马家乐
- 作品数：11 被引量：26H指数：3
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪流行性腹泻在亚洲流行的时空进化分析
- 猪流行性腹泻( porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的以呕吐、水样腹泻和脱水为主要特征的猪肠道疾...
- 孙敏马家乐汪鸣宋文超张炜姚火春
- 关键词：PEDV全基因组分析
- 氨基酸代谢变化引起的c-di-GMP稳态波动对大肠杆菌致病过程中菌毛合成的影响
- 2022年
- [目的]细菌能够合成多种信号分子,调控自身在各种营养状态或应激条件下的生长代谢及毒力发挥。第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)在致病菌感应氨基酸饥饿(AAS)的过程中发挥重要作用,调控多种生理活动并显著影响其毒力发挥。本文旨在研究c-di-GMP在尿道致病性大肠杆菌(UPEC)尿道定殖及毒力发挥过程中的作用。[方法]采用尿液培养UPEC,结合转座子突变技术筛选氨基酸代谢相关生长缺陷基因,采用基因敲除技术、特定氨基酸回补及小鼠尿道感染模型验证尿液生长及尿道定殖缺陷表型;借助表达谱数据、RT-qPCR及β-半乳糖苷酶活性测定法筛选并鉴定受氨基酸饥饿影响的毒力基因及c-di-GMP相关基因;通过多基因敲除及回补技术、凝胶阻滞试验(EMSA)鉴定c-di-GMP对毒力基因的调控机制。[结果]精氨酸、异亮氨酸及蛋氨酸代谢失衡引起UPEC在尿液中生长缺陷,尿道定殖能力显著下降及局部c-di-GMP稳态破坏;YciR及YcgF相关c-di-GMP体系失衡显著下调菌毛基因簇表达;YciR通过调节子MlrA直接调控P菌毛基因簇表达;YcgF通过下游配对调节子YcgE直接调控P菌毛基因簇表达。[结论]c-di-GMP感应尿道定殖过程中的特定氨基酸饥饿,调控菌毛等黏附因子合成,促进UPEC完整毒力发挥。
- 孙敏孙敏任方勋白乾坤泮欣铭马家乐马家乐
- 关键词：I型菌毛
- 致仔猪脑膜炎猪链球菌的分离鉴定被引量：10
- 2019年
- 旨在从脑膜炎症状仔猪的脑组织及其他脏器中分离鉴定病原菌。采集患病仔猪脏器分离病原,通过PCR及血清凝集试验鉴定其种属及血清型;透射电镜观察分离株的超微结构;经多序列位点分型分析,鉴定其ST型;通过测定最小抑菌浓度分析其耐药性;经小鼠攻毒试验分析其毒力。结果:最终从患脑膜炎仔猪的脑组织中分离到一株猪链球菌,血清型为9型,将其命名为WH1609。电镜结果显示WH1609有荚膜结构。多位点序列分型结果表明WH1609属于一个新的ST型。耐药性试验结果表明WH1609对多种抗生素耐药;对万古霉素、青霉素及氨苄西林敏感。BALB/c小鼠毒力试验测得LD50为1.89×10~2 CFU·mL^(-1),病理组织学观察结果显示WH1609感染小鼠可出现明显的脑组织病变。本研究从患脑膜炎的仔猪脑组织中分离到一株猪链球菌9型强毒株,其在BALB/c小鼠的半数致死量为已发现的猪链球菌强毒株的10~5倍以上,对猪链球菌致脑膜炎分子机制的研究有重要的意义。
- 陈申申马家乐张新锋曲向阳潘子豪潘子豪
- 关键词：猪链球菌脑膜炎
- 链球菌引发宿主中毒性休克综合症相关机制的研究进展被引量：1
- 2021年
- 某些链球菌在感染过程中,会引发宿主系统性的细胞因子风暴,病程进展迅速,致死率高,即发生链球菌性中毒性休克综合症(streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。最初认为STSS由链球菌的超抗原(superantigen,SAg)引发,但近年来也有不依赖超抗原的STSS病例报道,致病机制较为复杂。本文主要对不依赖链球菌超抗原引发STSS的机制研究进行介绍,包括链球菌感染后宿主细胞中炎症信号通路的激活、炎性小体和细胞焦亡的发生、促炎细胞因子的释放以及细胞因子风暴等。同时,对研究链球菌STSS常采用的细胞和动物模型进行总结,旨在为实验室开展STSS的机制研究奠定理论基础。
