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肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因(TRAP1)的克隆: 人肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(Tumor necrosis factor receptor-associated proteinⅠ,TRAP1)存在于线粒体基质内,是热休克蛋白90(Heat shock protein ...; 张嘉萱; 关键词：分子生物学基因克隆耐药株; 文献传递

人热休克蛋白90AB1-cDNA基因克隆及其原核表达载体的构建以及蛋白表达纯化: 本研究旨在克隆人热休克蛋白90AB1基因,构建其原核表达载体pET28a-hHsp90AB1,为研究hHsp90AB1的基因治疗奠定实验基础,表达纯化得到蛋白为后续的Hsp90AB1抑制剂体外筛选提供构效关系的模型。按I...; 刘凯胜刘忠王绍祥王蕊刘劲芸张嘉萱王一飞; 关键词：生物化学与分子生物学原核表达载体表达纯化; 文献传递

人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化被引量：2: 2011年; 应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor nec-rosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA。选择NdeⅠ和XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上。重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序。测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1。通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高。结果表明,在39℃条件下,OD600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6 h,目的蛋白的表达量最高。该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。; 张嘉萱卢嘉欣王蕊赵振岭韩波彭鑫磊陈伟刘忠任哲王绍祥马岩岩刘凯胜王一飞; 关键词：克隆原核表达 BL21

人热休克蛋白90AB1基因克隆、原核表达、中试发酵及纯化: 2011年; 通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+)-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础。提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA。以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体外扩增,胶回收纯化hHsp90AB1。将hHsp90AB1及pET-28a(+)质粒经NdeⅠ和SalⅠ双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化DH5α,经复苏后,在含卡那霉素的LB固体养基上筛选出阳性克隆。挑取LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即pET28a-hHsp90AB1体外重组成功,命名为pET28a(+)-hHsp90AB1。重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导表达,并对表达条件优化,以及通过SDSA-PAGE和Western blotting分析均表明Hsp90AB1蛋白得到了正确的表达,且表达产物以可溶性形式存在,优化条件下蛋白表达量约占菌体总蛋白13%。接种到18 L发酵罐中试发酵,表达产物经Ni-NTA凝胶亲和层析,蛋白纯度达到98%。; 刘凯胜王绍祥刘忠张嘉萱张庶民王一飞; 关键词：克隆原核表达纯化

硫氧还蛋白还原酶抑制剂MF通过Trx-ROS途径诱导HeLa细胞凋亡: 硫氧还蛋白还原酶是调节细胞内氧化还原平衡的关键分子,通过多种途径调控细胞生长和增殖,是国际上高度关注的新型抗肿瘤靶标。TrxR抑制剂MF可诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,研究其作用机制可为寻找和开发TrxR靶点抗宫颈癌药物提...; 刘忠王蕊王绍祥刘凯胜张嘉萱刘劲芸王一飞; 关键词：硫氧还蛋白还原酶细胞凋亡抗肿瘤

Hsp90抑制剂17-AAG作用于细胞后可诱导其突变蛋白的表达: 抑制热休克蛋白Hsp90是一种非常重要的分子伴侣,它为癌症治疗提供了一个发展迅速、具有潜在优势的研发平台。人Hsp90蛋白包括四种标准亚型,分别为Hsp90α、Hsp90β、Grp94和Trap-1。我们在研究Hsp90...; 王绍祥王晓刘忠王蕊刘凯胜张嘉萱王一飞; 关键词：肿瘤 HSP90 17-AAG 突变

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对K562/ADR耐药细胞株生长和凋亡的影响被引量：5: 2010年; 目的研究热休克蛋白90抑制剂17-AAG对耐药白血病细胞生长的影响及其诱导的细胞凋亡作用,为白血病的治疗提供新的研究思路。方法采用MTT法检测17-AAG对细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系;激光共聚焦DA-PI染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡、周期及P-糖蛋白(P-gp)的变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果 17-AAG能够明显抑制K562/ADR细胞的生长,大量细胞的核内DNA发生断裂,细胞核边缘化,加药组细胞凋亡率与对照组相比明显增高;加药后细胞被阻滞在G1期,procaspase-3和cleaved Caspase-3表达升高。结论 17-AAG可以通过诱导耐药细胞株K562/ADR的凋亡而抑制细胞生长。P-gp和Caspase-3的表达与凋亡事件的发生具有一定的相关性。; 王蕊刘忠王绍祥张嘉萱熊盛徐石海王一飞; 关键词：K562/ADR HSP90抑制剂凋亡 17-AAG P-糖蛋白

人TRAP1基因的克隆及TrxR抑制剂IG3诱导宫颈癌细胞死亡的机制研究: 第一部分：人TRAP1基因的克隆目的： 1．构建人TRAP1重组表达载体，并原核表达重组人TRAP1蛋白。 2．对重组菌的诱导表达条件进行优化，使重组蛋白TRAP1的表达量最高。方法： 1．应用RT-PCR技术，从K...; 张嘉萱; 关键词：克隆硫氧还蛋白还原酶宫颈癌 CASKI SIHA; 文献传递

GST-NDPK-A融合蛋白的原核表达及体外互作蛋白的检测: 2013年; 旨在了解核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)的功能,通过GST-Pull down技术寻找与其存在体外相互作用的蛋白。以含有目的片段的质粒pBV-NDPK-A为模板,扩增出相应的目的基因片段,将其插入带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达质粒。双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定融合蛋白的表达,并与高表达细胞系A549孵育,进行GST-Pull down试验,并通过LC-MS/MS质谱鉴定体外与NDPK-A相互作用的蛋白。结果显示,成功构建GST-NDPK-A的原核表达载体;在大肠杆菌BL21中诱导表达出可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,获得了有生物活性的GST-NDPK-A融合蛋白,GST-Pull down试验和质谱鉴定结果发现NDPK-A与Fussel-18、Rrp12体外存在相互作用。; 吕芬刘忠银兴峰赵振岭陈妙娟张嘉萱陈伟钱垂文熊盛; 关键词：表达纯化相互作用

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张嘉萱