王锐
- 作品数：9 被引量：29H指数：3
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家转基因植物研究与产业化专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- Cre／lox介导剔除转双价抗虫sck＋cryIAc基因籼稻恢复系明恢86材料的选择标记基因被引量：2
- 2004年
- Cre／lox系统通过其Cre重组酶对lox序列进行切割和重新连接，介导lox序列发生特异性重组。利用重组报告基冈系统Pactin-lox-hpt-lox-gusA，对Cre／lox系统在水稻(Oryza saliva L．)中介导转基因的剔除进行了研究。Pactin-lox-hpt-lox-gusA系统中选择标记hpt基因侧翼含两个同向lox位点，并位于水稻actinl启动子和gusA基因之间。当hpt在Cre酶作用下被剔除时，actinl启动子可以和gusA基因融合在一起从而驱动GUS表达。通过农杆菌介导获得了分别转cre基因、Pactin—lox—hpt—lox—gusA结构和双价抗虫基因lox—hpt—lox—sck-cryIAc结构的水稻。利用有性杂交方法将cre基因导人列转化lox结构的植株中。在4个转Pactin—lox—hpt—lox-gusA T0植株×转cre T0植株所配组合的30个杂交F1植株中，12个植株表达GUS活性，9个表现潮霉素敏感，表明hpt基因被剔除。研究进一步通过Cre／lox介导剔除转双价抗虫sck+cryIAc基冈籼稻恢复系明恢86材料基冈组中的选择标记hpt基因。在9个转lox-hpt-lox-sck-cryIAc T2代纯合植株×转cre T2代纯合植株所配组合的77个杂交F1植株中，56个植株表现潮霉素敏感。分子分析证实在这些对潮霉素敏感的植株中hpt基因已经被剔除。
- 陈松彪刘翔彭海英巩万奎王锐王锋朱祯
- 关键词：CRE/LOX基因剔除抗虫无选择标记
- 一种基因编辑系统及应用其对植物基因组进行编辑的方法
- 本发明公开了一种基因编辑系统及应用其对植物基因组进行编辑的方法。该基因编辑系统包括sgRNA转录单元，以及由顺次连接的来源于玉米的DMC1基因启动子和Cas9基因组成的DMC1p‑Cas9转录单元，其中，sgRNA识别的...
- 韩方普冯超王锐柏晗袁静张晶苏汉东刘亚林郭宪瑞
- 转sck基因水稻目的基因表达特异性
- 2006年
- 对转sck基因水稻T6代生长发育不同时期的不同组织部位sck基因在转录水平和翻译水平的表达特异性进行了研究，结果显示，转基因植株的叶片、茎部、根部sck基因在转录水平和翻译水平均有表达，其中叶片的表达水平明显高于茎部和根部；在成熟的种子中CpTI外源蛋白含量低于检测低限（〈0．014μg／ml），不能被定量。不同生长发育时期叶片的sck基因表达水平在分蘖期、幼穗发育期、开花结实期差别不大，幼苗期的表达水平明显低于其他时期。可见，所转入的外源基因已经能在T6代转基因水稻的不同生长时期的不同组织部位稳定表达，并且在不同时期的根、茎、叶中可以定量检测。
- 王锐巩万奎卓勤杨晓光朱祯
- 国际组织和世界各国对转基因食品的管理被引量：16
- 2007年
- 转基因食品蕴藏着巨大商机,并且与公众健康密切相关,国际组织和各国政府十分重视,出台了一些列相关的法律、法规。本文介绍了转基因食品的发展现状,综述了国际组织和一些国家对转基因食品的管理经验和我国转基因食品管理的法律、法规,对借鉴国际经验,完善我国转基因食品的管理制度,确保我国转基因食品安全性和加快转基因食品商品化历程具有意义。
- 王锐杨晓光
- 关键词：转基因食品公众健康食品安全
- 转sck基因水稻中CpTI蛋白的细胞内定位
- 2008年
- 目的转sck基因水稻中CpTI蛋白细胞内定位。方法运用免疫组织化学方法,应用免疫电镜技术,观察在转sck基因水稻根部细胞、叶片细胞中CpTI蛋白的定位情况。结果在转sck基因水稻根尖部细胞的内质网中和内质网附近有胶体金颗粒大量存在,细胞的质体、叶绿体、细胞质、细胞核中也散在一些胶体金颗粒,在对照水稻的根部内质网和其他部位未发现胶体金颗粒存在。水稻叶片细胞由于有叶泡的存在,内质网不明显,但是细胞核、细胞质和质体内也发现胶体金颗粒,在非转基因水稻的叶片中未发现胶体金颗粒。结论转sck基因水稻中的CpTI蛋白在内质网中大量存在,在细胞的质体、叶绿体、细胞质、细胞核中也存在少量CpTI蛋白。
