张洹 作品数:320 被引量:869 H指数:13 供职机构: 广东工业大学 更多>> 发文基金: 广东省自然科学基金 国务院侨办重点学科基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 建筑科学 交通运输工程 更多>>
人足月胎盘间充质干细胞的分离纯化及其特征 被引量:5 2008年 目的:从人足月胎盘中分离、培养间充质干细胞(MSCs),并研究其生物学特征。方法:将人足月胎盘组织经胶原酶Ⅱ消化和贴壁培养法获取间充质干细胞,运用活细胞计数和碘化丙啶(PI)检测其增殖能力;采用流式细胞术检测其细胞表面标志的表达;用地塞米松、抗坏血酸及β-磷酸甘油诱导其向成骨细胞分化,并用Von Kos-sa染色进行鉴定;用地塞米松与胰岛素诱导其向脂肪细胞分化,并以油红O染色进行鉴定。结果:从人足月胎盘分离的间充质干细胞为梭形贴壁细胞,增殖能力较强;强表达CD44、CD29,不表达CD34、CD45、CD106和HLA-DR;经诱导后向脂肪细胞及成骨细胞分化,油红O染色、Von Kossa染色为阳性。结论:人足月胎盘中也富含间充质干细胞,与其他来源的间充质干细胞的生物学特征相似,可能是组织工程新的干细胞来源。 陆琰 陈丽 张洹关键词:胎盘 间充质干细胞 细胞培养 端粒酶基因反义核酸促进顺铂诱导白血病细胞凋亡 被引量:7 2001年 目的 探讨人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因反义寡核苷酸 (ASODN)对顺铂诱导原代培养的急性髓细胞白血病 (AML M2 )、慢性髓细胞白血病 (CML)细胞凋亡的影响。方法 采用锥虫蓝拒染法观察hTERTASODN与顺铂联合对AML、CML细胞生存的影响。琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂 ;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果 hTERT基因ASODN作用于AML、CML细胞 2 4h再加入顺铂对AML、CML细胞的生存均具有很明显的抑制作用 ,分别同正义寡核苷酸(SODN)联合顺铂组、单用顺铂组进行比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。hTERTASODN作用于AML、CML细胞 2 4h再加入顺铂 ,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带 ,并且凋亡细胞百分率( 4 2 68%,3 5 72 %)分别与SODN联合顺铂组 ( 2 9 0 2 %,2 3 84 %)、单用顺铂组 ( 2 7 5 3 %,2 1 0 2 %)进行比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 hTERT基因反义寡核苷酸可促进顺铂诱导AML、CML细胞凋亡。 何冬梅 张洹关键词:端粒 末端转移酶 白血病 寡核苷酸类 反义 顺铂 TAT-PDX1蛋白诱导的人胎肝间充质干细胞分化为胰岛β样细胞的研究 <正>目的:探讨人胎肝来源的间充质干细胞(mesenchymalstem cells derived from human fetal liver,hFLMSCs)的分离和特性;用转录子TAT-PDX1(trans ac... 姜铧 张洹 李东升 梁清乐文献传递 肝细胞生长因子与成纤维生长因子联合诱导人脐带间充质干细胞向肝样细胞的分化 被引量:6 2009年 背景:成纤维生长因子可促进间充质干细胞增殖、贴壁生长,但对其诱导间充质干细胞向肝细胞分化的实验报道为数不多。当肝细胞生长因子质量浓度达1μg/L时,可促进肝细胞有丝分裂,它是正常肝细胞最强的促有丝分裂剂。目的:体外分离培养人脐带间充质干细胞,拟揭示其生物学特性及在细胞因子联合诱导下向肝样细胞分化的能力。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08/2009-04在暨南大学血研所完成。材料:脐带取自健康足月胎儿,产妇对实验知情同意,由广州华侨医院提供。肝细胞生长因子、成纤维生长因子为美国Peprotech产品。方法:Ⅳ型胶原酶消化+差速贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞,取传至第3代细胞,进行细胞表面抗原分析、细胞周期测定,检测其成脂、成骨能力。取第5代细胞,调整细胞密度为5×109L-1,分为2组:对照组用含体积分数为5%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养;诱导组在其基础上,添加20μg/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维生长因子联合诱导其向肝样细胞分化。