刘蔼民
- 作品数：51 被引量：417H指数：12
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省农业科技自主创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 新疆陆地棉高效体细胞胚胎发生系的培育及其遗传转化被引量：1
- 2013年
- 为了筛选高频体细胞胚胎再生能力的棉花品种（系），提高农杆菌介导转化效率，本研究以新疆陆地棉03298品系经组织培养产生的三个不同世代的再生系03298R1、03298R2和03298R3为材料，分别进行农杆菌介导的遗传转化。在相同的培养体系下，03298再生系下胚轴和子叶外植体的分化率由5％（一代再生系03298R1）提高到10％-15％（二代再生系03298R2）再到23％～33％（三代再生系03298R3），表明连续组织培养定向筛选提高了03298再生系体细胞胚胎再生能力。PCR和southern杂交检测显示抗卡那霉素的再生植株成功整合了NPTII基因。本研究经组织培养筛选获得了高频体细胞再生能力的03298再生系，并建立了相应的高效遗传转化体系，为新疆陆地棉遗传改良提供了新受体材料及其配套的遗传转化体系。
- 陈天子杨郁文邓惠清刘正銮刘蔼民张保龙
- 关键词：陆地棉受体
- 农杆菌介导转化大丽轮枝菌的体系优化被引量：7
- 2011年
- 为了揭示大丽轮枝菌的遗传变异和致病机理,以含潮霉素为抗性筛选标记、绿色荧光蛋白GFP为报告基因载体,优化了农杆菌介导转化大丽轮枝菌的遗传转化体系,获得了大丽轮枝菌菌株V991和BP2含绿色荧光蛋白GFP的转化子,转化率达到100×10-6～550×10-6。优化的转化条件为:农杆菌以IM液体培养基调节浓度至OD600=0.2并预培养4 h,然后与等体积的浓度为106个.mL-1的大丽轮枝菌孢子混匀,每皿取200μL混合液涂于固体IM共培养基的纤维素膜上,25℃共培养60 h,转移至固体PDA培养基上以头孢噻肟钠500mg.L-1+潮霉素B 50 mg.L-1进行筛选。研究发现农杆菌LBA4404和AGL-1比农杆菌SK1044和EHA105更适用于大丽轮枝菌转化。对转化子观察和鉴定发现:从表型上,70.8%转化子保持野生型形态,29.2%转化子发生了形态变化;从致病力上,81%转化子的致病力相对于野生型没有发生显著变化,19%转化子的致病力或增强或减弱。
- 陈天子袁洪波杨郁文刘蔼民张保龙
- 关键词：农杆菌大丽轮枝菌潮霉素GFP表型变异
- 玉米与大豆氮代谢关键酶活性比较被引量：10
- 2000年
- 师素云薛启汉练兴明刘蔼民
- 关键词：氮代谢玉米大豆GDH种子发育
- 食用大豆油中DNA的快速提取和转基因成分定性检测被引量：17
- 2008年
- 转基因生物(GMO)制品中转基因成分检测的难点在于深加工产品中DNA的提取。本试验以食用大豆油为研究对象,研究操作简单、费用低廉的大豆深加工产品DNA提取的新方法。利用大豆内源基因Lectin设计引物,对所获得的DNA进行PCR检测,结果证实通过本方法提取的DNA纯度足以进行PCR反应。利用转基因大豆转化载体序列设计引物,进一步对其转基因成分进行检测,结果表明,用本方法从转基因大豆油中提取的DNA含有转基因成分。
- 王澎金丽晨耿志明刘蔼民
- 关键词：大豆油PCR
- 利用番茄黄化曲叶病毒侵染性克隆转化烟草获得抗病突变体
- 2012年
- 为了获得烟草抗番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)突变体材料,以含有番茄黄化曲叶病毒侵染性克隆PTYj01的农杆菌EHA105侵染转化烟草叶片,用50 mg/L卡那霉素对愈伤组织进行筛选,愈伤组织继代培养120 d左右后进行植株再生。挑取表型正常、无TYLCV病症的再生烟草45株,经PCR鉴定均整合有TYLCV DNA序列。将表型正常的再生植株移栽,温室接种烟粉虱传毒鉴定再生烟草在整个生育期对TYLCV的抗性,共获得8株表型正常、无TYLCV病症的烟草。对这8个抗性植株T2代烟草进行农杆菌注射法和接种烟粉虱鉴定,发现T2-2、T2-7的T2代分离群体中有约75%的植株没有发病症状;对这2个株系的抗性植株进一步进行卡那霉素抗性鉴定,发现其卡那霉素的抗性也符合3︰1的分离比例,说明株系T2-2、T2-7可能发生了抗TYLCV突变。可见,通过对侵染性克隆转化的烟草进行体细胞离体筛选,获得抗TYLCV突变体的方法是可行的。
