温乐英
- 作品数：72 被引量：773H指数：16
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 在我国流行的脊髓灰质炎中发现脊灰病毒Ⅰ型自然重组株被引量：7
- 1993年
- 脊髓灰质炎病毒(PV)是引起脊髓灰质炎的最主要的病毒。我们在研究PV1野毒株的分子流行病学时,发现了一株PV1自然重组病毒。用Sabin 1特异PCR检定该毒株基因组2505～2601区段,或用两个Sabin 1特异RNA探针分别打点杂交检定641～740和2502～2575区段时,推断它可能为野毒株;而测定VP1/2A连接区段3296～3445序列时,又表明它为疫苗株。向5′端扩大测序,从3262起的5′侧有与我国PV1野毒株相同的许多核苷酸取代,证明它为野毒株和疫苗株的重组病毒,重组位点为3262/3263。实验中建立了检测该重组病毒的特异的PCR方法。检测我国10个省市、自治区47份PV1分离株中,5个省区14份麻痹病例由重组病毒感染引起。这些重组株在我们测序的3155～3445区段序列彼此几乎相同(同源性≥96.7％),推断它们可能是某病儿受野毒株、疫苗株双重感染产生重组病毒后的子代病毒。有关该重组病毒的毒力、免疫原性、传播性等正在进一步研究中。
- 方肇寅O.Kew任斌郑渡平温乐英杨辰夫苏锦陈美光郑焕英孟宪坤张振国刘复林H.Yoshikura
- 关键词：脊髓灰质炎病毒重组病毒
- 成人腹泻轮状病毒蛋白的免疫印迹分析
- 1993年
- 我们从腹泻病人便样中纯化了病毒,其结构蛋白组分按分子量大小分别为VP1(136K),VP2(113K),VP3(92K),VP4(84K),VP5(64K),VP6(47K),VP7(41K)。所有这些蛋白皆具有抗原性。WP6是B组轮状病毒的共同抗原。B组轮状病毒的每一结构蛋白与A组轮状病毒都无交叉免疫反应。另外注意到二例不同病人对VP6和VP7刺激产生的抗体水平不同。
- 方肇寅温乐英R.Glass
- 关键词：轮状病毒免疫印迹病毒蛋白腹泻
- 人轮状病毒非复制型重组腺病毒粘膜免疫效果的研究
- 我们在用非复制型腺病毒载体成功制备含有人轮状病毒VP7、VP6基因重组腺病毒的基础上,利用小鼠为实验模型,通过灌胃和滴鼻两种免疫途径对其粘膜免疫的效果进行了研究。为较全面了解非复制型重组腺病毒免疫小鼠后,粘膜免疫产生的情...
- 何金生王健伟姜秀丽王大燕温乐英董京芳屈建国洪涛
- 文献传递
- 从人分离出两株甲型流感H9N2亚型毒株内部基因特性的研究被引量：6
- 2003年
- 目的 了解 2株从人分离出的H9N2亚型毒株内部基因特性 ,并弄清其来源。方法 用RT PCR扩增目的基因 ,用PGEM T Vector (美国Promega公司 ) ,4℃过夜连接 ,重组质粒转入dH5α细菌 ,筛选阳性菌落 ,酶切鉴定 ,送六合通公司自动测序。然后进行进化树分析。结果 2株测定毒株内部基因均为G9基因系 ,它们相互间除PA基因有差异外 ,其余 5个基因均相同。结论 2株测定毒株的基因组均为G9基因系 ,它们是由携带不同基因特性H9N2毒株的禽群分别直接感染人 。
- 郭元吉温乐英王敏郭俊峰张烨李梓
- 关键词：流感病毒A型H9N2亚型RT-PCR禽流感病毒
- 多重RT-PCR结合反向杂交技术检测多种流感病毒方法的研究
- 2010年
- 目的 建立一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的多种流感病毒核酸快速检测方法.方法 对5种亚型流感病毒的HA基因序列进行比对分析,选择合适的保守区域设计引物序列,并在扩增产物序列内部选择高变区设计探针序列.首先,使用生物素标记的引物扩增出同样带标记的PCR产物;然后,产物与膜上的探针杂交,通过生物素-亲和素反应,最后以斑点显色的方式来检测和鉴别不同亚型的流感病毒.实验中还通过摸索不同的引物浓度和探针浓度来优化反应条件.结果 成功建立了一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法,该方法能够成功检测和鉴别5种不同亚型的流感病毒,检测灵敏度比传统的RT-PCR方法高100～1000倍.结论 成功建立了一种可高通量快速检测多种流感病毒的多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法.
