胡水旺
- 作品数：32 被引量：91H指数：5
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- JNK信号通路对NaAsO_2诱导NIH3T3细胞中hnRNP K蛋白聚集体形成的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:观察核不均一核糖核蛋白(hnRNP)K的表达与定位以及亚砷酸钠(NaAsO2)刺激NIH3T3细胞的反应情况及氧化应激变化,探讨JNK信号通路在hnRNP K蛋白聚集体形成中的作用。方法:构建重组载体pcDNA3-hnRNP K-HA,转染NIH3T3细胞,荧光显微镜观察内源性hnRNP K在细胞中的表达与定位,以及在NaAsO2不同刺激时间该蛋白聚集体的形成情况,并利用活性氧(ROS)检测试剂盒测定胞内ROS水平;给予JNK、MEK、PI3K/Akt、NF-κB和核转运等5种信号通路的抑制剂预处理后,观察聚集体的变化情况。结果:重组质粒构建正确,荧光显微镜观察显示hnRNP K主要定位于胞核中,而重组质粒转染NIH3T3细胞后,可见胞内有蛋白聚集体形成并随NaAsO2刺激时间的延长而递增,且过表达hnRNP K可抑制NaAsO2刺激细胞生成ROS;JNK信号通路抑制剂SP600125明显抑制聚集体的形成。结论:hnRNP K主要定位在NIH3T3细胞的胞核中,胞浆少量分布;NaAsO2可诱导NIH3T3细胞形成hnRNP K蛋白聚集体,此聚集体可抑制胞内ROS生成,且该聚集体的形成有赖于JNK介导的信号通路。
- 樊启黄姜枫胡水旺唐昭亮姜勇
- 关键词：亚砷酸钠聚集体JNK信号通路
- 内毒素休克小鼠肝脏线粒体差异蛋白质组的鉴定
- 脓毒症(sepsis)是感染引起的全身炎症反应症候群，脓毒症的严重并发症-感染性休克(septic shock)是创伤、烧伤和手术后病人最主要的死亡原因之一。统计表明，临床半数的脓毒症是由革兰氏阴性菌(Gram-nega...
- 胡水旺
- 关键词：脓毒症感染性休克蛋白质组学
- 文献传递
- MEK信号通路对H_2O_2诱导细胞角蛋白7在细胞中表达与定位的影响被引量：3
- 2013年
- 目的细胞角蛋白7(Cytokeratin-7,Krt7)与肿瘤发展以及炎症反应密切相关,氧化应激在此过程中扮演着重要的角色,文中旨在通过构建小鼠Krt7的真核表达载体,并观察其在NIH 3T3细胞中的表达、定位以及在氧化应激反应下的变化情况。方法提取C57/BL6小鼠肺组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Krt7编码序列,构建重组质粒pcDNA3-Krt7-HA。经脂质体转染NIH 3T3细胞,采用Western blot检测Krt7表达,免疫荧光检测其在细胞中的表达、定位以及在过氧化氢(H2O2)刺激下的变化情况。结果重组质粒构建成功。Western blot显示该质粒能够在NIH 3T3细胞中有效表达,免疫荧光检测表达产物主要分布在细胞质中,随着H2O2刺激时间的增加细胞内颗粒状蛋白聚集物的形成愈发明显且在60 min处发生入核现象。MEK通路抑制剂PD98059可明显抑制这一过程。结论成功构建了带HA标签的Krt7真核表达载体,该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,H2O2诱导Krt7在NIH 3T3细胞内的形态及定位变化依赖于MEK介导的信号通路。
- 唐昭亮胡水旺樊启黄姜枫姜勇
- 关键词：细胞角蛋白分子克隆信号通路
- 重组人CRP的表达纯化及其内化进入HeLa细胞的观察被引量：2
- 2008年
- 目的:构建人C-反应蛋白(CRP)原核表达载体,表达纯化his-EGFP-CRP蛋白,观察其能否内化进入HeLa肿瘤细胞。方法:利用特异性引物,从p91023/CRP载体上将编码人CRP的基因序列亚克隆到原核表达载体pET14b/MCS-EGFP-(N)36上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化,梯度透析复性,并与HeLa细胞孵育,利用荧光显微镜观察其内化入胞。结果:PCR、双酶切和测序鉴定表明,pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒构建正确;转化实验发现,该质粒在BL21(DE3)中能够被大量诱导表达;蛋白纯化及荧光显微镜观察结果表明,复性后的表达产物可结合于HeLa细胞膜,孵育一定时间后,可定位于胞质及胞核。结论:成功地构建了带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人CRP原核表达载体,该载体能够在大肠杆菌BL21(DE3)中被诱导表达重组蛋白his-EGFP-CRP,纯化复性后的重组人CRP能与HeLa肿瘤细胞结合,并能内化入胞,移位入核。
- 陈腾祥李红梅胡水旺赵明哲刘亚伟刘靖华姜勇
- 关键词：C反应蛋白蛋白质复性HELA细胞
- 异甘草酸镁治疗慢性乙型肝炎前后血浆外泌体差异蛋白质组学筛选被引量：5
- 2021年
- 目的筛选慢性乙型肝炎患者经异甘草酸镁(MgIG)治疗前后血浆外泌体的差异蛋白质组。方法分别采集36例MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后的血浆标本(2 ml/例),利用超速离心方法提取血浆外泌体,利用Nanosight NS300颗粒粒度分析仪检测外泌体颗粒的浓度和内径。随机各抽取3例MgIG治疗前后组的血浆外泌体,裂解后提取蛋白,利用胰蛋白酶消化后,用液相色谱串联质谱技术进行label-free差异蛋白质组学分析,筛选出变化倍数1.5倍以上的差异蛋白。利用酶联免疫吸附测定技术对感兴趣差异蛋白的表达量进行验证(n=30)。计量资料的比较采用配对样本均数的t检验。结果提取的外泌体平均颗粒浓度为2.2×10^(9)个/ml,平均粒径为(107±52)nm,与理论血浆外泌体大小值相符,证明成功提取了血浆外泌体。蛋白质组学结果显示,MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后相比较,共筛选出153个差异蛋白,包括85个上调蛋白和68个下调蛋白。酶联免疫吸附实验结果显示,慢性乙型肝炎患者MgIG治疗后组和治疗前组相比较,血浆外泌体中肝细胞生长因子激活剂和肝细胞生长因子样蛋白浓度差异有统计学意义(P<0.05)。肝细胞生长因子激活剂在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为(45.9±9.4)μg/ml,在MgIG治疗后组为(13.9±2.0)μg/ml。肝细胞生长因子样蛋白在MgIG治疗前组血浆外泌体中浓度为(23.4±4.9)μg/ml,在MgIG治疗后组为(13.8±2.2)μg/ml。酶联免疫吸附实验结果均与蛋白质组学结果一致。结论本研究成功筛选出MgIG治疗慢性乙型肝炎患者前后血浆外泌体差异蛋白质组,为研究MgIG治疗慢性乙型肝炎的分子机制提供实验依据。
