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海藻酸微囊替代DMSO和FBS的STO细胞冷冻保存研究被引量：3: 2012年; 目的:改进现有的细胞冷冻保存方法,建立一个不含二甲基亚砜(DMSO)和血清(FBS)的高效冷冻保存方法,为细胞治疗等临床实践提供优质细胞。方法:海藻酸微囊包埋鼠胚成纤维细胞(STO细胞)后用不含DMSO和FBS的冷冻保存液进行冷冻保存。设四个对照组:添加10%DMSO和20%FBS的组、仅添加10%DMSO的组、仅添加20%FBS、DMSO和FBS均不添加组。在冷冻前后对各实验组细胞用台盼兰染色,进行细胞计数,计算细胞存活率,同时利用溴乙锭的二聚物(EthD)、钙黄绿素-AM(Calcein-AM)进行染色观察细胞的形态,且进一步验证细胞存活率;解冻复苏后用MTT法评估细胞的增殖速度和生长活力。结果:冷冻保存30天后对各组的细胞数量、细胞存活率、细胞形态和解冻复苏后细胞的生长活力进行比较发现,海藻酸微囊包埋冷冻组的细胞数、细胞存活率、细胞形态和生长活力均与添加DMSO和FBS的组之间无显著性差异,而与其它三个对照组呈显著性差异。结论:使用海藻酸微囊替代DMSO和FBS保存STO细胞,能有效的维持细胞形态、数量、存活率,同时不影响细胞的生长活力,从而建立了一个不含DMSO和FBS的高效冷冻保存方法。; 刘代艳于泊洋孔群芳包佳婧刘林洪萨初拉吴应积; 关键词：胎牛血清冷冻保存

精原干细胞移植使死精症公绵羊繁殖供体的后代: 患死精症的公绵羊移植前和移植后精子活率有显著提高，表明供体公羊的精原干细胞在受体睾丸中经过精子发生过程产生了正常精子。选用遗传表型特征与受体不同的绵羊品种做为供体，为F1代羔羊的遗传鉴定提供了便利。这次绵羊精原干细胞移植...; 吴应积苏慧敏于泊洋刘林洪李俊龙罗奋华张学明萨初拉张岩王军侯越白音巴图刘陶迪; 关键词：绵羊辅助生殖技术精子发生过程

大鼠睾丸组织支持细胞/生殖细胞长期共培养的精子发生分析及猪精原干细胞的体外初步研究: 虽然对精子发生过程的研究取得了很多进展，但是体内体外研究模型的缺乏导致依然有众多问题未得到解决。哺乳动物的精子发生是通过复杂的增殖分化过程最终产生精子。睾丸发育、成熟与精子发生的研究受限于模式动物，对大型家畜和人的研究很...; 刘林洪; 关键词：支持细胞生殖细胞精原干细胞睾丸组织

大鼠精原干细胞的高效分离和纯化方法被引量：6: 2011年; 精原干细胞是精子发生的基础，是永久分化成精子的克隆源，它既可以自我更新维持体内干细胞的数量，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟精子。本文以22～25日龄Wistar．Iamichi大鼠为研究对象，利用两步酶消化法分离得到睾丸曲细精管细胞悬液，根据精原干细胞与曲细精管细胞悬液中体细胞（支持细胞及少量的管周细胞）及各级分化的生精细胞贴壁能力及对细胞外基质粘附力的不同，将大鼠精原干细胞进行纯化。经纯化后，5只大鼠的睾丸可以得到约3×10’个精原干细胞，该精原干细胞在体外培养可形成克隆，并且该克隆可表达精原干细胞特异的标记基因GFRal和CDHl。本文所介绍的高效分离和纯化大鼠精原干细胞的方法，操作简便，且得到的精原干细胞具有很高的活力和增殖能力，该方法为今后大鼠精原干细胞的长期培养及操作研究奠定了基础。; 张岩罗奋华刘林洪萨初拉于泊洋吴应积; 关键词：精原干细胞

