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Hedgehog信号通路调控胰腺癌细胞上皮间质转化的作用机制被引量：8: 2011年; 目的观察特异性阻断hedgehog（Hh）信号通路对胰腺癌Panc一1细胞上皮间质转化（EMT）过程的影响，探讨其分子机制。方法设计并合成针对Smoothened（SMO）基因特异性的RNA干扰靶点，运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默SMO基因表达以阻断人胰腺癌Panc-1细胞Hh信号通路。应用Matrigel／Transwell法检测阻断Hh信号通路后胰腺癌细胞侵袭能力的变化，应用实时PCR及Western印迹方法检测阻断Hh通路后Panc一1细胞EMT标志物E—cadhefin、N—cadhefin、B．catenin、Vimentin、Fibronectin等的表达变化；并检测EMT调控因子Snail、Slug等的表达变化。结果稳定干扰SMO基因表达阻断Hh信号通路后，人胰腺癌Panc-1细胞侵袭能力明显降低，P=0．020；上皮表型标志物E．cadherin表达明显上调，而间质表型Vimentin、Fibronectin、N—cadhenn等的表达水平显著下调，P值分别为0．020、0．001、0．031和0．022；与对照组相比，SMO干扰组细胞中转录因子Snail、Slug的表达水平均显著下调，P值分别为0．018和0．016。结论应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默SMO基因阻断人胰腺癌细胞中Hh通路活性，可显著抑制Panc-1细胞EMT过程，其机制与下调转录因子Snail及Slug表达有关。; 谢昆郝昆田孝东常志刚秦昌富杨尹默; 关键词：胰腺肿瘤肿瘤 HEDGEHOG 上皮间质转化

靶向抑制EGFR联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响及机制: 目的研究靶向抑制EGFR联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖及凋亡的协同作用,初步探讨二者间的协同作用机制。方法设计并合成针对人EGFR基因特异性siRNA,构建慢病毒pFU-GW-RNAi载体,感染人胰腺癌...; 秦昌富田孝东郝昆杨尹默; 关键词：胰腺癌细胞 HEDGEHOG 靶向抑制癌细胞增殖信号通路; 文献传递

Hedgehog信号通路在胰腺癌发病机制中的研究进展被引量：2: 2011年; Hedgehog信号通路是调节动物胚胎正常发育的经典信号通路之一,主要由信号分子Hedgehog（Hh）、膜受体Patched（Ptch）、Smoothened（Smo）及某些中间信号传导分子和核转录因子Glioma-associated oncogene homolog（Gli）等组成.Hedgehog信号通路与胰腺胚胎正常发育密切相关,但在正常成熟胰腺组织中无表达或仅低表达.随着对Hedgehog信号通路研究的不断深入,发现Hedgehog信号通路传导异常可导致胰腺癌的发生,并与肿瘤侵袭、转移密切相关.该文对Hedgehog信号通路的构成、传导途径以及在胰腺癌发生中的机制进行综述.; 郝昆谢学海杨尹默; 关键词：HEDGEHOG信号通路胰腺癌信号转导

Hedgehog信号通路调控胰腺癌细胞上皮间质转化的机制研究: 目的研究特异性阻断hedgehog(Hh)信号通路对胰腺癌Panc-1细胞上皮间质转化(EpitheliumMesenchymal Transition,EMT)过程的影响,探索其分子机制。方法设计并合成针对Smooth...; 谢昆郝昆田孝东常志刚秦昌富杨尹默; 关键词：胰腺癌细胞 HEDGEHOG 信号通路上皮间质转化; 文献传递

靶向抑制表皮生长因子受体对胰腺癌细胞上皮-间质转化的影响及机制被引量：8: 2013年; 目的观察靶向抑制表皮生长因子受体（EGFR）对人胰腺癌细胞（PANC-1）上皮-间质转化（EMT）过程的影响，探讨其机制。方法设计并合成针对EGFR基因特异的RNA干扰靶点，运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默人胰腺癌PANC-1细胞EGFR基因表达。应用划痕试验及基质胶侵袭试验检测EGFR干扰后细胞运动、侵袭能力的变化；应用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）及Westernblot法检测转染后EMT相关标志物E-钙粘蛋白（E-Cadherin）、N-钙粘蛋白（N—Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤维粘连蛋白（Fibronectin）等的表达变化，并检测EMT相关转录因子的表达变化；应用细胞免疫荧光共聚焦显微镜检测上述蛋白的定位及细胞形态的变化。结果应用慢病毒介导的RNA干扰技术可特异性抑制人胰腺癌PANC-1细胞EGFR基因的表达。抑制EGFR后PANC-1细胞的运动及侵袭能力显著降低；上皮表型标志物E-Cadherin表达明显上调，间质表型N-Cadherin、Vimentin、Fibronectin等的表达显著下调；与对照组比较，EGFR干扰组细胞由纺锤形变成立方形，伪足消失；EGFR干扰组中EMT相关转录因子Snail及Slug表达显著下调。结论应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默EGFR基因的表达，可显著抑制PANC-1细胞的EMT过程，其机制可能与下调转录因子Snail及Slug表达有关。; 常志刚韦军民秦昌富郝昆田孝东谢昆谢学海杨尹默; 关键词：胰腺癌表皮生长因子受体上皮-间质转化 E-CADHERIN

