厚华艳
- 作品数：7 被引量：32H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 肠炎沙门氏菌SEF14菌毛体外表达条件研究
- 2013年
- 为筛选肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)SEF14菌毛体外表达的最适培养条件,本研究对4种不同培养条件下S.enteritidis SEF14菌毛的体外表达情况进行了比较研究,并通过RT-PCR、透射电镜与免疫电镜观察和SDS-PAGE等方法进行验证。研究表明,其中以TSB肉汤25℃震荡培养24 h后转接20℃继续震荡培养24 h,最后转接粘附因子抗原培养基(CFA)(pH6.0)于37℃静置培养50 h^60 h的SEF14菌毛表达量最高。RT-PCR结果显示在该培养条件下SEF14菌毛主要亚单位蛋白编码基因sefA mRNA表达水平最高,在透射电镜和免疫电镜下均可观察到丰富的SEF14菌毛。SDS-PAGE结果显示,所抽提的菌毛蛋白大小为14.3 ku,与相关报道一致,而且等量菌泥的抽提量最大。
- 朱春红段晓丽厚华艳龚建森张江英姚丰华孟霞朱国强
- 关键词：肠炎沙门氏菌RT-PCR电镜观察
- 沙门氏菌菌毛研究进展被引量：13
- 2013年
- 基因组生物信息分析表明沙门氏菌同时含有多种菌毛操纵子基因序列,在不同血清型沙门氏菌中具有多样性分布特征,很可能是不同血清型沙门氏菌在不同环境下的进化结果。本文就沙门氏菌菌毛操纵子编码基因的分类,菌毛分子结构特征及不同菌毛在遗传进化、致病性、传染性中发挥的作用做简要综述。
- 朱春红孟霞厚华艳龚建森张江英朱国强
- 关键词：沙门氏菌生物学特性
- 大肠杆菌K99菌毛fan操纵子的克隆、表达及活性被引量：5
- 2012年
- 【目的】在体外克隆和表达猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K99菌毛操纵子fan结构基因,并检测重组菌毛的相关生物学活性。【方法】以猪源分离的表达K99菌毛ETEC C83907株制取模板,成功PCR扩增出编码K99菌毛的fan操纵子,约5.7 kb。将fan操纵子克隆入表达质粒载体pBR322,筛选出含正确阳性质粒的重组菌。进一步将上述的重组质粒DNA转化至不含任何菌毛的大肠杆菌SE5000株,同时将空载体pBR322质粒转化入SE5000构建阴性对照菌株。【结果】该重组菌能与鼠抗K99菌毛单克隆抗体发生明显的凝集反应,与新生仔猪小肠上皮细胞刷状缘BBV分子有强烈凝集反应。电镜观察到上述重组菌表面大量表达K99菌毛,用热抽提法提纯其表达的K99菌毛,并经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色,可以得到分子量约为18.5kDa的主要蛋白条带。纯化菌毛免疫小鼠后制备出高效价的鼠抗血清,能与携带K99菌毛的C83907、C83914、C83260野生株发生强烈的凝集反应,而与携带其他菌毛的ETEC不反应。玻板凝集试验和Westernblot结果表明:体外表达的K99菌毛具有和野生K99菌毛相同的抗原性。用表达K99菌毛的重组菌进行HeLa细胞体外黏附试验和黏附抑制实验,结果表明:重组菌和野生菌株一样具有较强的粘附性,而且用重组菌毛制备的鼠抗血清能有效地抑制上述重组菌或野生菌株对细胞系的黏附结合。【讨论】本研究为进一步研究K99菌毛生物学作用建立了良好的实验平台。
- 羊扬厚华艳郁磊朱国强
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌
- 肠炎沙门氏菌SEF14菌毛研究进展被引量：1
- 2013年
- 1 SEFl4菌毛的发现 Feutrier等1986年首次在临床分离的一株人源肠炎沙门氏菌中发现一种菌毛（后来被称为SEFl4菌毛），具有甘露糖敏感血凝反应（MSHA），形态上与肠杆菌科细菌的I型菌毛难以分辨，蛋白质亚单位为14．4kD，比伤寒沙门氏菌I型菌毛亚单位（22．1kO）d,，N-末端18个氨基酸残基与大肠杆菌和伤寒沙门氏菌I型菌毛同源[1]。
- 厚华艳朱春红孟霞朱国强
- 关键词：肠炎沙门氏菌I型菌毛伤寒沙门氏菌氨基酸残基肠杆菌科N-末端
- 鹅细小病毒单克隆抗体的制备及抗原表位区分析被引量：3
- 2012年
- 采用杂交瘤细胞融合技术,获得3株能稳定分泌抗GPV特异性抗体的杂交瘤细胞株,免疫印迹结果表明:这3株单抗均能与纯化的GPV病毒子及重组VP3蛋白发生特异性反应,而与鸭肝炎病毒、鸭细小病毒、鹅源新城疫病毒无交叉反应。采用真核表达载体pCAGGS对VP3基因进行分段克隆并转染COS-1细胞表达,用单抗介导的间接免疫荧光(IFA)进行检测,结果表明:3E8株单抗与VP3蛋白135～332氨基酸(aa)和322～535aa肽段均能发生特异反应,因此可以推定3E8株单抗识别的抗原表位在VP3的322～332aa上。
- 王娟李艳莉厚华艳王建业陶洁朱国强
- 关键词：鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体
- 肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq表达与纯化被引量：8
- 2013年
- 利用pET原核表达系统和亲和层析表达纯化肠炎沙门氏菌sRNA伴侣蛋白Hfq。首先构建含靶基因hfq的重组表达质粒pET28a(+)-hfq,经PCR及双酶切鉴定构建正确,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的基因高效表达。SDS-PAGE及Western blot结果表明:Hfq在大肠杆菌中成功表达,蛋白分子质量约为16.6ku,且主要存在于上清中,以可溶形式表达。进一步对表达产物进行Ni 2+亲和层析纯化,获得纯度较高的融合蛋白,为研究Hfq蛋白与sRNA的相互作用以及sRNA的调控机制提供基础。
- 孟宪臣孟霞聂佳佳厚华艳王勇祥朱国强
- 关键词：肠炎沙门氏菌SRNA纯化
- 肠炎沙门菌SEF14菌毛与肠上皮细胞IPEC-J2和Caco-2的体外黏附作用研究被引量：2
- 2013年
- 为研究肠炎沙门菌SEF14菌毛对肠上皮细胞的黏附作用,本试验利用肠炎沙门菌50336株、突变株50336ΔsefA、50336ΔsefD以及互补株50336ΔsefA(pBRA)、50336ΔsefD(pACYCD)与肠上皮细胞系细胞(IPEC-J2和Caco-2)进行了黏附作用。结果显示:上述菌株均能与IPEC-J2、Caco-2细胞进行有效黏附,并且随时间延长黏附数量有所增多,相同时间各菌株与IPEC-J2细胞的黏附数量明显多于Caco-2细胞;但细菌和细胞共感染1和4 h后,肠炎沙门菌野生株、相应的突变株和互补株与IPEC-J2和Caco-2细胞黏附的数量差别很小,未到达显著差异水平(P>0.05)。结果表明:SEF14菌毛并不特异性介导肠炎沙门菌与肠上皮细胞系IPEC-J2和Caco-2的黏附作用,或者不是介导黏附作用的主要因子。
- 厚华艳朱春红吕靖董立伟朱国强
- 关键词：肠炎沙门菌肠上皮细胞