主要观察指标:人脐带间充质干细胞的生物学特性,人脐带间充质干细胞体外向肝样细胞的分化情况。结果:成功从人脐带中分离并纯化得到间充质干细胞,第3代细胞92.2%处在G0/G1期;表达CD29,CD44,CD105,不表达造血细胞标志CD34,CD45;油红O染色后胞浆中呈现红色颗粒,碱性磷酸酶染色后细胞质呈黑色,具有成脂、成骨能力。经肝细胞生长因子、成纤维生长因子联合诱导10d后,RT-PCR及Westernblot检测结果显示细胞表达肝细胞特异性抗原甲胎蛋白、白蛋白,对照组均呈阴性表达。结论:人脐带中含有丰富的间充质干细胞,其具有较强的多向分化潜能,经肝细胞生长因子与成纤维生长因子联合诱导后,易向肝样细胞分化。 朱华民 张洹关键词:脐带间充质干细胞 分化 肝样细胞 人胎儿造血组织来源间充质干细胞基本生物学特性的比较 被引量:1 2010年 目的:分离、纯化人胎儿造血组织来源的胎儿骨髓间充质干细胞(MSCs derived from human fetal bone marrow,hfBM-MSCs)和胎儿肝脏间充质干细胞(MSCs derived from human fetal liver,hfL-MSCs),比较其基本生物学特性。方法:取材12-20周流产胎儿,冲洗骨髓腔得到全骨髓细胞悬液;通过二步离心联合羟乙基淀粉沉淀法富集肝非实质细胞,接种、培养、纯化MSCs。绘制MSCs生长曲线,检测MSCs表面标志、细胞周期,诱导MSCs向脂肪细胞分化并鉴定。结果:hfBM-MSCs与hfL-MSCs均为平行排列的纤维状细胞,但前者较细长,后者稍宽大;hfBM-MSCs与hfL-MSCs的原代培养时间、原代培养细胞数有显著性差异;而第二代细胞数无显著性差异;二者生长曲线相似,但hfBM-MSCs的增殖速度较快;细胞周期分析显示G0-G1期细胞在hfBM-MSCs与hfL-MSCs分别占96.1%和91.2%。流式检测结果显示HLA-DR、CD40和CD80在hfBM-MSCs与hfL-MSCs均极低表达,而后者更低;hfBM-MSCs与hfL-MSCs均可成脂分化,但前者更容易向脂肪样细胞分化。结论:在相同时间内,从胎儿骨髓中可以获得更多的MSCs;hfBM-MSCs具有较大的增殖潜能、增殖速度以及分化能力,而hfL-MSCs的免疫原性更弱。 王跃春 张洹 段阿林 郑乔丹 徐文璐关键词:人胎儿 骨髓 肝脏 间充质干细胞 生物学特性 人胚胎CD34^+细胞体外向神经细胞分化的实验研究 2005年 目的:最近研究显示骨髓干细胞可向多种组织细胞分化、且在细胞移植治疗中具有显著效果。胚胎肝是胚胎中后期的主要造血组织。研究人胚胎肝白细胞抗原34阳性细胞(antigens,CD34+)是否具有向神经组织细胞分化的潜能。方法:实验于2003-03/12在暨南大学中心实验室完成。采用磁性活化细胞分选磁珠分离试剂盒从自然流产3月龄活胎的肝脏分离CD34+细胞,以DMEM/F12+100mL/L胎牛血清培养液培养、传代;第五代细胞待细胞融合达80%后,用1mmol/Lβ-巯基乙醇+10-7mol/L维甲酸诱导24h,磷酸盐缓冲液洗涤,然后在无血清培养基中继续培养。免疫细胞化学检测诱导后的细胞中神经细胞特异蛋白。结果:培养的人胚胎肝CD34+细胞经β-ME+RA诱导后,细胞表现神经元样细胞形态,表达神经细胞特异蛋白。统计显示48%细胞nestin染色阳性,91%细胞NSE染色阳性,85%细胞NeuN染色阳性,80%细胞TuJ-1染色阳性,53%细胞NF-M染色阳性。结论:人胎肝CD34+细胞在体外能向早期未成熟神经细胞分化; 刘革修 张洹 何冬梅关键词:抗原 CD34 抗原 分化 神经元 钛颗粒对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响 2006年 目的:钛合金假体磨损产生的钛颗粒对骨髓间充质干细胞成骨分化所造成影响可能是假体松动的原因之一,总结钛颗粒对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究近况。资料来源:应用微机检索Medline1980-01/2005-12相关钛颗粒对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的文献,检索词“mesenchymalstemcells,bonemarrow,osteogenesis,titanium,wearparticles”,并限定文献语言种类为English。同时微机检索中国期刊全文数据库2000-01/2005-12相关钛颗粒对骨髓间充质干细胞成骨分化影响方面的文献,检索词为“间充质干细胞,骨生成,钛”,并限定语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并开始查找全文。