公共文化服务平台

张慧芳: 作品数：24 被引量：36H指数：3; 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学航空宇航科学技术更多>>

合作作者

人型支原体实时荧光聚合酶链反应检测方法的初步建立被引量：1: 2012年; 目的建立一种快速、灵敏和特异的人型支原体实时荧光聚合酶链反应(real-time PCR)检测技术。方法依据人型支原体gap基因保守区域使用Beacon Designer 7.0软件设计引物和探针,建立人型支原体real-time PCR检测方法并优化。对优化后的方法进行实验室灵敏度、特异度和检测限评价,并与聚合酶链反应(PCR)进行比较。结果该real-time PCR对于人型支原体的检测限为50 cfu,PCR检测限为5×103cfu,其检测灵敏度为PCR的100倍。所建立的检测方法对其他10种常见支原体、12种泌尿生殖道感染病原菌染色体及人类染色体的扩增均为阴性。结论本研究建立的real-time PCR方法可灵敏、特异的检测人型支原体,有望用于临床标本检测。; 张慧芳张建中赵飞; 关键词：人型支原体实时荧光聚合酶链反应

传代培养对基于肽质量指纹谱的细菌识别稳定性的影响分析被引量：1: 2016年; 目的应用肽质量指纹谱技术对多次传代细菌进行识别,分析细菌传代对细菌识别能力的影响。方法将幽门螺杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别连续传57、50、100代,金黄色葡萄球菌留取抗原。每一代新鲜培养菌和冻存抗原通过乙醇/甲酸法提取蛋白,采用肽质量指纹谱技术进行谱图采集和菌株鉴定。进一步采用Nano LC-MS/MS对幽门螺杆菌基于肽质量指纹谱识别的蛋白进行批量鉴定。结果幽门螺杆菌、大肠埃希菌分别连续传57代和50代,采用肽质量指纹谱每代均能正确识别到种水平;金黄色葡萄球菌连续传100代,采用肽质量指纹谱每代新鲜菌株及冻存抗原均能正确识别到种水平,各代冻存抗原和新鲜菌株的肽质量指纹谱具有很好的一致性。幽门螺杆菌蛋白扫描分析,鉴定出206个蛋白,包括各种酶类(29.6%)、核糖体蛋白(15.5%)、外膜蛋白(10.7%)、假想蛋白(19.0%)、转运相关蛋白(2.0%)、其他蛋白(22.0%)。结论细菌连续传代和抗原冻存不影响肽质量指纹谱对菌株的正确识别,细菌的肽质量指纹谱具有传代稳定性。; 张慧芳陶晓霞何利华闫笑梅王忱诚张建中肖迪; 关键词：肽质量指纹谱细菌鉴定传代稳定性

10kDa以上幽门螺杆菌感染相关尿液差异表达蛋白的高效液相色谱-质谱分析被引量：2: 2016年; 背景:除消化性溃疡和胃癌外,幽门螺杆菌(Hp)感染尚与多种胃肠外疾病密切相关。目前临床上尚无Hp感染的体液检测方法。目的:鉴定相对分子质量在10 k Da以上的Hp感染相关尿液差异表达蛋白,为Hp感染的体液诊断提供潜在生物学标记物。方法:志愿者留取晨起中段尿,并行13C-尿素呼气试验以明确Hp感染情况。Hp阴性和阳性尿液样本各取15例,分别混合后提取蛋白,以高效液相色谱-质谱系统分离蛋白、采集数据,行label-free定量分析。另取Hp阴性尿液样本15例和阳性尿液样本11例,对差异表达分析结果进行全扫描验证。应用IPA软件对鉴定出的尿液差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果:Label-free定量分析共检测到475个尿液蛋白,并确定其中42个为差异表达蛋白。经外部扫描验证,最终鉴定出11个显著上调的差异表达蛋白。生物信息学分析揭示了这些差异表达蛋白的分子功能、参与的生物学通路、相关疾病等信息。结论:鉴定出的11个10 k Da以上尿液差异表达蛋白有望成为诊断Hp感染的生物学标记物,并可为Hp感染与胃肠外疾病的相关性研究提供分子水平的证据。; 张慧芳孟凡亮何利华何利华肖迪; 关键词：幽门螺杆菌蛋白质组学生物学标记