- 王锐卓勤朴建华杨晓光
- 关键词：细胞定位免疫电镜技术
- 转基因水稻中标记基因hpt表达行为的研究被引量：6
- 2005年
- 目的探讨转sck基因水稻中标记基因hpt的表达行为。方法对经潮霉素抗性筛选的转基因水稻4个生长发育时期、不同组织的hpt基因进行PCR检测;提取4个生长发育时期PCR检测阳性植株的叶片总RNA,以hpt基因片断为探针进行Northernblot分析,并对不同生长时期的叶片和成熟期的茎部、根部、种子进行双夹心ELISA检测,以同种非转基因水稻M86相应时期的相应部位作阴性对照。结果转基因水稻不同生长时期、不同组织中均能扩出特异的hpt(832bp)片段;Northernblot结果显示,在4个生长发育时期的hpt基因在转录水平均有表达,但是表达水平较低,且不同生长发育时期之间无明显差别;ELISA检测结果显示HPT蛋白在4个生长时期的叶片和成熟期的茎部和根部均有表达,种子中HPT蛋白的含量不超过负对照,不能被检测。结论不同生长发育时期的叶片中hpt基因在转录水平和翻译水平表达均能稳定表达。成熟的种子中不含有可检测水平的HPT蛋白。
- 王锐陈松彪卓勤杨丽琛朱祯杨晓光
- 转基因作物标记蛋白HPT融合表达载体构建、纯化及复性研究被引量：2
- 2007年
- 目的潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)是转基因作物中广泛应用的抗生素标记基因,本研究构建该基因的融合表达载体,以期得到足量纯化的HPT蛋白,为该外源蛋白的进一步安全性评价奠定基础。方法将hpt基因克隆到线性表达载体pET41 EK/LIC中,得到该基因的融合表达载体pET41EK/HPT,将pET41EK/HPT载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,沉淀中的包涵体进行了稀释复性、柱上复性和N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解稀释复性等复性研究及活性测定、标签切除、N端测序等工作。结果融合蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,各复性方法表明SKL溶解稀释复性得到的蛋白在活性及产率方面明显高于其他两种方法,利用该方法每升培养物可获得78mg活性HPT融合蛋白,纯度约为93%,经肠激酶切割后,得到的蛋白与天然HPT蛋白N端氨基酸序列完全相同。结论利用本研究方法可得到在活性、分子量及氨基酸序列等方面与天然HPT蛋白一致的目的蛋白。
- 卓勤田园王锐朴建华杨晓光
- 关键词：安全性评价包涵体复性
- 转sck基因水稻种子中外源蛋白含量的检测被引量：3
- 2005年
- 目的 检测转sck基因水稻T6代种子中外源蛋白CpTI及HPT的表达量。方法 对转基因水稻种子进行PCR检测;取外源基因PCR检测阳性植株的叶、茎杆、根部、种子等不同部位对CpTI和HPT蛋白表达进行Westernblot分析,并对PCR检测阳性植株的种子进行双夹心ELISA检测,以同种非转基因水稻M86种子作对照。结果 在转sck基因水稻T6代种子中扩增出sck和hpt基因;Westernblot结果显示转基因水稻的叶片、茎杆和根部的蛋白出现特异的杂交条带,种子蛋白中未出现特异杂交条带。ELISA检测结果显示,转基因水稻种子中CpTI蛋白低于双夹心ELISA的检测低限(<14 μg L) ,HPT蛋白没有被检出。结论 转基因水稻种子中CpTI蛋白含量低于检测低限,不能被定量,并且不含有可检测水平的HPT蛋白。
- 王锐陈松彪巩万奎陈小萍杨丽琛朱祯杨晓光
- 关键词：种子蛋白安全性水稻
- 一种基因编辑系统及应用其对植物基因组进行编辑的方法
- 本发明公开了一种基因编辑系统及应用其对植物基因组进行编辑的方法。该基因编辑系统包括sgRNA转录单元，以及由顺次连接的来源于玉米的DMC1基因启动子和Cas9基因组成的DMC1p‑Cas9转录单元，其中，sgRNA识别的...
- 韩方普冯超王锐柏晗袁静张晶苏汉东刘亚林郭宪瑞
- 文献传递
