李光三
- 作品数：32 被引量：109H指数：5
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 山羊细胞核移植
- 1992年
- 哺乳动物细胞核移植是研究哺乳动物发育与遗传以及优良品种繁育的一个重要途径。它使人们能够在一个繁殖周期内获得大量与亲本遗传性状完全一致的复制后代。哺乳动物核移植已在小鼠、兔、绵羊、猪、牛上获得后代,但山羊核移植报道较少。张勇(1991)报道获得了4—32细胞期胚胎分裂球的核移植后代。 本研究采用白山羊为核移植的供体细胞核,青山羊为核移植的供体细胞质。将白山羊8细胞期胚胎的分裂球移入去核的青山羊 成熟卵母细胞的卵周隙内,经电融合、CB培养,然后将重构胚胎移植到假孕青山羊输卵管内,经161天妊娠,产出两只雌性核移植后代。经羔羊毛色鉴定,一只核移植后代毛色为纯白色,证明来源于白山羊8细胞期胚胎分裂球,即山羊8细胞期胚胎的单个分裂球仍具有发育全能性。另一只核移植后代,在眼、鼻、背线和腕关节处有青山羊毛色特征,其余均为白山羊特征,其形成原因正在研究中。
- 邹贤刚李光三杜森陆德裕杜福良成国祥王杏龙成勇王捍东穆宗尧徐少甫
- 关键词：山羊细胞核移植电融合
- 转基因小鼠的研究被引量：4
- 1990年
- 编码人生长激素的结构基因(hGH)与编码小鼠金属硫蛋白的基因启动子(MT-1)融合,用显微注射法将此融合基因导入小鼠受精卵的原核中,共注射了121个受精卵、将卵移入11只假孕母鼠的输卵管中,11只母鼠中的7只生了43只小鼠。在小鼠的饮水中加入锌(Zn^(2+))可诱导基因表达。小鼠长到30天时开始称体重、每隔10天记录体重、并与同时出生的对照小鼠体重比较。第一代雄性小鼠体重较对照组重、统计学分析有明显差异。小鼠长到三个月,切尾制备DNA,DNA斑点杂交法和Southern杂交法检测基因整合情况,43只小鼠中有18只有融合基因整合。用Northern、杂交法检测转录的人生长激素mRNA。用这三种方法同样检测了第二代和第三代小鼠,发现融合基因能代代相传,而后代小鼠的表型只在个别小鼠中保留下来。绝大多数转基因小鼠后代的体重减轻。用带人生长激素基因或不带人生长激素基因的小鼠做双亲,进行不同组合的交配,所得到的后代也不相同。
- 史瀛仙季肖东李光三舒幼敏
- 关键词：人生长激素转基因小鼠分子杂交
- 供体细胞核对山羊重构胚发育能力的影响被引量：1
- 1994年
- 选择不同品种的山羊交配所获的８细胞期至桑椹胚期的胚胎或重构胚发育至相同胚期的卵裂球，以ＬＲＨ注射后２６～２８ｈ回收的白山羊去核成熟卵作受体组建重构胚或再重构胚，经琼脂糖包埋，移入山羊输卵管内，培养５～６ｄ后观察发育状态。实验结果表明，杂种胚供核组建的重构胚和再重构胚发育能力明显优于纯种胚供核组建的重构胚和再重构胚，因此从细胞水平证明了杂种优势；母型ｍＲＮＡ对重构胚和再重构胚的发育起一定的调控作用。
- 穆宗尧成国祥王玉阁邹贤刚杜福良李光三徐少甫杜淼王杏龙成勇
- 关键词：山羊细胞核发育
- 人DAF基因在转基因小鼠中的遗传与表达被引量：1
- 2000年
- 为研究人 DAF基因在小鼠体内遗传与表达的规律 ,从质粒 p SFFV- DAF分离出一段包含人 DAF基因的 DNA片段 .采用受精卵显微注射法建立转人 DAF基因小鼠 .提取出生小鼠的染色体 DNA,经 Dot- blot与 Southern- blot杂交相结合确定首建转基因小鼠 ,并经Dot- blot杂交研究人 DAF基因在转基因小鼠体内的遗传特征 ,Northern杂交确定其表达情况 .小鼠受精卵经基因导入后 ,共生出 2 4只小鼠 ,其中 4只被确定为首建转基因小鼠 ,整合率为 1 5% .在首建转基因小鼠两两交配生出的 F1代小鼠中分别有 70 %和 75%继续携带人DAF基因 .首建转基因小鼠中有 1只小鼠在 RNA水平表达了人 DAF基因 .可见 ,人 DAF基因整合入小鼠基因组中 ,并能够稳定遗传及表达 .