- 袁洪波郭佳茹何冰陈天子杨郁文吴丹张保龙刘蔼民
- 关键词：番茄黄化曲叶病毒侵染性克隆烟草体细胞无性系再生植株
- mRNA差异显示法分离与水稻籼粳亚种间杂交稻低温敏感不育性相关的cDNA片段被引量：8
- 2004年
- 采用mRNA差异显示法对籼粳亚种间杂交稻亚优2号幼穗发育基因在两种不同温度条件下的表达差异进行了研究。结果发现,对照(正常温度28～30℃)和低温处理(白天24℃、夜晚20℃)的幼穗发育基因在转录水平上存在差异。从获得的35条差异片段中随机选取6条进行克隆测序,结果发现其中有1条片段长为556bp,暂命名为DF9,该片段与水稻第一染色体上一段cDNA序列有99%的同源性;其他5条片段与水稻的EST存在一定的同源性。进一步研究发现,DF9可能编码的产物与一些参与信号传导或能量代谢过程的酶存在不同程度的相似性。推测其与水稻籼粳亚种间杂种低温敏感不育性有关。
- 程艳军郭士伟高东迎陶澜刘蔼民
- 关键词：水稻籼粳亚种间杂交MRNA差异显示法
- 薄荷离体培养愈伤组织诱导与植株分化被引量：26
- 2000年
- 从薄荷幼嫩茎尖诱导出愈伤组织 ,以B5为基本培养基 ,添加 1.0mg/LNAA和 0 .4mg/LBA ,愈伤诱导率达到 90 %以上。植株再生 ,B5培养基优于MS培养基和N6培养基。在B5培养基中添加 0 .1mg/LNAA和 5.0mg/LBA ,植株再生频率达 5%。
- 师素云练兴明薛启汉刘蔼民
- 关键词：薄荷愈伤组织诱导分化
- 小RNA（MicroRNAs）的发现、结构和功能
- ＜正＞小RNA是由生物自身基因转录产生的22个碱基左右的单链小RNA分子,在系统发生学上具有很强的保守性。由于它可以和靶mRNA通过碱基互补的方式结合,导致靶mRNA的降解或表达受抑制, 因而能对基因表达起重要的调控作用...
- 郭士伟刘蔼民
- 文献传递
- 水稻抗白叶枯病基因Xa-25的分子定位被引量：33
- 2005年
- Xa 2 5是从体细胞突变体HX 3中鉴定出的水稻抗白叶枯病基因。通过花药培养构建了 0 2 4 2 8(粳稻 )和HX 3(籼稻 )的双单倍体 (DH)群体 ,该群体包含了 12 9个稳定株系 ,以我国长江流域水稻白叶枯病的代表菌株浙173对DH群体进行抗病性鉴定 ,抗病株系数和感病株系数分别为 6 2和 6 7。共选用覆盖水稻 12条染色体的 30 0对SSR引物对 0 2 4 2 8和HX 3进行多态性分析 ,有 74对引物在双亲之间表现差异。利用这些差异引物对DH群体进行连锁分析 ,从而将抗白叶枯病基因Xa 2 5定位到第 4染色体长臂末端的两个SSR标记RM6 74 8和RM 115 3之间 ,连锁距离分别为 9 3cM和 3 0cM。
- 高东迎刘蔼民周亦红程艳军向阳海孙立华翟文学
- 关键词：分子定位体细胞突变体水稻白叶枯病
- 水稻白叶枯病菌对体细胞突变体HX-3愈伤组织的侵染被引量：2
- 2004年
- 以抗白叶枯病细胞突变体HX 3及其感病供体明恢63的愈伤组织为试材,观察白叶枯病菌对水稻愈伤组织的侵染。结果表明:接种水稻白叶枯病菌后,明恢63愈伤组织的生长明显受到抑制,接种后13d,愈伤组织的生长量仅为对照(未接菌)的66 2%;而HX 3愈伤组织生长量减小不明显,为对照的91 3%。通过光学显微镜和透射电子显微镜观察,明恢63接菌后5d,愈伤组织细胞逐步解体,且细胞内有大量细菌侵入,接菌后13d,愈伤组织细胞大量解体破碎;而HX 3接菌后5d,愈伤组织的细胞排列致密,未见异常,接菌后13d,愈伤组织中有些细胞解体,但解体程度小且侵入到细胞内的细菌数量少。说明HX 3和明恢63在细胞水平上的抗性存在较大差别,同时也证实了水稻对白叶枯病的抗性在植株水平和细胞水平上具有相关性,这就为运用细胞突变体离体筛选技术获得抗病突变体提供了理论依据。
- 高东迎孙立华刘蔼民
- 关键词：水稻白叶枯病白叶枯病菌体细胞突变体愈伤组织侵染
