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刘克义: 作品数：61 被引量：150H指数：7; 供职机构：山东省寄生虫病防治研究所更多>>; 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金World Health Organization更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学机械工程更多>>

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编码刚地弓形虫棒状体蛋白2与主要表面抗原1基因的克隆和表达(英文): 2006年; 目的构建编码弓形虫RH株棒状体蛋白2(ROP2)和主要表面抗原1的重组表达质粒,纯化和复性的融合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段,分别克隆入pMD18-T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR、双酶切和测序鉴定,将pMD-ROP2中ROP2基因片段经EcoRⅠ和HindⅢ酶切、连接等反应,亚克隆入pET-30a(+)原核表达载体,构建pET-ROP2载体,然后再将pMD-P30中的P30基因片段与经同样NcoⅠ和EcoRⅠ酶切的pET-30a(+)载体连接,经含卡那霉素的LB平板筛选,酶切和PCR鉴定。阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS-PAGE进行鉴定。大量的表达融合蛋白经纯化和复性后,用Western blot分析。结果从弓形虫RH株DNA中扩增出特异的ROP2和P30基因片段,成功克隆出pET-ROP2和pET-P30载体。结论成功构建了pET-ROP2和pET-P30重组体,获得纯化和复性的弓形虫ROP2和P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。; 张佃波高红刚崔勇魏庆宽宰德富李瑾柏雪莲赵立江刘克义; 关键词：刚地弓形虫 P30基因 WESTERN BLOT

刚地弓形虫P30、ROP2复合基因的克隆及表达: 弓形虫是一种重要的呈世界性分布的机会性致病原虫,可引起人畜共患病。成人感染后多无症状, 但孕妇、婴儿和免疫功能低下者感染后危害极大。畜牧感染该虫也会给畜牧业造成严重的经济损失。弓形虫生活史复杂,各期均有与致病和免疫有关的...; 张佃波刘克义; 关键词：刚地弓形虫克隆; 文献传递

抗弓形虫感染ROP2核酸疫苗的研究被引量：5: 2005年; 目的研究弓形虫核酸疫苗,以用于弓形虫病的防治。方法根据ROP2基因序列,设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物,扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm-T载体,然后再亚克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗;应用裸pc-DNA3-ROP2免疫小鼠,通过免疫学指标的检测,评价小鼠的免疫应答反应,最后应用弓形虫RH株攻击实验,评价出该疫苗的有效保护率、安全性和在人类及畜类的应用价值。结果以ROP2基因为模板,PCR扩增出1.7kbDNA条带,与预想结果一致;将扩增DNA回收并成功的克隆了ROP2(PUCm-T-ROP2),然后亚克隆并构建了pc-DNA-ROP2重组体,通过酶切、PCR扩增和基因测序证明亚克隆的重组子正确,ROP2扩增基因包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列;在应用疫苗免疫接种小鼠结果显示,疫苗接种能使小鼠产生强烈的细胞、体液免疫反应;攻击实验结果显示,实验组小鼠的存活时间明显延长,并且开始死亡时间明显延迟(P<0.001),实验组9只小鼠中有1只长期存活;在实验的整个过程中,没有发现小鼠对免疫接种的毒性和异常反应。结论该疫苗免疫原作用强,具有很好的开发应用价值,目前可在动物群体中试验应用。; 韩广东魏庆宽张佃波李瑾崔勇李桂萍王洪法刘玉冰刘克义; 关键词：弓形虫核酸疫苗免疫保护作用

质粒型pBF_4DNA探针用于疟疾诊断的研究被引量：3: 1992年; 质粒pBF_4DNA 用^(32)P 标记后,与现场采集的50份疟疾病人血样进行斑点杂交,9份镜检为恶性疟者杂交全为阳性,与镜检符合率为100%;41份镜检为间日疟的标本,有3份出现杂交弱阳性;10份正常人血两者检查均为阴性。DNA 探针检测恶性疟原虫的灵敏度为0.001%原虫血症。血样存放2年之久,仍可用于 DNA 杂交。; 刘克义黄炳成程义亮; 关键词：DNA探针疟疾

抗弓形虫感染DNA疫苗的研究: 目的研究一廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因的引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2...; 魏庆宽李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇王用斌张佃波王洪法付斌刘玉冰宰德福黄炳成刘克义韩广东; 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护作用; 文献传递

大劣按蚊人工感染恶性疟原虫的实验研究被引量：5: 1994年; 作者采用改进的人胎盘膜饲血法，以3例恶性疟患者离体肝素防凝血感染4批大劣按蚊，结果均感染成功，子孢子感染率1.7～64.0%，子孢子进腺时间为10～12天，高峰期在15～16天。; 陈锡欣梁泽堂刘克义蔡贤铮李承邰黄炳成; 关键词：恶性疟原虫

刚地弓形虫侵入宿主细胞的机制(英文): 2006年; 弓形虫是一种世界性分布的细胞内寄生原虫,其中间宿主范围广泛,能感染包括人在内的众多哺乳动物,目前尚无有效的防治方法。弓形虫入侵宿主细胞是一个连续、复杂的过程,包括在细胞表面和细胞外基质的滑移运动、附着和主动侵入宿主细胞,以及纳虫泡的形成,已经证明有许多成分参与这一过程。本文就这方面做一简要综述。; 高红刚张佃波刘克义; 关键词：弓形虫入侵机制

山东疟疾诊断和检测30年研究回顾: 2004年; 韩广东邓绪礼刘克义; 关键词：疟疾间日疟流行区发病时期监测技术

刚地弓形虫P30(SAG1)重组抗原的高效表达和体外纯化(英文): 2005年; 目的表达和纯化弓形虫P30(SAG1)蛋白,为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制奠定基础。方法PCR法从弓形虫基因组DNA中扩增P30基因片段,P30产物克隆到表达质粒pET-30a(+)构建重组载体,将其转化到DH5α中。经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后,阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。大量的诱导表达产物用SNBC3S NTA Resin方法纯化并进行复性。结果扩增的P30基因片段为750bp,重组表达融合蛋白量单位为30ku,与理论值相符。结论成功构建重组体,获得纯化和复性的弓形虫主要表面抗原P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。; 张佃波宰德富公茂庆李瑾魏庆宽崔勇黄炳成刘克义; 关键词：刚地弓形虫 P30基因

应用基因探针进行蚊内疟原虫子孢子检测的研究: 刘克义陈锡欣黄炳成程义亮蔡贤铮; 该成果通过构建恶性疟原虫基因（DNA）文库，从中选出原虫特异的克隆，提取其重组质粒DNA，标记后作为探针，检测置于硝酸纤维素膜上的蚊虫，最后通过酶显色系统，指示蚊体内有无疟原虫。实验结果表明，克隆pBF40DNA探针与各...; 关键词：; 关键词：基因探针

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