纳入标准:①钛颗粒与假体松动。②钛颗粒与骨髓间充质干细胞成骨分化能力的关系。排除标准:综述文献、重复研究、Meta分析类文章。资料提炼:共收集到96篇关于钛颗粒与假体松动以及钛颗粒与骨髓间充质干细胞成骨分化能力关系的文献,纳入15篇符合标准的文献。资料综合:钛及其合金具有优秀的生物相容性、超强的耐腐蚀性和较低的弹性模量等优点而被广泛应用。有研究显示,金属颗粒引发假体周围的无菌性炎症是导致其松动的重要原因。然而,假体的长期稳定需要骨与假体的紧密长入,而这需要假体周围的骨髓间充质干细胞的成骨转化。钛颗粒可以通过影响间充质干细胞的增殖并引起间充质干细胞的凋亡而使骨髓中的间充质干细胞数量减少。除了钛颗粒本身以外,由钛颗粒作用于细胞后所产生并释放的可溶性细胞因子对骨髓间充质干细胞的活性也具有抑制作用,而这方面的作用机制还有待于进一步的研究。结论:钛颗粒对骨髓间充质干细胞本身的活力以及向成骨细胞分化能力等方面均有负面的作用,这可能是钛合金人工关节假体松动的原因之一。 王晶 张洹关键词:干细胞 骨髓间充质干细胞 骨生成 分化能力 hTERT基因反义核酸对顺铂诱导Raji细胞凋亡的影响 2004年 目的 利用人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因的反义寡核苷酸 (ASODN)抑制Raji细胞端粒酶活性后 ,探讨顺铂对Raji细胞凋亡的影响。方法 采用苔盼蓝拒染法观察hTERTASODN与顺铂联合作用对Raji细胞系生长的影响 ;姬姆萨染色法观察凋亡细胞的形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪分析细胞凋亡。结果 hTERTASODN作用于Raji细胞 2 4h再加入顺铂 ,对细胞抑制明显增强 (P <0 .0 5 )。加入顺铂作用后 4 8h ,细胞出现典型的凋亡形态学改变 ,经琼脂糖凝胶电泳即可见到DNA梯形条带。凋亡细胞百分率 (2 5 .2 4± 1.5 8) % ,与正义寡核苷酸与顺铂联合作用组、单用顺铂作用组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 hTERT基因反义寡核苷酸能促进顺铂诱导Raji细胞凋亡。 李文瑜 张洹 何冬梅关键词:HTERT基因 顺铂 RAJI细胞 细胞凋亡 细胞形态学 小鼠胎肝间质干细胞的纯化与分化多能性研究 被引量:3 2007年 目的:分离纯化小鼠胎肝间质干细胞(flMSCs)并探讨其分化潜能。方法:通过改良贴壁法分离BABL/c小鼠胎肝间质干细胞;流式细胞术测定细胞周期和表型;体外诱导贴壁细胞向脂肪、软骨、骨组织以及神经细胞分化;化学染色、RT-PCR和免疫细胞化学染色鉴定分化。结果:改进贴壁法分离的flMSCs呈均一梭形,(83.76±2.88)%处于G0/G1期,表达CD44、CD29,不表达造血细胞表面标志CD45、CD11b,诱导后能向脂肪、软骨、骨以及神经方向分化。结论:贴壁法可以分离纯化小鼠flMSCs,小鼠flMSCs具有较强的分化潜能和"可塑性",可用于干细胞治疗疾病的进一步研究。 孙艳 张洹关键词:胎儿肝 间质干细胞 细胞分化 急性白血病端粒酶活性及端粒酶基因表达的研究 2003年 目的 :研究初发急性白血病 (AL)患者骨髓、外周血单个核细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的表达 ,探讨其临床意义。方法 :采用端粒酶PCR ELISA法检测 2 4例初治AL患者的端粒酶活性 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测hTERT基因mRNA的表达水平。结果 :在 2 4例初发AL患者骨髓、外周血样本中 ,18例 (75 .0 % )表达端粒酶活性 ,其吸光度 (A )均值分别为 0 .5 38± 0 .0 6 2和 0 .4 6 3± 0 .0 5 4 ,而 12例正常人外周血中只有 1例表达端粒酶活性 A 均值为 0 .16± 0 .0 12 ,前二者分别与后者比较差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。在 2 4例AL患者中 ,19例 (79.2 % )表达hTERT基因mRNA。 2 4例AL骨髓样本中 ,17例既有端粒酶活性表达 ,又有hTERT基因mRNA表达 ,端粒酶活性的表达和hTERT基因mRNA的表达具有明显的一致性。结论 :初发AL患者骨髓、外周血细胞端粒酶活性及hTERT基因mRNA表达明显高于正常 ;AL患者细胞端粒酶活化与其hTERT表达密切相关。 何冬梅 张洹 波西雁关键词:白血病 急性 端粒酶 端粒酶逆转录酶基因