- 张郁敏马家乐赵焱刘广锦
- 关键词：链球菌炎症信号通路促炎细胞因子
- 自转运丝氨酸蛋白酶在猪源肠外致病性大肠杆菌致病过程中的作用
- 2023年
- 为了探究猪源肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的致病机制,以自转运丝氨酸蛋白酶(SPAT)为关注点,构建了单基因和双基因缺失株,通过亚细胞定位、红细胞凝集及黏附、黏蛋白裂解和小鼠感染等试验,探究SPAT1和SPAT2在猪源ExPEC致病过程中的作用。结果显示:猪源ExPEC强毒菌株PU-1分别在染色体及毒性质粒上编码SPAT1和SPAT2;通过间接免疫荧光和Western blot检测发现2个蛋白表达于细菌表面且可分泌到培养上清液;血凝试验和红细胞黏附ELISA检测发现,SPAT1和SPAT2可引起红细胞凝集,并黏附于红细胞表面;黏蛋白裂解试验和流式细胞术分析发现,SPAT1和SPAT2可裂解宿主呼吸道黏蛋白以及中性粒细胞表面糖蛋白CD44和CD93;小鼠感染试验发现,SPAT1和SPAT2双基因缺失导致菌株毒力显著降低,且小鼠血液载菌量大幅下降,中性粒细胞数量明显上升。本研究鉴定的2个SPAT可作为防控ExPEC引起猪肠道外感染的潜在药物靶标,为防控猪群ExPEC感染方案的制定提供参考。
- 章雅婷泮欣铭陈蓉马家乐姚火春
- 关键词：毒力免疫逃避
- 牛源多杀性巴氏杆菌的分离与初步鉴定被引量：11
- 2018年
- 【目的】本研究旨在对引起犊牛呼吸道综合征的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,分析其亲缘关系和毒力基因的分布情况。【方法】收集2017年8月至2018年4月疑似患有犊牛呼吸道综合征的病牛鼻拭子进行细菌分离培养,对菌落形态和染色疑似巴氏杆菌的菌株进行16S rRNA测序和血清型鉴定,选择巴氏杆菌7类23种毒力基因,筛查临床分离株的毒力基因的分布。【结果】从8个省份的237份病料中分离出31株多杀性巴氏杆菌,分离率为13.1%。16S rRNA测序分析表明31株A型多杀性巴氏杆菌属于同一亚群,其序列同源性与中国分离株HB01以及国外分离株USDA-ARS-USMARC-60712、USDA-ARS-USMARC-60214、ATCC 43137以及36950亲缘关系较近。对分离出的31株A型多杀性巴氏杆菌的7类共23种毒力基因鉴定,结果显示31株多杀性巴氏杆菌所携带的毒力因子大多分布在17–19个,且集中度较高。【结论】A型多杀性巴氏杆菌为犊牛呼吸道综合症的主要流行血清型,通过对多杀性巴氏杆菌的临床分离株进化树和毒力基因分析,内蒙古、黑龙江、新疆、山西以及河北的7株分离株进化来源于同一分支,且均缺失毒力基因tadD和hgbA及携带毒力基因hsf-1,提示着其亲缘关系可能与其携带的特定毒力基因存在一定相关性。该研究为犊牛呼吸道综合征的病原学调查和多杀性巴氏杆菌流行病学调查提供了参考数据。
- 林立山黄秦才灵杰马家乐姚火春潘子豪
- 关键词：多杀性巴氏杆菌血清型鉴定毒力基因RRNA基因
- 银鲫外周血细胞形态学观察
- 2010年
- 应用常规瑞氏吉姆萨(G-W)染色和Feulgen反应,对银鲫外周血涂片进行了光镜观察,显微摄影后进行图像测量和分析。进一步用流式细胞仪进行了DNA含量的分析。结果显示,银鲫的红细胞在血液中存在幼稚和衰老现象,红细胞核残影广泛存在,白细胞可以区分出中性粒细胞、单核细胞、血栓细胞和淋巴细胞。嗜酸粒细胞极少,嗜碱粒细胞未被检出。Feulgen反应检测DNA含量为4.71 pg,流式细胞检测DNA含量为5.39 pg。
- 冷欣彦马家乐尹珺伊田菁黄国庆
- 关键词：银鲫血细胞显微结构
- 猪链球菌WapA毒素功能鉴定
- 2024年