- 肖二辉胡水旺宁会彬康月花殷辉毛重山康谊尚佳
- 关键词：慢性乙型肝炎血浆外泌体蛋白质组学异甘草酸镁
- 小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离
- 2009年
- 目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。
- 夏高晓李红梅陈丽赵明哲胡水旺王继刚孙明晶邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词：磷酸化蛋白质组双向凝胶电泳肝脏质谱
- C反应蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建人C反应蛋白(CRP)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法利用带HA反向互补序列碱基的特异性引物,从p91023/CRP载体上将编码人CRP的基因序列亚克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;并使用Westernblot和细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-CRP在NIH3T3细胞中的表达及其蛋白定位进行分析。结果PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-CRP真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞膜和核周边内质网的区域。结论成功构建了带HA标签的人CRP真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究CRP的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
- 陈腾祥李红梅胡水旺刘靖华姜勇
- 关键词：C反应蛋白基因表达蛋白定位
- PXD101诱导人前列腺癌细胞PC3凋亡的线粒体信号通路被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨PXD101(又称belinostat)诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的线粒体通路。方法:PXD101以不同刺激时间和剂量处理PC3细胞,CCK-8法检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)和Bax;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。结果:PXD101能以时间和剂量依赖的方式抑制PC3细胞的存活(P<0.05),流式细胞术检测结果表明PXD101处理后PC3细胞的凋亡率明显增加(P<0.01)。PXD101能时间依赖性致线粒体膜电位降低和Bcl-2蛋白含量明显下降,Bax蛋白含量上升,促进线粒体释放Cyt C蛋白,caspase-3活性明显增强。结论:PXD101通过线粒体途径诱导人前列腺癌细胞系PC3细胞凋亡。
- 胡明珠李磊曹蕾张一梅罗海华胡水旺刘爱华姜勇
- 关键词：前列腺癌线粒体PC3细胞
- 植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位
- 2010年
- 目的构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-Phyh在NIH3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
- 孙明晶胡水旺夏高晓姜勇
- 关键词：蛋白定位
- 两种细胞系中内源性C-反应蛋白的表达和定位分析
- 2008年
- 目的观察在不同刺激条件下,不同组织来源细胞系中内源性C-反应蛋白(CRP)的表达及定位情况。方法培养人单核细胞系THP-1和人肝细胞系LO2,用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞;使用内毒素(LPS)对两种细胞进行刺激,同时收集LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清加入到LO2细胞的培养液中进行孵育,运用Western blot和免疫细胞化学技术检测上述刺激条件下CRP在两种细胞中的表达及其定位情况。结果Western blot检测表明,在未受到刺激时,两种细胞的裂解物中均检测到一定量的CRP,在细胞培养液上清中没有检测到;受到LPS刺激后,THP-1细胞内的CRP表达增加,且在培养液上清中也检测到少量的CRP,但对于LO2细胞,刺激前后CRP的表达和分泌没有明显变化;当用LPS刺激后的THP-1细胞的培养液上清处理LO2细胞后,在LO2的细胞裂解物和培养液上清中均检测到CRP。免疫细胞化学检测结果显示,整个THP-1细胞中均可检测到标记的CRP的荧光信号,其中以核内的最明显,LPS刺激可以增加该蛋白的表达,使其核定位更加明显;在LO2细胞中,CRP定位于核外,LPS刺激对其表达和定位没有明显影响,而给予LPS刺激的THP-1细胞培养液上清处理后,LO2细胞中标记CRP的荧光信号增强,尤其以细胞膜上的增强明显。结论LPS不能直接上调肝细胞LO2内的CRP表达,却可以诱导THP-1表达分泌某些细胞因子来增加CRP的合成分泌;CRP在肝细胞系LO2和单核-巨噬细胞系THP-1中的定位有明显不同,在LO2中主要表现为分泌型蛋白的定位特征,而在THP-1细胞中却有明显的核定位表现。
- 陈腾祥李红梅胡水旺杨婷刘亚伟刘靖华姜勇
- 关键词：C-反应蛋白蛋白定位单核细胞佛波酯