不同品系养殖鸡弯曲菌感染调查被引量：2: 2014年; 目的了解规模化养殖鸡弯曲菌感染现状。方法随机采集北京市某规模化养殖场蛋鸡(养殖时间大于120d)和肉鸡(养殖时间小于42d)肛拭子标本,采用两种分离培养方案(80份蛋鸡和200份肉鸡标本直接经选择性培养基划线培养,150份肉鸡标本经24h增菌后采用选择性培养基划线培养)进行弯曲菌的微需氧(5%O2、10%CO2和85%N2)培养。从肉鸡标本中随机选取50份,提取病原菌DNA,进行弯曲菌荧光定量PCR检测,并对相同培养条件下生长菌落进行质谱鉴定。结果 80份蛋鸡标本中分离到24株空肠弯曲菌,阳性率为30%;350份肉鸡标本未检测到弯曲菌。通过质谱菌落鉴定,205份标本检测到奇异变形杆菌,检出率为58.6%;145份标本检测到大肠埃希菌,检出率为41.4%。50份肉鸡粪便标本弯曲菌荧光定量PCR检测结果均为阴性,与分离培养结果一致。结论北京市规模化养殖蛋鸡弯曲菌感染率较高,饲养时间较短的肉鸡未发现弯曲菌感染。; 刘夏阳闫革彬顾一心张慧芳何利华肖迪刘红莹张建中张茂俊; 关键词：肉鸡弯曲菌荧光定量PCR

BIOMIC药敏分析系统对最小抑菌浓度判读能力的评价: 2009年; 目的评价BIOMIC药敏分析系统对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.aureus,MRSA)最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)的判读能力。方法用纸片扩散法检测50株MRSA对10种抗生素的敏感性,用BIOMIC药敏分析系统进行结果判读,与Etest结果进行比较,WHONET5.4为分析软件。用BIOMIC推算的MIC值与Etest测得值的比值(BIOMIC MIC/Etest MIC)进一步比较两种方法测得的MIC一致性。结果两种方法测得庆大霉素结果(S、I、R)的一致率为98.00%,次要误差率为2.00%,其余抗生素结果(S、I、R)的一致率为100%。BIOMIC MIC/Etest MIC比值分析结果为,MIC总一致率为83.92%。结论BIOMIC分析系统和Etest方法对于检测MRSA具有较好一致性,尤其是药物敏感菌株,可以用于临床检测或耐药监测的初步判定。; 闫笑梅何利华陶小霞张慧芳张建中; 关键词：微生物敏感性试验金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度

MALDI-TOF MS系统人间传染的病原微生物参考谱的完善及其识别能力评价研究: 目的病原体的快速识别是临床感染诊断、传染病预防控制、食品安全等公共健康问题的关键因素.基于质谱的微生物识别是近年来兴起的高通量、快速的新技术,其完善与识别能力评价是病原相关各领域的研究热点也是其用于临床、疾病控制、质检...; 肖迪张建中闫笑梅赵飞尤元海胡源张慧芳张茂俊叶长云

CagA对AGS细胞Ca^(2+)相关蛋白磷酸化的影响被引量：3: 2008年; 目的:分析幽门螺杆菌(Hpylori)细胞毒素相关蛋白A(CagA)对人胃腺癌黏膜上皮细胞(AGS)Ca2+相关蛋白磷酸化的影响,进一步揭示Hpylori的致病机制.方法:采用金属离子亲和吸附富集技术富集Hpylori、Hpylori CagA缺失株(Hpylori△CagA)与AGS细胞相互作用4h,以及培养相同时间的AGS细胞的磷酸化蛋白,利用二维凝胶电泳技术分离磷酸化蛋白,ImageMaster 2D分析软件识别差异蛋白,MALDI-TOF/TOF质谱鉴定确认蛋白.结果:Hpylori△CagA作用的AGS细胞,与培养相同时间的AGS细胞比较表达量不变,而Hpylori△CagA作用的AGS细胞表达量发生了明显变化,表明此蛋白的变化是单纯由CagA引起的;此类蛋白点共鉴定出19个,其中3个蛋白点与Ca2+相关.钙离子结合蛋白(nucleobindin-2 precursor,CALNUC)在AGS细胞以及Hpylori△CagA与AGS相互作用的2-D胶中表达量接近,而Hpylori与AGS相互作用后该蛋白表达量明显降低.结论:Hpylori CagA进入AGS细胞可能会影响内质网、线粒体及高尔基体的钙稳态,诱发内质网、线粒体、高尔基体凋亡或增殖途径,而成为胃炎、胃溃疡、胃癌发生的诱因之一.; 肖迪赵飞宋衍燕孟凡亮何利华张慧芳张建中; 关键词：细胞毒素相关蛋白A 磷酸化蛋白质钙离子通道