Hedgehog信号通路与胰腺癌被引量：1: 2010年; 胰腺癌是预后最差的消化道恶性肿瘤，10余年来随分子生物学研究水平的提高及方法学的进步，对胰腺癌发生、发展过程中的机制研究日趋深入，在寻求新的早期诊断标志及丰富治疗途径方面，显现出深远影响。做为人类胚胎发育重要的调控因子——Hedgehog信号通路，在完成胰腺等器官正常发育后，在成熟组织中已无表达或仅为低表达。; 谢学海郝昆杨尹默; 关键词：胰腺肿瘤信号传导

沉默胰岛素样生长因子1类受体基因对胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响被引量：3: 2011年; 目的应用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术建立稳定低表达胰岛素样生长因子1类受体（IGF1R）基因的人胰腺癌Panc-1细胞株，并观察其对吉西他滨化疗敏感性的影响。方法设计并合成3条针对IGF1R基因特异性的RNA干扰靶点，构建慢病毒pFU—GW-RNAi载体，经包装后转染293T细胞，获得病毒上清并测定其相应滴度；感染Panc-1细胞，通过实时定量聚合酶链反应（real—timePCR）鉴定RNA干扰效率；筛选出基因沉默效率最高的慢病毒感染人胰腺癌Panc-1细胞，获得稳定转染细胞株。噻唑蓝（MTT）比色法检测干扰IGF1R后Panc-1细胞对吉西他滨敏感性的变化。裸鼠移植瘤模型检测干扰IGF1R前后体内成瘤能力及吉西他滨对移植瘤生长的抑制作用。结果在Panc—1细胞中成功建立低表达IGF1R基因的细胞株，吉西他滨对Panc-1细胞的半数抑制剂量（IC50）从（0．774±0．001）mg／L下降到（0．330±0．003）mg／L，Panc-1细胞对吉西他滨的敏感性增加了2．35倍。裸鼠移植瘤模型中，干扰IGF1R基因后皮下种植瘤生长缓慢，联合应用吉西他滨后对肿瘤生长的抑制作用进一步增加。结论慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默IGF1R基因，能显著增强胰腺癌细胞株Panc-1对吉西他滨的敏感性。; 郝昆田孝东秦昌富杨尹默; 关键词：吉西他滨胰腺癌慢病毒

靶向抑制EGFR联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖的影响及机制被引量：2: 2012年; 目的观察靶向抑制表皮生长因子受体（EGFR）联合阻断Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖及凋亡的协同作用，探讨二者间的协同作用机制。方法设计并合成针对人EGFR基因特异性siRNA，构建慢病毒pFU-GW—RNAi载体，感染人胰腺癌Panc-1细胞，获得稳定转染细胞株。Real time PCR检测Shh和Glil的表达情况；克隆形成实验和MTI＂法检测细胞增殖情况；流式细胞技术检测细胞凋亡情况；Western印迹方法检测ERK和AKT磷酸化水平变化；裸鼠移植瘤模型检测移植瘤生长抑制情况。结果慢病毒介导的RNAi显著抑制Panc-1细胞EGFR的表达；靶向抑制EGFR后Panc-1细胞对环巴明的敏感性显著增加，细胞增殖能力下降，其半数抑制剂量（IC50）从（2．978±0．336）斗m0L／L下降到（1．698±0．057）μmoL／L，P〈0．05；联合处理组细胞早期凋亡比率高达38．75％，显著高于单独抑制EGFR组（17．65％）及对照组（3．02％），P〈0．05；裸鼠移植瘤实验结果显示联合处理组移植瘤体积（394．8±87．5）mm^3显著低于抑制EGFR组（594．7±86．1）mm^3和单独应用环巴明处理组（771．3±82．9）mm^3；克隆形成实验结果显示联合处理可以进一步抑制细胞增殖；抑制EGFR后胰腺癌细胞ERK和AKT磷酸化水平较对照组显著降低，联合应用环巴明处理后二者磷酸化水平均进一步下降。结论靶向抑制EGFR联合环巴明处理后胰腺癌细胞体内外增殖能力均进一步被抑制，细胞凋亡率进一步增加；其协同机制可能部分与调控ERK和AKT磷酸化水平相关。; 秦昌富田孝东郝昆杨尹默; 关键词：表皮生长因子受体 HEDGEHOG 细胞增殖

胰腺癌基础研究的几个热点问题被引量：8: 2012年; 胰腺癌是恶性程度最高的消化系统肿瘤，其发病率逐年上升，2010年美国胰腺癌新增患者43140例，同时36800例患者死于此症，发病率与病死率相当，在因肿瘤致死疾患中居第4位。我国虽无相关流行病学资料，大致状况与美国近似。手术虽可治愈此症，但80％以上的患者在确诊时癌肿已转移或侵袭到胰外器官而无法根治性切除，; 杨尹默郝昆田孝东; 关键词：胰腺癌消化系统肿瘤流行病学资料根治性切除恶性程度病死率

Hedgehog信号通路对胰腺癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制探讨: 目的研究特异性阻断Hedgehog(Hh)信号通路对胰腺癌细胞增殖和侵袭的影响,并探索其可能的分子机制。方法应用RT-PCR方法检测Hh信号通路成员Shh、Ptch1、Smo、Gli1在胰腺癌三种细胞系PANC-1,AS...; 郝昆田孝东杨尹默; 关键词：胰腺癌细胞信号通路 HEDGEHOG; 文献传递

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郝昆

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