张坤
- 作品数：45 被引量：132H指数：7
- 供职机构：西南大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 我国初中物理核心概念调查研究
- 近几年来，美国、加拿大、英国等国对科学课程标准进行了修订，修订后的课程标准最大的特点是围绕核心概念组织学习内容。现代社会知识爆炸性增长，不可能把所有知识都教给学生，科学教育的任务应该是教给学生足够的核心概念，使他们能够进...
- 张坤
- 关键词：初中物理教学核心概念教学课程标准中考物理试题教学大纲
- 无线传感器网络时钟同步技术的研究
- 本文分析了无线传感器网络现有几种时钟同步机制的特点，针对其多跳时钟同步算法采用洪泛广播，通信开销大的不足，提出了基于连通支配集的多跳时钟同步算法。首先改进了分布式连通支配集DRN算法，针对几个节点构成闭合环路时，为了避免...
- 张坤
- 关键词：无线网络传感器网络时钟同步
- 文献传递
- 犬细小病毒VP2基因的原核表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计了一对添加EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,对CPV VP2基因进行PCR扩增,克隆至pGM-T载体,获得重组质粒pGM-T-VP2,将重组质粒亚克隆到表达载体pET-32a上,获得表达重组子pET-32a-VP2,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后,序列分析确定该重组子YM株VP2基因ORF正确,转化至E.coli Rosetta(DE3)中,获得了基因工程菌株E.coli Rosetta(CVP2),并对重组菌进行了诱导表达,鉴定及纯化。结果表明纯化样品中含有87kDa目的蛋白,Western blot检测发现该蛋白与犬细小病毒多克隆抗体发生反应,出现特异条带。E.coli Rosetta(CVP2)以包涵体形式表达出了CPV-YM株VP2,从而为进一步制备检测抗体效价的胶体金检测试剂盒的开发研究打下了良好的基础。
- 张坤马丽娟李刚黄伟李伟贾凤琴
- 关键词：犬细小病毒原核表达纯化
- 一种用于检测犬、猫的狂犬病毒抗体的胶体金试纸卡及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种用于检测犬、猫狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡，通过在硝酸纤维素膜上同时包被狂犬病病毒相关抗原、金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)抗体两个条带，并采用胶体金标记SPA，得到了一种通用型检测试纸卡，应用免疫层析原理检...
- 李刚范晓娟张坤
- 减蛋综合征病毒NE4株全基因组序列测定与分析
- 2010年
- 根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列与GenBank中已登录的相应序列进行同源性分析,并用六邻体蛋白构建进化树.结果表明:NE4株基因组序列全长33214bp,GC含量为43%,与国际标准株AV-127相比,核苷酸序列同源性为99.6%.碱基的插入或缺失主要在非编码区,在100K蛋白编码区距羧基端1/10处插入了1个碱基C,其ORF编码696个氨基酸,而AV-127株100K蛋白编码709个氨基酸,预计其发挥功能的基团在N端.蛋白同源性分析表明,EDSVNE4株主要蛋白与羊腺病毒OAV(Ovine adenovirusD)、牛腺病毒BAV(Bovine adenovi-rusD)和蛇腺病毒SAV(Snake adenovirus)有较高的同源性,而与禽腺病毒Ⅰ群(CELO)的同源性较低,说明NE4株与禽腺病毒Ⅰ群亲缘关系较远,进化树分析也证实了此特性.
- 董春娜李刚邱文英张坤哈小琴
- 关键词：减蛋综合征病毒基因组同源性
- 猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用被引量：7
- 2011年
- 以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。
- 胡小华李刚史利军张坤贾凤芹
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒
- PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性的影响分析
- 目的:本研究利用A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,评估PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性,探究A/H6N1流感病毒的致病性分子基础.
方法:通过A/H6NI亚型禽流感病毒A/Mall...
- 程凯慧黄耕赵永坤高玉伟华育平夏咸柱于志君忻悦张坤黄靖岳秀芳丁洁王铁成杨松涛
- 关键词：反向遗传操作生物学特性
- 文献传递
- H5N1禽流感病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立被引量：10
- 2009年
- 目的:建立H5N1禽流感病毒环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法:从GenBank中获得H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因序列,应用DNAStar软件MegAlign程序分析其序列,利用PrimerExplorerV3软件在序列保守区域设计LAMP引物,即外引物、内引物和环引物,同时以所克隆的阳性质粒为模板,对试验中的几个重要参数进行优化。结果:LAMP检测方法对H5N1禽流感病毒的灵敏度达到4～6个拷贝,其引物对于H1、H9亚型禽流感病毒和新城疫病毒无非特异性扩增,表现出良好的H5亚型特异性。结论:建立的H5N1禽流感病毒环介导等温扩增快速检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,为快速检测禽流感病毒提供了新方法和新思路。
- 张坤黄伟李刚
- 关键词：H5N1禽流感病毒环介导等温扩增
- 减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立被引量：3
- 2011年
- 根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μmol·L-1,内引物浓度0.8μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 mmol·L-1,dNTP浓度0.8 mmol·L-1,甜菜碱浓度0.5 mmol·L-1,BstDNA聚合酶浓度8 U,最佳反应温度65℃;扩增出的EDSV基因呈特征性梯状条带,显色反应呈绿色荧光;检测EDSV的灵敏度高,是普通PCR检测的10倍,可检测到60个拷贝的基因组DNA;特异性强,与鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡胚致死孤儿病毒(CELO)无交叉反应;该方法重复性好,稳定性高,可准确快速地进行减蛋综合征病毒的检测.
- 董春娜李刚李伟张坤史利军哈小琴胡永浩
- 关键词：减蛋综合征病毒环介导等温扩增
- 快速检测小反刍兽疫病毒RT-LAMP方法的建立被引量：25
- 2009年
- 本研究采用一步法反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测小反刍兽疫病毒(PPRV)的方法。针对PPRV-N基因保守区域设计4条引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,可以实现DNA的梯状等温扩增。优化RT-LAMP的反应体系,并检验其灵敏性、特异性。一步法RT-LAMP检测方法从核酸抽提到检测结果出现仅需70 min,该方法具有良好的特异性,与同属的犬瘟热病毒无交叉反应,灵敏度是RT-PCR的1 000倍,是巢式RT-PCR的100倍。结果证明,RT-LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测PPRV,在基层和实验室都具有良好的应用前景。
- 李伟李刚范晓娟张坤贾风琴史利军Hermann Unger
- 关键词：小反刍兽疫病毒核酸检测
