朱海
- 作品数：27 被引量：143H指数：8
- 供职机构：深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目深圳出入境检验检疫局科技计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- E.coli O157:H7 LAMP检测方法的建立被引量：7
- 2010年
- 目的建立检测E.coli O157:H7环介导的等温扩增方法(LAMP)。方法选取E.coli O157:H7的rfbE基因设计LAMP引物,优化建立LAMP检测体系。并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测。结果所建立的E.coli O157:H7 LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有E.coli O157:H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非E.coli O157:H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101CFU/mL。样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小。对76份样品进行了检测,E.coli O157:H7 LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测。结论本研究建立的E.coli O157:H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用。
- 朱海吕敬章范放洪小柳马淑棉黄李华刘慧玲
- 淡水小龙虾主要过敏原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫活性鉴定被引量：18
- 2011年
- 目的:克隆、表达淡水小龙虾肌肉中主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin),并对其免疫活性进行鉴定。方法:根据甲壳类的泛过敏原tropomyosin基因的高度保守性设计简并引物,通过RT-PCR克隆出淡水小龙虾虾肉中过敏原tropomyosin的全长基因。将该基因与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经诱导异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化后,用Western blot检测该重组蛋白的免疫活性。结果:序列分析显示该基因包括一个编码284个氨基酸的开放阅读框,与已知虾、蟹、龙虾等的过敏原tropomyosin基因有较高同源性(>80%)。根据过敏原的命名规则,将其命名为Proc 1,并提交GenBank数据库,登录号为FJ769183。重组小龙虾tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫活性。结论:研究成功表达了具有免疫活性的淡水小龙虾原肌球蛋白,为虾过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 黄素文杨文潮朱海王建峰倪健波吕志平冼静雯刘志刚
- 关键词：淡水小龙虾原肌球蛋白免疫活性
- 进口冻肉中小肠结肠炎耶尔森氏菌检出情况分析被引量：4
- 2006年
- 目的:了解我国进口冻肉产品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出情况,为此类产品的风险分析和检验检疫工作提供依据。方法:通过采用小肠结肠炎耶尔森氏菌的国标检验方法和VITEK、API生化鉴定仪对247份进口冻肉产品进行检测。结果:247份样品中共检出耶尔森属菌33份,其中17份为小肠结肠炎耶尔森氏菌,检出率为6.88%,均属于生物1A型,其中3株为血清O:8型,其余均属非常见血清型。阳性样品中16份为冻鸡类样品,1份为冻猪肉类样品。94份海产样品无一份检出。结论:通过实验数据分析我国进口的冻肉产品中冻鸡类产品检出小肠结肠炎耶尔森氏菌比率较高,而海产品和冻猪肉产品中检出率相对较低,所以认为冻鸡类产品小肠结肠炎耶尔森氏菌污染风险较高,应加强此类产品检验监管力度。
- 朱海杨晓夏杨泽郑卫平马淑棉赵芳景怀琪
- 关键词：小肠结肠炎耶尔森氏菌
- 检测3种发热性疾病IgM抗体的微孔板蛋白质芯片的研制
- 2009年
- 〔目的〕针对风疹、麻疹、流行性乙型脑炎3种病毒建立能同时1次检测3种病毒IgM抗体的微孔板蛋白质芯片。〔方法〕将风疹、麻疹和乙脑3种病毒的特异抗原阵列于PVDF微孔板内,建立了在1个反应孔内能同时检测风疹、麻疹、乙脑等3种IgM抗体的蛋白质芯片检测方法。以ELISA实验为对照,通过对239份临床血清样本的分析,系统评价了该芯片系统的灵敏性和特异性。〔结果〕该芯片检测风疹、麻疹、乙型脑炎病毒的灵敏性分别为91.67%、100%、94.12%,特异性分别为99.53%、99.50%、99.10%,与ELISA实验的总符合率依次为98.74%、99.58%、98.74%。〔结论〕本研究建立的微孔板蛋白质芯片检测方法具有准确、简便、快捷、高通量等特点,具有良好的应用前景。
- 林继灿庄菁谭华涂承宁伍羊叶立青朱海杨泽
- 关键词：蛋白质芯片发热性疾病风疹流行性乙型脑炎
- 氯霉素荧光纳米颗粒免疫层析法的建立被引量：5
- 2009年