- 胞壁相关蛋白A(WapA)广泛存在于革兰阳性菌中,在细菌致病过程中发挥重要作用。为探究WapA的致病机制和致病作用,本研究对猪链球菌WUSS351株基因组进行分析,发现了2个编码WapA毒素的基因簇,编码的毒素分别命名为WapA1和WapA2,在GenBank数据库中检索到更多的WapA1和WapA2同源体,通过对它们的C端和N端结构域的系统进化分析,发现猪链球菌中广泛存在编码该毒素的基因簇,提示其可能具有重要的功能。后续通过构建多个WapA毒素的pBAD-His和pBAD-pleB重组质粒在大肠杆菌中表达WapA,结合生长曲线与活菌计数结果发现,WapA1-1对大肠杆菌具有周质毒性,而WapA1-2、WapA1-3、WapA2-1、WapA2-3对大肠杆菌具有胞质毒性,初步确定了WapA的毒性作用。进一步构建wapA1-1、wapA1-2、wapA2-1、wapA2-3基因缺失株(ΔwapA1-1、ΔwapA1-2、ΔwapA2-1、ΔwapA2-3),并通过竞争试验和动物感染试验发现,WapA可介导猪链球菌WUSS351株的竞争生长,并在猪链球菌致病过程中发挥重要作用。本研究结果对于猪链球菌的致病机理研究具有指导意义,为后续疾病治疗和预防提供参考。
- 范汝慧白乾坤泮欣铭刘嘉楠马家乐于勇姚火春
- 关键词：猪链球菌毒性致病力
- 奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌耐药特性分析被引量：3
- 2023年
- [目的]通过分析212株奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌分离株的耐药特性和超广谱β-内酰胺酶(ESBL)产生情况,了解该类致病菌对新型抗生素的耐药现状,防范其对公共卫生安全产生的潜在威胁,为防控肺炎克雷伯菌引起的奶牛乳房炎提供参考。[方法]通过对分离株的细菌形态学观察、khe基因的PCR检测和16S rRNA序列测定筛选并鉴定肺炎克雷伯菌株,利用K-B琼脂平板扩散法和微量肉汤稀释法评估肺炎克雷伯分离株的耐药性。[结果]肺炎克雷伯菌耐药率由高到低依次为头孢吡肟(5.7%)、环丙沙星(4.7%)、头孢他啶(4.2%)、美罗培南(2.8%)、厄他培南(0.5%)、亚胺培南和替加环素(0%)。在对替加环素中度敏感菌株中均检测到ramR基因,但未发现tetX和ramA基因。在对喹诺酮类抗生素耐受菌株中,有2株检测到qnrA基因,6株检测到qnrB基因,23株检测到qnrS基因,未发现qnrD基因。在对β-内酰胺类抗生素耐受菌株中,SHV-1、SHV-11、SHV-34、SHV-76、SHV-171、TEM-1、CTX-M-3、CTX-M-14、CTX-M-15、CTX-M-27、CTX-M-55、CTX-M-244、ACT-6、ACT-31、DHA-1、CMY-174、CMY-81和LEN-5检出率分别是6.56%、9.84%、1.64%、3.28%、1.64%、27.87%、8.20%、1.64%、3.28%、1.64%、9.84%、4.92%、3.28%、1.64%、9.84%、1.64%、1.64%和1.64%,未检测到上述耐药基因的突变体。[结论]本试验分离的肺炎克雷伯菌对新型头孢类抗生素产生耐药性,部分菌株具有多重耐药性,甚至对碳青霉烯类抗生素产生耐药。该结果提示需防范新型抗生素耐药菌株的产生和传播,以免引发公共卫生安全危害,对防控肺炎克雷伯菌引起的奶牛乳房炎提出了新要求。
- 高兴赵柯杰于勇潘子豪马家乐姚火春
- 关键词：奶牛乳房炎肺炎克雷伯菌耐药分析
- 大肠杆菌vgrG基因岛编码多样效应子介导细菌间竞争生存
- Ⅵ 型分泌系统是一种纳米分子机器,通过交付效应蛋白进入靶细胞从而参与细菌间竞争及致病进程。尽管vgrG 基因岛的概念很早就已经被提出,但是基于vgrG 基因岛鉴定T6SS 效应因子的方法一直被忽视。大肠杆菌编码三套不同的...
- 马家乐孙敏潘子豪陆承平姚火春
