裴宗飞
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸭补体C3d基因cDNA的克隆、鉴定及原核表达被引量：1
- 2009年
- 补体C3d是补体系统(Complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。利用RT-PCR技术从鸭肝脏总RNA中扩增出C3d cDNA,克隆测序证实所得为C3d基因。然后将其连接至表达载体PGEX-6P-1,转化入E.coliBL21并用IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到高效表达,W estern-b lotting进一步证实目的蛋白为C3d。本研究可为开发利用鸭C3d奠定基础。
- 裴宗飞马雪云马耀华牛钟相
- 关键词：原核表达
- 鸭病毒性肝炎C3d新型分子佐剂基因疫苗的研究
- 鸭病毒性肝炎/(DVH/)是雏鸭的一种烈性传染病,该病可由Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型不同类型的鸭肝炎病毒/(DHV/)引起,目前我国流行的主要是鸭Ⅰ型病毒肝炎。DHV结构蛋白编码区/(P1区/)可以编码病毒特异性结构蛋白VP0/(VP...
- 裴宗飞
- 关键词：VP1基因基因疫苗免疫效果
- 文献传递
- 鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
- 2011年
- 为了提取鸭补体C3d基因,并对其进行克隆鉴定,试验采用微量提取法提取了鸭肝脏细胞总RNA,通过RT-PCR扩增出补体C3d基因的cDNA,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定后克隆到pMD18-T载体上,构建C3d-pMD18-T重组质粒,转化大肠杆菌,酶切鉴定后进行序列测定。结果表明:鸭补体C3d基因序列与原鸡和AA肉鸡的相似性较大,其同源性分别为87.6%和87.5%;而与人、猴、猪、牛、羊、鼠等哺乳动物差异性较大,同源性分别为46.9%、46.9%4、8.7%4、9.1%4、9.1%4、7.5%。其主要变化发生在与CR2受体结合的区域。鸭该区为29个氨基酸,与鸡相同,但比哺乳动物多1个氨基酸,说明补体C3d结构具有种属特异性。
- 马建平马雪云裴宗飞
- 关键词：RT-PCR
- 山东泰安地区致病性猪沙门菌氨基糖苷类耐药基因aph(3)′-Ⅱa的PCR扩增与序列分析被引量：2
- 2008年
- 目的研究沙门菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性并分析其耐药基因aph(3′)-Ⅱa的序列。方法对19株致病性猪沙门菌的氨基糖苷类抗生素耐药性进行检测;对其质粒上的aph(3′)-Ⅱa基因进行PCR扩增,选取其中任意一株(WWS171)的PCR阳性产物进行耐药基因aph(3′)-Ⅱa的序列分析。结果沙门菌对氨基糖苷类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%;耐药基因aph(3′)-Ⅱa经PCR扩增后在13株沙门菌的质粒上出现582bp的特异性产物,与药敏试验结果的阳性符合率为68.4%,具有较高的检出率;与GenBank上发表的AF078924.1、AF188331.1、AY333434.1、AY598820.1、DQ842000.1的耐药基因aph(3′)-Ⅱa的序列完全相同。结论aph(3′)-Ⅱa的PCR检测对氨基糖苷类抗生素耐药性具有较高的特异性,aph(3′)-Ⅱa基因是决定本试验中临床分离株氨基糖苷类抗生素耐药的主要基因,为氨基糖苷类抗生素耐药性的分子流行病学监测提供了依据。
- 王俊红牛钟相张文娟李晓静张永宁裴宗飞
- 关键词：沙门菌PCR
- 鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定
- 提取鸭肝细胞总RNA，通过RT-PCR扩增出补体C3d基因的cDNA，琼脂糖凝胶电泳鉴定后直接克隆到pMD18-T载体，构建C3d-pMD18-T重组质粒，转化大肠杆菌，酶切鉴定后进行序列测定。结果显示与已发表的各种哺乳...
- 裴宗飞张文娟牛钟相
- 关键词：鸭病防治基因克隆免疫佐剂基因疫苗
- 文献传递
- 禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用被引量：6
- 2009年
- 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。
- 张文娟裴宗飞牛钟相
- 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒REV原核表达间接ELISA
- REV囊膜糖蛋白的表达、纯化及单克隆抗体的制备和初步鉴定被引量：1
- 2010年
- 以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性、复性以及牛凝血酶酶切后得到纯化的目的蛋白env,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光和Western blotting等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了env蛋白,并获得了4株稳定分泌针对env蛋白的杂交瘤细胞(3-2A11,1-2B3,1-2D11,3D2),其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG2b,IgG2b,IgG2b,IgG1。ELISA检测,对应腹水的效价分别为1∶105,1∶2.1×105,1∶2.2×105,1∶105。Western blotting结果显示4株抗env的mAb均能特异性识别env蛋白,间接免疫荧光分析则表明只有3-2A11和3D2这2株mAb能与REV全病毒特异性反应。
- 张文娟裴宗飞牛钟相
- 关键词：REV囊膜糖蛋白单克隆抗体
- 沙门氏菌invH基因的序列分析与分子检测被引量：2
- 2008年
- 根据沙门氏菌的invH基因序列设计1对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门氏菌标准菌株和5种非沙门氏菌株进行PCR扩增,结果3种标准沙门氏菌株均扩增出479 bp的特异条带,非沙门氏菌皆无特异带扩增。对3种标准株的扩增片段进行克隆及序列分析,证实沙门氏菌的invH基因序列比较保守;对19种地方分离沙门氏菌进行PCR特异性检测,结果有16株扩出特异性条带,表明本研究建立的沙门氏菌检测方法具有较高的特异性。
- 王俊红刘高生牛钟相张文娟裴宗飞
- 关键词：沙门氏菌克隆分子检测