- 本研究将荧光纳米颗粒与氯霉素单克隆抗体共价偶联在一起,用该颗粒代替常用的金标颗粒标记氯霉素单克隆抗体,以竞争法作为反应模式来制备免疫层析试纸条。在紫外灯下观察免疫层析试纸条上经免疫反应而产生的质控线和检测线上的荧光信号,利用荧光强度来半定量检测动物源性食品中的氯霉素残留。所制备的检测氯霉素的免疫层析试纸条只与氯霉素有交叉反应,与非目标检测物之间没有交叉反应。该试纸条的肉眼检测灵敏性为0.5ng/mL,满足相关检测标准要求。通过比较检测线和质控线之间的亮度,能够对氯霉素进行半定量检测。本研究建立的用于氯霉素残留检测的免疫层析法,具有简便、快速、灵敏度高的特点,有广阔的应用前景。
- 朱海范放洪小柳马淑棉黄李华宋志强
- 关键词：单克隆抗体氯霉素
- 进口冷冻肉类沙门氏菌快速检验方法的研究被引量：4
- 2009年
- 〔目的〕建立一种简便、快速、灵敏、准确的沙门氏菌检验方法。〔方法〕以传统标准方法为基础,与实时荧光PCR快速检测技术结合使用。〔结果〕检验进口冷冻禽畜肉样品3177份,检出沙门氏菌105份。〔结论〕该方法的应用使沙门氏菌阴性样品得以快速放行,沙门氏菌阳性样品的鉴定更准确、科学,在进口动物源性食品的检验检疫工作中具有意义。
- 范放洪小柳赵芳匡燕云司徒翠华朱海
- 关键词：冷冻肉类沙门氏菌实时荧光PCR
- 呋喃唑酮代谢物荧光纳米颗粒免疫层析法的建立被引量：12
- 2009年
- 研究将荧光纳米颗粒与呋喃唑酮代谢物单克隆抗体共价耦联在一起,以竞争法作为反应模式来制备呋喃唑酮代谢物免疫层析试纸条。所制备的免疫层析试纸条仅与呋喃唑酮代谢物AOZ有交叉反应,而与非目标检测物之间无交叉反应,其灵敏性达1.0ng/mL,可满足相关检测标准要求。并且通过肉眼观察检测线和质控线之间的亮度,还可对AOZ进行半定量检测。该试纸条可用于食品中呋喃唑酮代谢物的检测。
- 朱海范放吕敬章赵芳万志刚马淑棉司徒翠华
- 关键词：单克隆抗体
- T-2毒素的高灵敏时间分辨荧光免疫分析被引量：9
- 2010年
- 以时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法建立快速灵敏的T-2毒素的全自动检测方法。采用T-2-BSA包被96孔板作为固相抗原,与游离的T-2竞争有限的抗T-2单克隆抗体,以Eu3+标记的羊抗鼠抗体示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立T-2-TRFIA。同时对这一方法的稳定性、灵敏度、回收率和特异性进行考核。此方法灵敏度为0.2μg/L,测量范围0.2～500μg/L,批内变异为7.5%,批间变异为12.7%,平均回收率为89.6%。与赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白无交叉反应。10条不同时间进行的间接竞争T-2-TRFIA的效应点均值ED80、ED50和ED20分别为2.66,6.97,29.11μg/L。同时,用TRFIA和ELISA试剂盒同时检测T-2毒素,在ELISA和TRFIA产品的共同可测范围之内,两者的相关系数为0.926。
- 杨润琳计融江涛汤鲁宏朱海李文新黄飚
- 关键词：单克隆抗体
- 生果、蔬中大肠杆菌O157∶H7荧光定量PCR检测方法的评估及改进被引量：8
- 2006年
- 目的:评估污染风险较高的6种生果、蔬中E.coli.O157:H7的PCR检测情况,以及初步探讨其机理和改善措施。方法:采用添加标准菌株,比较荧光定量PCR检测方法和传统分离培养法的检出情况,然后在PCR反应体系中分别添加PVPP、脱脂奶粉、BSA等物质,比较检出灵敏度的改善情况。结果:除绿豆芽和青椒外,PCR检测方法和传统分离培养法均能在1 cfu/10g、10 cfu/10g、100 cfu/10g的接种浓度上检出阳性,对于绿豆芽和青椒,荧光定量PCR检测方法在1 cfu/10g接种浓度上未检出,分离培养法在10 cfu/10g、100 cfu/10g两个接种浓度上均未检出。添加脱脂奶粉和BSA后,绿豆芽和青椒样品在1 cfu/10g的接种浓度上检出阳性,且在该浓度上其他样品的检出频率均有一定提高。PVPP对PCR体系改善不明显。结论:在生果、蔬中E.coli.O157∶H7检测中,荧光定量PCR检测方法比传统分离培养法灵敏度更高。脱脂奶粉和BSA可以用于改善生果、蔬中E.coli.O157:H7的荧光定量PCR检测体系,提高检出率和检测灵敏度。
- 朱海杨泽李小燕赵芳马淑棉杨晓夏范放
- 关键词：大肠杆菌O157:H7荧光定量PCR
- 快速检测副溶血弧菌及其毒力株方法的建立被引量：2
- 2007年
- 目的利用实时PCR技术,建立检测副溶血弧菌及其毒力株的方法。方法根据副溶血弧菌的跨膜转录激活蛋白toxR基因序列设计引物和改良分子信标(ROX标记),建立检测所有副溶血弧菌菌株的方法。通过与文献报道的检测直接耐热溶血素(TDH)基因的实时PCR体系合并,建立了同时检测副溶血弧菌及其毒力株的双重实时PCR方法。结果通过对9个属的101株菌株进行试验,所有的52株副溶血弧菌均产生ROX阳性信号(toxR^+),其余菌株均检测为阴性,其中46.2% (24/52)的副溶血弧菌产生HEX阳性信号(tdh^+)。检测toxR基因的实时PCR体系DNA灵敏度为10～100fg/PCR体系,菌液灵敏度为59.2～592 CFU/ml或2.96～29.6 CFU/PCR体系。另外成功构建了双重实时PCR体系,能同时对副溶血弧菌的toxR和tdh基因进行检测。结论建立的双重实时PCR体系能同时检测副溶血弧菌及其毒力株,从而为食品的安全检疫提供有效手段。
- 朱海张佳峰李庆阁赵芳杨泽范放马淑棉
- 关键词：副溶血弧菌毒力株实时PCR