- 杨亮张晓梅张晓光马晶王敏温乐英王大燕白天舒跃龙钱永华曾毅
- 关键词：聚合酶链反应杂交流感
- 用大引物PCR法获得轮状病毒VP4基因的突变体被引量：1
- 2002年
- 目的 对A组轮状病毒主要结构抗原VP4基因中PacⅠ的识别序列进行无义突变以便于用腺病毒Ad Easy载体系统进行表达。方法 采用大引物PCR方法 ,通过 3条引物 ,两轮PCR反应 ,获得VP4基因的突变体 ,并经核酸序列分析证实。结果 PacⅠ识别的 8个碱基序列TTAAT TAA ,突变为CTGATCAA。结论 大引物PCR是对核酸进行突变的一种简便。
- 何金生王健伟董京芳温乐英洪涛
- 关键词：聚合酶链反应轮状病毒属VP4基因突变体
- 一种快速构建重组腺病毒的简便方法被引量：4
- 2002年
- 目的 对腺病毒AdEasy载体系统进行方法改良 ,使之成为能被一般实验室采用的快速构建重组腺病毒的系统。方法 用插入有G1VP7基因和绿色荧光蛋白的穿梭载体pAdTrackCMV与腺病毒骨架载体pAdEasy 1共转化E .coliBJ5 183并进行同源重组 ,获得重组腺病毒质粒 ,经PacⅠ线性化后 ,转染 2 93细胞。为便于操作 ,对AdEasy载体系统的某些操作过程进行了适当改进。结果 得到重组腺病毒rvAdG1VP7(G)。转染重组腺病毒DNA的 2 93细胞出现细胞病变 ,经PCR对传代的rvAdG1VP7(G)分析证实 ,有特异性的G1VP7基因整合 ,荧光显微镜能观察到 2 93细胞内有绿色荧光。结论 腺病毒AdEasy载体系统是一种较为简便、快速的构建重组腺病毒的好方法 。
- 何金生王健伟温乐英洪涛
- 关键词：腺病毒科轮状病毒
- 用于荧光定量检测流感病毒RNA质控品的制备及质控图的绘制被引量：1
- 2014年
- 目的 应用自制流感病毒RNA室内质控品,绘制Levey-Jennings质量控制图.方法 选取近期的流感病毒流行代表株,提取RNA后10倍系列稀释（10-1 ～ 10-8）,取不同稀释度的RNA做RT-PCR荧光定量检测,每个稀释度平行做三孔,根据检测的平均Ct值选取高Ct值和低Ct值对应稀释度的RNA,连续检测20次,计算均值（x）和标准差（s）,应用Excel软件绘制Levey-Jennings质控图.结果 用Excel绘制出三种亚型流感病毒的Levey-Jennings质控图,三种亚型RNA质控品均在警戒线内.结论 三种亚型RNA质控品稳定性较好,制备简单,质控图绘制方便,适用于PCR检测实验室对流感病毒的室内质控.
- 刘丽琦赵翔温乐英郭俊峰隗合江王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型
- 两株京科猪H1 N1亚型流感病毒内部基因来源的研究被引量：2
- 2005年
- 目的通过内部基因研究了解两株猪(H1N1)亚型流感病毒内部基因是否含有禽流感病毒基因节段及是否与猪群中H9N2亚型毒株发生了基因重配。方法病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,通过逆转录合成cDNA,cDNA用PCR扩增。PCR产物用纯化试剂盒纯化,接着进行核苷酸序列测定,然后用MegAlign(Version1.03)和Editseq(Version3.69)软件进行基因进化树分析。结果两株京科猪H1N1病毒内部基因除PB2基因节段有所不同外,其余5个基因节段均相同,但与猪H1N1流感病毒内部基因相近,然而,与古典型猪H1N1毒株有差异。结论两株京科猪H1N1病毒不是基因重配株,它们的内部基因均属猪H1N1流感病毒基因系。
- 郭元吉温乐英张烨王敏郭俊峰李梓舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型基因
- 云南省2004年流感流行情况分析被引量：3
- 2005年
- 目的了解2004年云南省流感流行情况及病毒的变异情况。方法定期采集流感样病人标本以及从暴发疫情中采集标本,利用MDCK细胞从标本中分离病毒,对分离病毒利用血清学方法进行抗原性分析;对病毒的HA1基因进行序列测定,用DNAstat软件进行基因种系发生树分析病毒的遗传变异情况。结果2004年云南省共分离到甲3亚型流感病毒50株,乙型流感病毒56株,没有分离到甲1亚型流感病毒。62%的甲3亚型流感病毒与A/福建/411/2002(H3N2)的血凝效价有4倍或以上差别;2004年4月份以后分离的甲3亚型流感病毒HA1区氨基酸序列上与A/福建/411/2002(H3N2)相比第145位K>N,159位Y>F,189位S>N,226位V>I发生氨基酸替换。5.8%的Yamagata系毒株与B/上海/361/2002血凝效价有4倍或以上的差别,HA1区氨基酸序列与B/上海/361/2002比较,第36、40、129、131、179、232、255位发生了氨基酸替换。10.8%的Victoria系毒株与B/浙江/2/2002有4倍或以上的差别。与B/浙江/2/2001比较第121,126,197位发生了替换。结论2004年云南省流行甲3亚型流感毒株和乙型流感毒株,并且它们的抗原性和基因特性发生了变异。
- 张烨徐闻赵群温乐英王敏白优昌宁得明蒋立秦明芳罗春蕊郭俊峰李梓郭元吉舒跃龙
- 关键词：流感病毒抗原性变异基因