- 王剑鹏马腾骧王广有沈玉李光三于建康
- 关键词：衰变加速因子转基因小鼠异种器官移植
- 表达人α-1，2-岩藻糖苷转移酶、衰变加速因子和CD59基因的转基因小鼠的建立及其抗异种移植排斥反应的研究
- 2008年
- 在进行非协调性异种器官移植时,目前已经证实表达人α-1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)或者补体调节蛋白的供体动物器官均可以部分克服超急性排斥反应.本文的研究目的是探讨是否共表达人HT和补体调节蛋白(衰变加速因子与CD59)的转基因小鼠的外周血单核细胞能更有效的克服异种移植排斥反应.利用受精卵显微注射技术建立转人HT,DAF和/或CD59基因的小鼠动物模型,流式细胞技术筛选表达不同基因的转基因小鼠.将小鼠的外周血单核细胞与15%的人血清共孵育,检测细胞表面天然抗体的沉积、补体的激活以及黏附分子的表达等.三种目的基因均可以在转基因小鼠体内表达,并且HT基因的表达显著减少了引起异种移植排斥反应的主要抗原半乳糖α-1,3-半乳糖(α-Gal)的表达.功能实验表明,与单一目的基因表达的转基因小鼠相比,共表达HT/DAF或HT/CD59的转基因小鼠的外周血单核细胞对抗人血清介导溶破细胞的能力显著增强.而且三基因共表达的外周血单核细胞对抗人血清介导溶破细胞的能力最强,可以克服超急性排斥反应并且可以减少黏附分子的表达.高水平表达人HT,DAF和CD59基因的转基因小鼠可以完全克服异种器官移植超急性排斥反应并且可以部分克服急性血管排斥反应.本研究表明,表达三种基因的转基因小鼠的器官异种移植时存活时间可以显著延长,对异种移植来说也许是更合适的选择.
- 刘秉乾程传宇武玉东魏金星李光三马腾骧
- 关键词：补体调节蛋白超急性排斥反应
- 一种向动物细胞中转移外源基因的方法
- 本发明提供了一种向动物细胞中转移外源基因的方法，包括使用靶基因构建靶基因表达载体；使用核定位蛋白基因构建核定位蛋白基因表达载体；以及将得到的靶基因表达载体和核定位蛋白基因表达载体共转染或共注射或电穿孔到培养细胞的细胞质中...
- 张靖溥李光三杜淼
- 文献传递
- 金鱼胚胎细胞超低温保存及其发育能力的研究被引量：4
- 1989年
- 将金鱼囊胚期的细胞分离后,保存于-196℃液氮中,并对保存后化冻的细胞用细胞核移植的方法检测了其细胞核发育的能力。本文首次证明了经冷冻后的细胞核被移至去核卵中能发育成正常的个体。并证明在冷冻液中加入胶原蛋白可以提高化冻后细胞的存活率。本实验的结果为长期保存端黄卵的各种鱼类的基因库提供了新的途径。
- 杜淼高晓虹李光三陆德裕
- 关键词：金鱼胚胎细胞超低温保存
- E.coli galk和gpt基因重组质粒(pIDB103)导入金鱼受精卵内的研究
- 1989年
- 用显微注射法把含有E.coli galk和gpt基因的环状和线状重组DNApIDB103分别导入金鱼受精卵的细胞质内。这些注射过的卵子一般都能正常发育。从各不同发育时期的胚胎分离DNA与^(32)P标记的pIDB103探针杂交表明,导入的环状外源重组DNA在胚胎发育的早期,绝大部分以各种环状构型存在。从原肠胚晚期开始,它们逐渐形成串联状高分子量DNA。在尾芽期仍能检测到它们的序列。但尚未证明,它们是否与受体的染色体DNA发生整合。我们从囊胚期的胚胎中回收到了能转化大肠杆菌的环状重组DNA,它的酶切图谱和pIDB103极其相似。导入金鱼受精卵内的线状重组质粒pIDB103,除少量DNA与金鱼的染色体DNA可能发生整合外,其余绝大部分也形成高分子量DNA。
- 于建康王亚平黄河杜淼李光三张玉廉陆德裕
- 关键词：基因转移分子杂交金鱼
- 核定位信号肽在异种移植动物模型转人α1,2-岩藻糖苷转移酶基因小鼠制备中的作用
- 2006年
