刘永青
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 地钱素C衍生物F41对子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响被引量：1
- 2013年
- 目的对地钱素C(MC)羟基衍生物进行筛选,寻找具有高抗肿瘤活性的MC衍生物,并初步探讨其抗肿瘤的细胞与分子生物学机制。方法用MTT法观察56种MC羟基衍生物对子宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,筛选其中细胞毒作用最强的MC衍生物,并比较其与MC对HeLa细胞存活的抑制作用。用倒置显微镜、DAPI染色和DNA梯带检测其对细胞凋亡的影响。用流式细胞术检测其对细胞周期的影响。用Western印迹法检测其对细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。结果在56种MC衍生物中,F41对HeLa细胞毒性最强,抑制HeLa细胞存活的IC50为(11.31±2.13)μmol·L-1,明显低于MC〔IC50为(17.19±3.28)μmol·L-1〕(P<0.01)。F41和MC与HeLa细胞作用24,48和72h,F41对HeLa细胞存活的抑制作用均明显强于MC(P<0.05)。形态学和DNA梯带检测显示,F41处理后,HeLa细胞皱缩变小,有空泡和凋亡小体出现,胞核浓缩变小,DNA电泳呈梯状条带。流式细胞分析显示,F41 15μmol·L-1处理HeLa细胞24h,G2/M期细胞占总细胞的比例为(43.8±3.0)%,明显高于对照组的(13.1±1.6)%(P<0.01);G1期细胞比例为(34.8±3.8)%,明显低于对照组的(63.6±5.5)%(P<0.01)。Western免疫印迹结果表明,F41可使HeLa细胞内磷酸化细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶1水平降低,细胞周期蛋白B1和P53蛋白表达增多。结论 F41可诱导HeLa细胞凋亡,抑制HeLa细胞分裂,其抗肿瘤活性可能强于MC。
- 魏玉平郭元芳孙高英王小元刘永青胡中一毕文祥
- 关键词：细胞周期细胞凋亡
- 过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对增强人结肠癌化疗敏感性的作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对人结肠癌LOVO细胞化疗敏感性的影响。方法体内实验:建立人结肠癌LOVO细胞裸鼠移植瘤模型,应用罗格列酮、5-Fu及两药联用连续灌胃给药两周,每2天测量瘤体的最长径和最短径,计算肿瘤体积和抑制率;体外实验:采用MTT法检测罗格列酮、5-Fu及两药联用对LOVO细胞生长的抑制作用,Hoechst染色检测细胞核形态,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting法检测Cyclin A1、Cyclin E1和Cdk2蛋白的表达变化。结果体内实验:罗格列酮、5-Fu及其联合用药组对裸鼠移植瘤抑制率分别为67.97%、74.9%和80.49%,两药联合为相加作用;体外实验:罗格列酮能够增强5-Fu对细胞的生长抑制作用,并呈现剂量和时间依赖性;细胞周期检测显示,5-Fu联合罗格列酮使S期细胞增多;与对照组相比,5-Fu处理组及联合用药组Cyclin A1表达量下调显著(P<0.01),与5-Fu组相比,联合用药组Cyclin A1表达量下调显著(P<0.01);与对照组相比,实验各用药组Cyclin E1、Cdk2表达量均下调显著(P<0.01),与5-Fu组相比,联合用药组Cyclin E1表达量下调显著。结论罗格列酮能够增强5-Fu的化疗效果,其机制与其诱导细胞凋亡及S期细胞周期阻滞有关。
- 褚倩倩许刚任桂杰徐霞胡中一刘永青苑辉卿田克立
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体Γ罗格列酮LOVO细胞
- 自噬在双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用机制被引量：1
- 2013年
- 目的探讨自噬在天然萜类、双联苄类化合物诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法以前期筛选得到的具有抑制肿瘤细胞增殖活性的三萜化合物ST52和乙酰基-11-酮基-β-乳香酸(AKBA)、双联苄化合物H50、F41、H48和Riccardin D(RD)处理稳定表达GFP-LC3的人胶质瘤细胞株U87,荧光显微镜观察GFP-LC3的聚集斑点,确定化合物的自噬诱导作用。Western blot检测人激素非依赖前列腺癌细胞株PC-3细胞中的自噬相关蛋白LC3、Atg5、Beclin1和p62的表达以及凋亡标志蛋白多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的剪切情况。自噬抑制剂或siRNA阻断Atg5表达后进行化合物处理,流式细胞技术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞的增殖活力,确定自噬对化合物诱导凋亡的影响。结果筛选结果显示,双联苄类化合物均有不同程度的自噬诱导作用,其中RD的作用较强。RD促进PC-3细胞中LC3-I向LC3-II的转化,中等强度诱导Atg5和Beclin1的表达,并导致自噬底物p62的降解。抑制自噬后,能增加RD诱导的细胞凋亡与PARP剪切,但凋亡抑制剂Z-VAD-FMK并不影响RD对LC3-II的诱导程度。结论 RD诱导PC-3细胞产生具有保护性作用的自噬现象,抑制自噬可提高RD的抗肿瘤作用。
- 祝芳华刘永青娄红祥
- 关键词：自噬凋亡U87细胞PC-3细胞
- 网脊衣酸上调p21^(CIP1)蛋白诱导前列腺癌细胞周期阻滞的作用分析
- 2013年
- 目的探讨天然化合物网脊衣酸(RB)对前列腺癌LNCaP细胞的周期阻滞作用及分子机制。方法细胞经RB处理后,流式细胞术检测细胞周期的变化;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞增殖情况;Western blotting检测p53、p21CIP1(p21)及细胞周期相关蛋白的表达;实时定量PCR检测p21的mRNA水平的变化;荧光素酶报告基因检测RB对p21启动子活性的影响;转染p53突变体质粒检测p53对p21表达的影响;基因敲除p21检测其对细胞周期的作用。结果 RB可使LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,抑制周期相关的Cyclin D、Cyclin E、Cdk 4和p-Rb表达。同时,RB可时间依赖性地诱导LNCaP细胞中野生型p53表达、促进其入核,同时上调p21的mRNA和蛋白水平。阻断p53的活性后,可抑制RB介导的p21表达及其启动子活性。而敲除p21基因,可降低RB所介导的G0/G1期阻滞,同时G2/M期细胞数量增加。结论 RB通过激活p53,在转录水平上调靶基因p21的表达,导致前列腺癌LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞的增殖。
- 高逢彬司曼飞刘永青牛蕾蕾苑辉卿
- 关键词：G1期阻滞P21蛋白前列腺癌细胞