绵羊Gfrα1基因的部分cDNA克隆与抗原表位多肽的原核表达: 2012年; 旨在克隆绵羊Gfrα1基因序列,深入研究绵羊精原干细胞(SSCs)。本研究通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法克隆到了绵羊Gfrα1基因的编码区大部分片段。结果,克隆得到的绵羊Gfrα1基因的大部分cDNA序列长1 312bp,包括1 311bp的开放阅读框(ORF),编码437个氨基酸,与牛、人、黑猩猩、大鼠和小鼠相应核苷酸序列的同源性分别为98.5%、91.3%、91.0%、88.9%和88.0%。根据获得的cDNA序列,预测已知片段的抗原表位区,并将抗原表位区序列插入pET-44a(+)载体,经转化得到重组菌,经IPTG诱导表达,并通过亲和柱层析,纯化制备GFRα1抗原表位多肽。Western blot检测发现,经诱导表达的GFRα1抗原表位多肽约为18.2ku,与预测的大小一致。绵羊Gfrα1基因的克隆和表达研究,为进一步制作该基因的多克隆抗体奠定基础,为绵羊SSCs的分子水平鉴定及功能分析提供了研究条件。; 刘燕罗奋华包佳婧刘林洪单飞彪吴应积; 关键词：绵羊克隆原核表达

一种绵羊精原干细胞分离纯化、传代长期培养、冻存及复苏的方法: 本发明涉及一种绵羊精原干细胞的分离纯化、传代长期培养、冻存及复苏的方法，包括制备各种溶液，然后从3-4月龄的绵羊睾丸中取2-3g曲细精管组织块，经过两步酶解消化制备单细胞悬液，进而用差别贴壁法分离纯化精原干细胞，使用SS...; 吴应积罗奋华张岩刘林洪萨初拉; 文献传递

一种绵羊精原干细胞分离纯化、传代长期培养、冻存及复苏的方法: 本发明涉及一种绵羊精原干细胞的分离纯化、传代长期培养、冻存及复苏的方法，包括制备各种溶液，然后从3-4月龄的绵羊睾丸中取2-3g曲细精管组织块，经过两步酶解消化制备单细胞悬液，进而用差别贴壁法分离纯化精原干细胞，使用SS...; 吴应积罗奋华张岩刘林洪萨初拉; 文献传递

家畜精原干细胞培养液: 本发明公开了家畜精原干细胞培养液SSCM，制备方法为：临用前，将SSCB、细胞因子储存液、青霉素储存液、链霉素储存液、Fungizone储存液按下列比例混合均匀：1ml SSCB，分别添加三种细胞因子储存液各1μl、青霉...; 吴应积罗奋华张岩萨初拉苏慧敏刘陶迪于泊洋刘林洪包佳婧孔群芳刘代艳刘燕; 文献传递

绵羊精原干细胞的长期培养及鉴定: 本研究采用滋养层细胞，并在无血清培养基中添加细胞因子，模拟睾丸内微环境，使绵羊精原干细胞在体外存活并增殖。用特异的标记基因进行鉴定，证实长期培养和冷冻保存的SSCs在增殖过程中没有分化。但是经过诱导后仍能分化为精母细胞，...; 吴应积罗奋华张岩刘林洪萨初拉; 关键词：绵羊精原干细胞

大鼠睾丸组织体外共培养中的生精过程观察与鉴定: 精子发生过程是哺乳动物生殖生物学研究的重要内容.精子发生过程包括雄性动物原始生殖细胞产生的精原干细胞逐次分化产生初级精母细胞、次级精母细胞、圆形精子细胞、进而经过变态分化形成长形精子细胞最后形成精子.在此过程中支持细胞通...; 刘林洪史小芳罗奋华吴应积; 关键词：动物胚胎学睾丸组织生精过程体外培养; 文献传递

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刘林洪