75个氨基酸,5′非编码区为83 bp,3′非编码区为204 bp.GenBank中登录号为EU620702.经比对发现,该基因所编码蛋白拥有重金属结合位点MXCXXC,缺少多数高等植物铜伴侣蛋白(CCH)所特有的C末端结构域(CTD).实时荧光定量PCR分析显示,PsATX-1基因在西伯利亚蓼的地下茎、茎、叶中皆有表达,其中叶中表达量最高;PsATX-1基因受3%NaHCO3胁迫诱导,在不同部位表达模式有差异.
- 刘关君曲春浦刘明坤魏志刚刘桂丰杨传平
- 关键词：西伯利亚蓼RACE实时荧光定量PCR
- 一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法被引量：2
- 2009年
- 通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点,而且引物对于多数常用35S组成型植物表达载体是通用的,为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。
- 刘明坤刘昌财许志茹魏志刚阎秀峰刘关君
- 西伯利亚蓼GST和CS基因双价载体构建及转酵母和烟草研究
- 本研究从盐胁迫下的西伯利亚蓼cDNA文库中获得的GST和CS两个基因，分别构建了GST单基因、CS单基因及GST+CS双基因酵母单价和双价表达载体和植物单价和双价表达载体，成功获得了转单双价基因酵母和烟草，并进行了相关的...
- 刘明坤
- 关键词：西伯利亚蓼谷胱甘肽转移酶半胱氨酸合成酶
- 文献传递
- 一种构建pROKⅡ植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物
- 一种构建pROK II植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物，它涉及一种植物双价表达载体的方法及其使用的通用引物。它解决了目前构建pROKII双价载体的方法需要通过中间载体更换酶切位点才能实现，步骤繁琐、构建周期长的问...
- 许志茹王柏臣刘关君刘昌财刘明坤魏志刚刘桂丰杨传平
- 文献传递
- 西伯利亚蓼谷胱甘肽转移酶和半胱氨酸合成酶基因在酿酒酵母中的共表达被引量：2
- 2008年
- 谷胱甘肽转移酶和半胱氨酸合成酶在清除活性氧(reactive oxygen species,ROS)中起重要作用。采用0.36mol.L-1NaHCO3对西伯利亚蓼(Polygonum sibiricum)进行胁迫处理,荧光定量PCR分析表明这2个基因的表达受盐胁迫强烈诱导。为了分析2个基因是否具有抗盐能力以及其相互协同能力,从cDNA文库中获得谷胱甘肽转移酶(GST)和半胱氨酸合成酶(CS)2个基因,分别将GST、CS和GST+CS转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中,并分别命名转基因酵母为ty-gst、ty-cs和ty-gc。在1mol.L-1Na2CO3和5mol.L-1NaCl胁迫处理下,转基因酵母(ty-gst、ty-cs和ty-gc)的耐盐能力均明显高于野生型酵母(wy),而三者之间并无显著差别。在0.4mol.L-1NaCl胁迫处理下,转基因酵母(ty-gst、ty-cs和ty-gc)的抗氧化酶类相关基因SOD1、SOD2、GPX1和GPX3的表达量均低于野生型酵母(对照)(wy),而CTA1表达量均高于野生型酵母(对照)(wy)。转基因酵母ty-cs在0.4mol.L-1NaCl胁迫处理前后其超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)的活性均表现为最高。
- 刘明坤刘关君阎秀峰
- 关键词：半胱氨酸合成酶谷胱甘肽硫转移酶酿酒酵母
- 西伯利亚蓼半胱氨酸合成酶基因的克隆与表达
- 半胱氨酸合成酶是植物半胱氨酸合成反应的关键限速酶。应用RACE技术从西伯利亚蓼中成功克隆了半胱氨酸合成酶基因(GenBank登录号:EU597481),命名为PcCSasel,该基因全长cDNA为1 260 bp,编码3...
- 刘明坤刘关君魏志刚阎秀峰曲春浦王垠刘桂丰杨传平
- 关键词：半胱氨酸合成酶定量RT-PCR
- 文献传递
