刘晓玫
- 作品数：14 被引量：14H指数：3
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划博士科研启动基金黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸭肠炎病毒gB基因的分子特征被引量：3
- 2009年
- 鸭肠炎病毒是鸭病毒性肠炎的病原,被划分为疱疹病毒科成员。gB是疱疹病毒感染和复制所必需的糖蛋白,能刺激机体产生中和抗体和细胞免疫应答,在疱疹病毒家族中高度保守。通过PCR技术获得了DEV C-KCE株gB基因的核苷酸序列,首次对DEVgB基因及编码氨基酸进行了较为详尽的生物信息学分析。结果表明,DEVgB基因与α-疱疹病毒的马立克氏病毒属亲缘关系最近;DEV gB蛋白具有与其他疱疹病毒gB相同或相似的结构、N糖基化位点、半胱氨酸残基、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)结合位点、弗林蛋白酶水解位点和胞浆区PACS-1识别位点。
- 马波刘峰源张扬乌伊罕刘晓玫王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒鸭瘟GB基因糖蛋白
- 鸭肠炎病毒ul47基因的原核表达及其抗血清中和活性的鉴定被引量：1
- 2008年
- 提取鸭肠炎病毒(DEV)基因组DNA,采用PCR方法扩增获得了DEVul47基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-30a,构建重组质粒pET-30a-ul47,并转化受体菌Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE分析。结果显示,ul47基因在大肠杆菌Rosetta中获得与预期大小相符的表达蛋白。利用Ni-NTA纯化表达蛋白,制备了兔抗DEV UL47蛋白的多克隆抗体,经琼脂双扩散测定,该抗血清效价为1∶16。间接免疫荧光试验和蚀斑减数中和试验结果显示,DEV UL47蛋白主要定位于感染细胞的细胞质和细胞膜,制备的兔抗DEV UL47多克隆抗体对DEV有中和活性。
- 张杨刘峰源乌伊罕刘晓玫王君伟马波
- 关键词：鸭肠炎病毒原核表达间接免疫荧光试验
- 鸭肠炎病毒US2蛋白细胞定位及感染相关功能的研究
- 鸭病毒性肠炎（dudkviralenteritis，DVW），又名鸭瘟（duckplague，DP），是鸭、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病，曾相继在多个国家和地区流行，给养鸭业造成巨大的经济损失。本病病...
- 刘晓玫
- 关键词：鸭肠炎病毒细胞定位
- 文献传递
- 携带AIVHA基因鸭肠炎病毒转移载体的构建被引量：1
- 2011年
- 为了获得携带禽流感病毒(AIV)HA基因鸭肠炎病毒转移载体,试验采用基因工程方法构建了带有CMV启动子、多克隆位点(MCS)及牛生长因子转录终止信号和加poly(A)信号(BGHpA)等真核表达元件的载体pET-3.1,将H5N1亚型禽流感病毒HA基因插入pET-3.1,再将携带真核表达元件的HA基因插入鸭肠炎病毒通用转移载体pUC-TK-LacZ-2中TK基因的XhoⅠ位点。结果表明:获得了携带AIV HA基因的鸭肠炎病毒转移载体。
- 马波邢明伟刘晓玫乌伊罕韩先杰王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒HA基因
- 鸭肠炎病毒gC糖蛋白胞外区优势抗原表位的筛选与鉴定被引量：3
- 2011年
- 为筛选出鸭肠炎病毒(DEV)gC糖蛋白胞外区的优势抗原表位,本试验通过抗原表位作图法对DEV-gC基因进行分段克隆并构建重组表达载体,表达蛋白经纯化后进行Western blot分析。结果显示,经过4轮筛选,DEV-gC糖蛋白优势抗原表位为第73-88位氨基酸。该优势表位的发现为DEV-gC糖蛋白具体功能区的研究、诊断试剂及表位疫苗的研制奠定了物质基础。
- 崔立虹宋鸽王晓东刘晓玫高明春张文龙马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒
- 鸭肠炎病毒gB胞浆区基因片段的克隆及原核表达被引量：3
- 2011年