- 目的探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用。方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠。实验组:将NIS 转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导入细胞质;对照Ⅱ组:将人HT转基因构件导入细胞核。应用聚合酶链反应(PCR)、Southern杂交及逆转录 (RT)-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内的整合与表达,应用流式细胞计数(FCM)检测转基因小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面H抗原与α-Gal抗原的表达。结果实验组与对照Ⅰ组 G0代小鼠的出生率33．8％(46／136)及35．4％(23／65)高于对照Ⅱ组10．2％(51／498)(P<0．01),实验组人HT基因的整合率(30．4％,14／46)高于对照Ⅰ组(0,0／23)与对照Ⅱ组(11．8％,6／51,P< 0．01),实验组人HT基因的表达率(19．6％,9／46)也高于对照Ⅰ组(0,0／23)和对照Ⅱ组(5．9％,3／ 51,P<0．01),人HT mRNA在小鼠心、肝、肾和骨骼肌组织中均表达阳性。转基因小鼠PBMCs表面H抗原表达阳性。表达强度为人的85％～190％,同时α-Gal抗原表达显著降低,为正常小鼠的 5％～12％。转基因小鼠已经稳定传3代。结论 NLS基因与目的基因细胞质共注射是制备转基因小鼠简便实用的新方法。
- 刘秉乾王广有马志方李胜芝李光三马腾骧
- 关键词：转基因
- 小鼠血管内皮细胞表达人DAF和CD59对其心脏在人血清灌注下做功的影响
- 2007年
- 目的探讨联合转入衰变加速因子(DAF)和CD59基因对小鼠心脏在人血清灌注下做功及组织结构的影响。方法采用受精卵显微注射技术,将人DAF和CD59基因注入昆明小鼠受精卵的原核中,选取注射后仍健康的受精卵植入假孕母鼠的输卵管中待分娩。提取足月产小鼠(G_0代)基因组DNA,以聚合酶链反应(PCR)及Southern印迹杂交确定外源基因整合情况,应用流式细胞术检测人DAF和CD59在转基因小鼠白细胞上的表达,免疫组织化学染色检测人DAF和CD59在转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的表达。取出转基因成功小鼠的心脏,在体外以人血清进行灌注,测定其做功能力,HE染色及免疫组化染色观察灌注后心脏的组织学变化以及补体C3c的沉积情况。以单一转DAF基因的小鼠为对照。结果共获得G_0代小鼠135只,经PCR及Southern印迹杂交分析,11只(8.1%,11/135)整合有人DAF和CD59外源基因,其中6只的白细胞膜表面人DAF和CD59表达阳性,强度分别为(86±6)%和(85±8)%,单转人DA F基因者(87±7)%,差异无统计学意义。人DAF及CD59仅表达于转基因小鼠心脏、肝脏及肾脏组织中的血管内皮细胞上。在人血清灌注后60min内,普通小鼠的心脏做功急剧下降,接近40min时心脏停止搏动;转DAF基因小鼠的心脏做功也下降,但仍维持在最大值的20%以上;转DAF和CD59双基因小鼠的心脏做功维持在最大值的40%以上。在人血清灌注的10～60min,转基因小鼠心脏做功能力明显强于普通小鼠心脏(P<0.05);灌注20～60min时,转双基因小鼠的心脏做功能力明显强于转DAF基因小鼠心脏(P<0.05)。普通小鼠心脏在人血清灌注后组织裂解较多见,肿胀严重,而转基因小鼠心脏组织的病理改变明显轻于普通小鼠,转双基因者的病理变化又明显轻于单一转DAF者,心肌血管中人C3c的沉积也明显少于单一转DAF者。结论血管内皮细胞特异性表达人DAF和CD59,可明显阻抑其心脏在�
- 张志宏马腾骧王广有李胜芝张月刘思金劳为德李光三
- 关键词：小鼠做功
