李益飞
- 作品数：5 被引量：18H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技攻关计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪圆环病毒2型ORF4基因编码蛋白的体外表达被引量：14
- 2008年
- 为了探讨猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF4基因结构及其所编码蛋白在PK15细胞中的表达特性,以PCV-2杭州株病毒DNA为模板进行PCR,结果扩增出了ORF4基因,并分别构建了pGEX-4T-1-ORF4原核表达载体和pEGFP-C2-ORF4真核表达载体。序列分析、SDS-PAGE分析和Western-blot检测表明,PCV-2 ORF4基因长180 bp,共编码60个氨基酸;其编码蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式存在,分子质量大小约为6.685 ku。真核PK15细胞的转染试验显示,ORF4重组蛋白在PK15细胞的细胞核和细胞浆中均有表达,但对其有一定的毒性。
- 李增魁陈婷飞李益飞周继勇
- 关键词：猪圆环病毒2型原核表达真核表达纯化
- 猪圆环病毒1型和2型Rep蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：2
- 2007年
- 分别以猪圆环病毒1型基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,利用PCR扩增了猪圆环病毒1型和2型的ORF1基因,随后克隆到pET-28a(+)和pET-32a(+)两种原核表达载体上。测序正确的重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3),进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,猪圆环病毒1型和2型的ORF1均能在pET-28a和pET-32a中分别以重组蛋白His-Rep(40 Ku)和Trx-His-Rep(54 Ku)的形式表达。进一步纯化后测定重组蛋白的浓度,推算出猪圆环病毒1型和2型的His-Rep蛋白产量分别为34 mg/L菌液和14 mg/L菌液,Trx-His-Rep蛋白产量则为12 mg/L菌液和10 mg/L菌液。这些纯化的蛋白在Western blot中能够与猪抗猪圆环病毒2型阳性血清发生特异性反应,显示其具有良好的免疫学活性。本研究建立的猪圆环病毒重组Rep蛋白的原核表达系统及其纯化方法,为下一步开展Rep蛋白功能等相关研究奠定了基础。
- 李益飞申会刚商绍彬陈庆新郭军庆周继勇
- 关键词：REP蛋白纯化
- 传染性支气管炎病毒S1蛋白在Vero细胞的表达与分布被引量：1
- 2007年
- 将传染性支气管炎病毒(IBV)ZJ971 S1基因亚克隆到绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组表达质粒pEGFP-ZJ971-S1。重组质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞,借助荧光显微镜在转染后4h观察到S1-GFP融合蛋白的瞬时表达。免疫细胞化学染色(ICC)结果显示,抗ZJ971 S1D蛋白单克隆抗体和鸡抗IBV ZJ971全病毒血清特异性识别了S1基因转染细胞,表明S1蛋白在Vero细胞中得到有效表达。荧光显微镜观察和ICC均表明,S1表达蛋白主要分布在转染细胞的胞浆内,而胞核中未见分布,提示IBV S1蛋白内可能存在与病毒装配相关的细胞定位信号。
- 胡金强蔡月琴李益飞郭军庆孙文博周继勇
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1蛋白VERO细胞
- 猪圆环病毒Rep蛋白在大肠杆菌中的表达及其单克隆抗体的研制
- 以PCV1基因组和重组质粒pCI-PCV2-ORF1为模板,分别扩增出PCV1和PCV2的ORF1基因,然后亚克隆到pET-28a(+)、pET-32a(+)以及pGEX-4T-1三种原核表达载体上,获得5个测序正确的重...
- 李益飞
- 关键词：REP蛋白原核表达纯化单克隆抗体
- 文献传递
- 抗重组IBV S1D蛋白的单克隆抗体的制备与鉴定
- 应用PCR技术克隆了传染性支气管炎病毒三个毒株S1D蛋白基因并克隆到原核表达载体pET-28a(+)中。重组质粒经PCR和双酶切鉴定正确,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后表达出以包涵体形式存在的...
- 胡金强李益飞周继勇