- 为了研究鸭肠炎病毒gB胞浆区的反应原性,以鸭肠炎病毒C-KCE株为模板,扩增了gB胞浆区基因片段,并构建了其原核表达载体pET-32a-gB-N,将其转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)pLysS中,经IPTG诱导,用SDS-PAGE及Western-blot检测目的蛋白的表达情况及其反应原性。SDS-PAGE分析表明获得了30ku的融合蛋白,在Western-blot检测中,纯化的融合蛋白可与鸭肠炎病毒阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。
- 马波李洪涛刘峰源张扬刘晓玫乌伊罕王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒反应原性
- 牛病毒性腹泻病毒基因Ⅱ型HLJ-10分离株全基因组克隆及其序列特征分析被引量：4
- 2012年
- 为研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的分子特征,本研究参考GenBank中登录的BVDV基因Ⅱ型病毒株全基因组序列,设计多对引物,通过RT-PCR方法,对一株分离自某商品化血清中的BVDV分离株HLJ-10全基因组进行分段克隆及序列测定,获得了该分离株的全基因组序列。生物信息学分析表明,该分离株为BVDV基因Ⅱ型,全长12 284 nt,编码区为11 694 nt,共编码3 897个氨基酸,5'和3'非编码区分别为385 nt和205 nt。与其它BVDV参考株序列比对分析表明,HLJ-10与SH-28和KZ91CP进化关系较密切,预测该分离株含有22个潜在糖基化位点,氨基酸差异性分析表明E2蛋白的氨基酸序列在瘟病毒属中变异性较大。
- 刘华付培芬李岩温凯贾莹刘晓玫张海丽商云鹏高明春马波张文龙王君伟
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒基因组
- 表达绿色荧光蛋白的鸭肠炎病毒gE基因转移载体构建
- 2009年
- 本实验利用PCR方法扩增DEVC-KCE株gE基因片段(包含gI基因及其侧翼序列),扩增产物克隆入pGEM-T载体测序后亚克隆至pUC19 EcoRI、SalI位点间,获得pUC-gE。将增强型绿色荧光蛋白表达盒插入pUC-gE BamHI位点,构建转移载体pUC-gE-EGFP。该转移载体有7个单一酶切位点可供外源基因插入,上下游侧翼分别为1.57Kb和1Kb。将转移载体pUC-gE-EGFP转染鸭胚成纤维细胞(DEF),观察到绿色荧光,说明EGFP基因获得有效表达,为开发以鸭肠炎病毒为载体的多价、多联基因工程疫苗提供了物质基础。
- 乌伊罕赵妍刘晓玫张智慧马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒绿色荧光蛋白
- 东北白鹅CD8α基因的克隆及其胞外区基因的表达与抗血清的制备
- 2015年
- 根据GenBank公布的绿头鸭CD8α(AF378373)基因序列设计引物,通过RT-PCR获得东北白鹅CD8α基因。根据测序结果设计特异性引物,克隆得到东北白鹅CD8α胞外区基因,并在pET-30a(+)及pET-28a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导重组蛋白质获得表达,Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白质,以纯化的重组蛋白质(pET-30a-CD8ex)为免疫原制备兔抗鹅CD8α胞外区抗血清。I-ELISA、Western blot分析表明抗血清可特异识别分离获得的东北白鹅外周血T淋巴细胞与重组蛋白质(pET-28a-CD8ex),间接免疫荧光试验证实,纯化的抗血清可特异性识别瞬时真核表达的鹅CD8α胞外区蛋白质。利用激光共聚焦显微镜观察到分离获得的鹅外周血淋巴细胞的细胞膜处出现明显的荧光信号。本研究结果说明制备的抗血清可作为鹅CD8+T淋巴细胞的检测试剂。
- 张雪莲魏双施刘晓玫邵建伟张树栋李珊珊高明春张文龙邢育钢马波王君伟
- 关键词：东北白鹅CD8Α基因表达T淋巴细胞
- 鸭肠炎病毒us2基因转移载体的构建
- 2009年
- 以鸭肠炎病毒(DEV)C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增得到us2全基因(包含s3、us3部分基因),将扩增产物克隆入pMD18-T载体,EcoRⅠ和HindⅢ双酶切连入pUC19载体,获得质粒pUC-us2。将完整的EGFP表达盒插入us2基因内BamHⅠ位点,得到转移载体质粒pUC-us2-EGFP。脂质体法将转移载体质粒pUC-us2-EGFP转染DEF细胞,观察到绿色荧光,说明EGFP基因获得表达。
- 刘晓玫赵妍乌伊罕张智慧马波王君伟
- 关键词：鸭肠炎病毒
