马张妹
- 作品数：24 被引量：42H指数：3
- 供职机构：复旦大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 消除对乙型肝炎病毒免疫耐受性的研究
- 1996年
- 乙型肝炎的治疗至今仍是世界上尚未解决的难题。我国约有10％人口感染乙型肝炎病毒(HBV)。根据我国多数患者是幼龄感染HBV,对病毒不产生有效免疫而处于免疫耐受状态,故不易清除病毒而发展为慢性肝炎或长期携带者。为研究消除免疫耐受途径,需要建立类似幼龄感染的免疫耐受动物模型。
- 闻玉梅熊思东张维徐永耀吴祥甫李平洋汪垣马张妹翟为溶刘应广
- 关键词：免疫耐受性免疫耐受状态鸭乙型肝炎病毒感染者慢性肝炎清除病毒
- 人胆固醇酯合成酶－1基因启动子1
- 本发明提供人胆固醇酯合成酶-1基因启动子1。通过PCR方法筛选得到了含有人胆固醇酯合成酶-1(ACAT-1)基因组DNA片段的P1噬菌体质粒阳性克隆，进一步亚克隆、序列测定和转录活性分析鉴定了人胆固醇酯合成酶-1基因启动...
- 张大元李伯良奥尼尔·李宋保亮何崇尧马张妹李夏璐
- 文献传递
- 一种新乙型肝炎病毒表型耐药分析方法的建立
- 2014年
- 目的 建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法 首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果 成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论 本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.
- 李新艳陈良马张妹毛日成黄玉仙张继明
- 关键词：抗药性表型
- 乙型肝炎病毒致病相关基因的研究
- 闻玉梅何丽芳林旭武力姚忻马张妹刘芳何建文
- 本研究综合了乙肝病毒株的致病相关基因，为防治乙肝病毒持续感染提供了新的切入点。研究了乙肝病毒基因组结构与功能的全基因技术平台，并对HBV致病基因的研究分别从PreCS及P基因作了研究。从HBV全基因组研究了从乙肝病毒携带...
- 关键词：
- 乙型肝炎病毒前C区、C启动子区、前S2区基因突变与慢性肝病的相关性被引量：21
- 2006年
- 近年研究发现，乙型肝炎病毒（HBV）前C区nt1896位G→A、C启动子区（CP）nt1762、nt1764双突变、以及前S区基因突变与慢性肝炎患者病情活动和慢性化、疾病严重程度有一定关系。为此，我们分别检测无症状HBV携带者、慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者血清HBV DNA基因序列，对前C、CP、前S2区域的突变情况与HBV不同感染状态的关系作一探讨。
- 佘为民马张妹王吉耀闻玉梅
- 关键词：乙型肝炎病毒前C区基因突变慢性肝病无症状HBV携带者慢性肝炎患者疾病严重程度
- 阿德福韦耐药乙型肝炎病毒毒株生物学特性的研究被引量：4
- 2009年
- 目的体外研究阿德福韦（ADV）耐药相关变异对于HBsAg产生及HBV复制等生物学特性的影响。方法收集12例在ADV治疗过程中出现病毒学突破的慢性乙型肝炎患者血清，对其HBV反转录（RT）区进行PCR扩增和测序分析。对其中4例患者的HBV进行全基因扩增、测序、序列分析及克隆。将优势株的HBV全基因插入PHY106载体，构建成1．1拷贝HBV基因组表达载体，进而转染Huh7细胞，E1．ISA法检测细胞培养上清液中HBsAg及HBeAg水平，了解不同ADV耐药相关变异类型对HBsAg分泌的影响。抽提转染细胞内病毒核心颗粒HBVDNA，实时荧光定量PCR方法检测HBVDNA水平。将rtA181T／sW172＊变异株与rtA181非变异株质粒按不同比例混合，共转染Huh7细胞，检测上清液中HBsAg及细胞内病毒核心颗粒HBVDNA水平。结果在12例出现病毒学突破的患者中，10例出现ADV耐药相关位点变异，以rtA181变异为主，其中5例有rtA181T变异，4例为rtA181T／s＋rtN236T变异。将含rtA181T／sW172＊变异的质粒转染细胞后，上清液中不能检测到HBsAg，而含其他变异类型的质粒转染细胞后，上清液中HBsAg和细胞内病毒核心颗粒HBVDNA水平与非变异株相似；含不同变异的HBV临床分离株转染后的细胞内核心病毒颗粒HBVDNA水平未见明显差异。将rtA181T／sW172＊变异株及rtA181非变异株的质粒共转染后，随着rtA181非变异株比例的增加，上清液中HBsAg水平也逐渐增高，但细胞内核心病毒颗粒HBVDNA水平无明显差异。结论rtA181变异是ADV耐药相关性变异的主要类型，rtA181T变异较多见。rtA181T／sW172＊变异株可引起HBsAg分泌障碍，但rtA181非变异株可纠正rtA181T／sW172＊变异株的HBsAg分泌障碍。不同类型的ADV耐药相关变异对HBV的复制能力无显著影响。
- 李新艳尹有宽张继明毛日成马张妹翁心华
- 关键词：阿德福韦腺嘌呤病毒复制转染
- 克隆乙型肝炎病毒DNA在肝与肾细胞中复制与表达的研究
- 1999年
- 目的 对比研究在体外细胞培养系统中乙型肝炎病毒（ Ｈ Ｂ Ｖ） 在肝、肾细胞中的复制与表达。方法 用克隆 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ（ｐ１７７ 、ｐ３ ．８ Ⅱ、ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９） 分别转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 与２９３ 细胞系；ｐ１７７ 与ｐ３ ．８ Ⅱ还转染了原代人胚肾细胞。培养后收集转染细胞培养上清液，用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法检测 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ ；提取转染细胞的 Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｒ Ｎ Ａ，进行 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交检测细胞内 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ。结果 转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 均有高水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 与 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交显示特异的 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 与 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ 杂交信号。而转染２９３ 细胞后， Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 仅出现很低水平表达； Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 和 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交除ｐ Ｃ Ｍ Ｖ３ ．９ 转染细胞出现明显的 Ｈ Ｂ Ｖ 特异杂交信号外，其他为阴性或微弱阳性。转染原代人胚肾细胞均无 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 与 Ｈ Ｂｅ Ａｇ 表达。结论 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 在肝细胞中可以复制与表达，在肾细胞中仅有低水平的病毒抗原表达而无复制，只?