耐唑类抗真菌药白念珠菌标准菌株的建立与评价: 2023年; 目的建立耐唑类抗真菌药的白念珠菌(C.albicans)标准菌株,参照《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022)要求做好病原微生物菌(毒)种保藏工作,为其他真菌标准菌株的候选提供参考方法。方法通过菌株表型、鉴定、测试9种抗真菌药物敏感性和耐药基因,评估菌株保存状态下的表型稳定性和活性。结果菌株经内部转录间隔区(ITS)序列分析和质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定为白念珠菌,连续传代十次仍有稳定的分子生物学特征。该菌株对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑的最低抑菌浓度(MIC)分别为16 mg/L、0.5 mg/L、0.5 mg/L和0.5 mg/L,耐药性与ERG11基因双点突变(A114S、Y257H)及编码药物外排泵基因突变(A736V)相关。菌株在–80℃表型稳定至少6个月。结论本研究建立了耐唑类抗真菌药白念珠菌标准菌株,为白念珠菌感染性疾病的综合防治提供了重要的研究对象和物质基础,对于国家生物安全具有重要的战略意义。; 魏销玥张舒耿圆圆张慧芳肖迪张建中龚杰; 关键词：白念珠菌标准菌株唑类抗真菌药物耐药性

幽门螺杆菌iceA基因亚型的表达与鉴定: 2012年; 目的克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)26695、J99菌株中粘膜接触诱导因子(induced by contactwith epithelium,iceA)等位基因的iceA1、iceA2基因片段,并将其转入大肠埃希菌中,用IPTG诱导表达目标蛋白,为Hp相关感染菌型诊断奠定基础。方法根据标准菌株Hp 26695、Hp J99的iceA不同基因亚型的开放阅读框设计引物,用PCR方法分别从Hp 26695、Hp J99菌株的基因组DNA中扩增iceA1、iceA2基因片段,分别插入表达载体pET28a和pGEX-4t-1,构建重组表达载体pET28a/iceA1和pGEX-4t-1/iceA2,经序列测定鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组质表达目标蛋白。表达蛋白经SDS-PAGE、飞行时间质谱鉴定。结果成功构建了重组表达载体pET28a/iceA1和pGEX-4t-1/iceA2,转入大肠埃希菌中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE和飞行时间质谱鉴定证实,表达目标蛋白量分别占细菌总蛋白的16.1%和14.2%。结论成功构建了可高效表达IceA1和IceA2蛋白的重组表达载体,为进一步开展相关疾病的诊断研究奠定了基础。; 商一鸣肖迪何利华尤元海张慧芳盛剑秋张建中; 关键词：幽门螺杆菌 ICEA 克隆

人不同程度疲劳状态唾液蛋白标志物的肽谱研究被引量：2: 2020年; 目的利用目前比较成熟的唾液飞行时间质谱分析技术探索疲劳状态与非疲劳状态下有差异的大分子量肽段,为研究疲劳更加便捷稳定的标志物提供重要的理论基础。方法采集10名健康志愿者唾液样本,采用磁珠富集(MB)和原液直接检测两种样品处理方式进行飞行时间质谱分析,以MB的唾液质谱和离心后直接取上清液(原液)的唾液质谱建模。结果磁珠和直接采样均在2000~15000 Da具有很好的谱图,富集会丢失部分峰。每个人早、晚的谱图均有差异,由于样本份数有限,暂未行交叉验证,因此每个样本采两张谱图,早晚各用20张谱图进行建模分析:在原液样本两组间发现3个差异肽。MB模型的交叉效度为92.06%,原液模型的交叉效度为95.49%。结论人不同程度疲劳状态唾液蛋白标志物的肽谱在分子量2000~15000 Da范围内有差异峰,为进一步实现基于生物传感器技术等的便捷疲劳检测方法提供科学依据,具有重要的理论和现实意义。; 许岩丽肖迪张慧芳尹天露何利华高晓欢顾一心彭贤惠刘志军张建中; 关键词：磁珠生物标志物唾液

张慧芳

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

张慧芳

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