- 张蕾青张德强姚忻马张妹何丽芳
- 关键词：乙型肝炎病毒抗原表达DNA克隆
- 我国慢性乙型肝炎及肝癌患者中乙型肝炎病毒核心基因内缺失突变株的研究被引量：2
- 1999年
- 目的 研究乙型肝炎（ 乙肝） 病毒核心基因内缺失突变株（ Ｃ Ｉ Ｄ） 在慢性乙肝及肝癌患者中存在的状态及意义。方法 提取标本 Ｄ Ｎ Ａ 作 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹及杂交，或用 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增核心基因，分析片段大小，部分作克隆及测定。结果 ３５ 例慢性乙肝患者血清中３０ 例（８５ ％ ） 核心基因为阳性。３０例中３ 例（１０ ％ ） 除有正常大小片段外，还有相对小分子质量片段。１５ 例肝癌患者肝癌组织 Ｐ Ｃ Ｒ Ｃ 基因阳性为９ 例（６０ ％ ） ，未见小片段。肝癌组织中２ 份存在 Ｃ Ｉ Ｄ（２／９ ，２２ ％ ） 。克隆测序证明有大小不等的缺失突变，自６ ～３２４ 个核苷酸不等的符合框架的缺失，位于 Ｃ 基因的中段。结论 我国慢性乙肝患者中 Ｃ Ｉ Ｄ 株阳性率仅１０ ％ ，不是构成我国多数乙肝患者持续性病毒感染的主要原因。肝癌组织中 Ｃ Ｉ Ｄ 的阳性率高于乙肝患者血清的阳性率， Ｃ Ｉ Ｄ 在肝癌中的作用值得进一步研究。
- 栾秋云马张妹张菁成伟忠闻玉梅
- 关键词：乙型肝炎乙型肝炎病毒肝肿瘤CID
- 鸭乙型肝炎病毒PreS蛋白片段在大肠杆菌中的高效表达及初步应用被引量：2
- 1994年
- 将编码鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）前表面抗原（ＰｒｅＳ）第９至１６３位（１５５个）氨基酸序列的４６５ｂｐＤＮＡ片段，克隆入ＰＬ启动子控制下并含有修饰型ｃＩｔｓ８５７基因的表达载体中。利用载体的起始密码子和创建的终止密码子（ＴＡＧ）构建含部分ＤＨＢＶＰｒｅＳ基因的表达质粒。在大肠杆菌ＡＲ６８ｐＲＫ２４８中，本质粒经温敏诱导，表达产物为１７．５ｋＤａ，约占细菌总蛋白的５％。用Ｗｅｓｔｅｍｂｏｌｔ分析，本表达产物可与特异性ＤＨＢＶＰｒｅＳ／Ｓ抗体反应。以表达产物组建固相基质抗体抗原复合物，可部份逆转对ＤＨＢＶ的免疫耐受状态。
- 马张妹李伯良熊思东闻玉梅
- 关键词：乙型肝炎病毒前S蛋白
- 乙肝病毒多聚酶调节复制新位点的发现
- 闻玉梅林旭马张妹丁建平袁正宏王勇翔何丽芳姚忻
- 该课题由国家自然科学基金委及上海市科委资助。乙肝病毒的复制与病毒的致病性密切相关。病毒复制本身虽不致损伤机体，但高滴度的病毒及其表达的抗原可激发机体损伤性免疫应答。乙肝病毒的复制酶是决定病毒复制的关键酶。1.该项目基于乙...
- 关键词：
- 关键词：乙肝病毒病毒复制DNA多聚酶
