杨安宁 作品数:78 被引量:188 H指数:8 供职机构: 宁夏医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 一般工业技术 更多>>
血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除鼠构建及其表型功能鉴定 2022年 背景:PDHA1基因是有氧呼吸链中不可或缺的基因,血管内皮细胞的能量代谢与很多疾病有关。构建血管内皮细胞PDHA1基因敲除鼠,有助于研究能量代谢在血管内皮细胞相关疾病中的作用。目的:繁育血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除小鼠并进行表型鉴定。方法:将PDHA1^((iΔEC/iΔEC))小鼠与PDHA1^((iΔEC/-))小鼠进行合笼繁育,获得更多的PDHA1^((iΔEC/iΔEC))小鼠进行后续实验。利用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因鉴定,然后利用RT-PCR和Western blot检测敲除PDHA1后与能量代谢相关基因的mRNA及蛋白表达,利用VE-Cadherin与PDHA1双重免疫荧光判断PDHA1基因条件性敲除后PDHA1蛋白表达变化。结果与结论:利用琼脂糖凝胶电泳实验成功检测出子代小鼠基因型,包括PDHA1^((iΔEC/iΔEC))15只和PDHA1^((iΔEC/-))2只小鼠;RT-PCR和Western Blot检测发现PDHA1在转录水平和翻译水平都发生了下降,参与糖酵解途径的HK2蛋白及mRNA表达上升,参与有氧磷酸化途径方向IDH蛋白及mRNA表达下降;VE-cadherin和PDHA1双重免疫荧光共染色检测到PDHA1的表达下降。 郝玮 孙岳 杨安宁 刘太阳 宝瑞 刘耀阳 王秋实 王梦 畅思容 李媛媛 刘志宏关键词:血管内皮细胞 FABP4对THP-1单核源性泡沫细胞内胆固醇的影响 2014年 目的观察并分析脂肪酸结合蛋白4(Fatty acid binding protein, FABP4)对THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇的影响。方法将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,油红O染色检测泡沫细胞的形成。运用FABP4腺病毒质粒(Ad-FABP4)感染泡沫细胞,设立空病毒对照组(Ad-GFP)和正常对照组(control),采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测泡沫细胞感染Ad-FABP4后其mRNA表达变化;采用酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量变化,观察FABP4对THP-1单核源性泡沫细胞胆固醇的影响。结果油红O染色检测泡沫细胞模型建立成功,qRT-PCR检测发现泡沫细胞感染Ad-FABP4后FABP4 mRNA水平较Ad-GFP组升高了10.37倍(P<0.05),差异有统计学意义。采用酶法测定TC、FC、CE含量的变化,发现与正常对照组比较,Ad-FABP4组泡沫细胞内TC和CE含量分别升高0.69倍和4.06倍,差异有统计学意义(P<0.05),FC含量无明显改变。结论FABP4可能参与THP-1单核源性泡沫细胞内胆固醇沉积过程。 李世强 周龙霞 哈丽娜 韩学波 杨安宁 田珏 姜怡邓关键词:泡沫细胞 游离胆固醇 胆固醇酯 D-半乳糖对大鼠肺组织MMP-2表达水平及HA、LN和COL3含量的影响及相关性分析 被引量:2 2017年 目的探讨D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中对大鼠肺纤维化、肺组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平及透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和Ⅲ型胶原(COL3)含量的影响,并分析MMP-2与HA、LN和COL3的相关性。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和D-半乳糖组。采用HE染色法观察两组大鼠肺组织形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测两组大鼠肺组织MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的改变;免疫组织化学法分析肺组织MMP2蛋白的表达水平;ELISA法检测大鼠肺组织中HA、LN和COL3的含量,并分析相关性。结果 HE染色结果发现D-半乳糖组大鼠肺组织发生明显的纤维化改变;qRT-PCR结果显示肺组织中MMP-2 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);免疫组织化学法和Western blot结果显示肺组织中MMP-2蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05);COL3和LN含量高于对照组,而HA含量低于对照组(P<0.05)。相关性分析结果显示,大鼠肺组织中MMP-2表达水平与COL3、LN呈正相关(r=0.2741,P<0.05;r=0.2841,P<0.05),而与HA呈负相关(r=-0.1782,P<0.05)。结论 D-半乳糖诱导大鼠衰老过程中可以引起肺组织发生纤维化改变,同时增加大鼠肺组织MMP-2表达及COL3和LN含量,降低HA的含量,且MMP-2与COL3、LN和HA之间具有相关性,可能为肺纤维化的早期诊断提供实验依据。 杨松昊 朱光荣 丁宁 杨安宁 蒋袁絮 田珏 姜怡邓 杨晓玲关键词:D-半乳糖 基质金属蛋白酶2 层粘连蛋白 氧化低密度脂蛋白与高密度脂蛋白比值在同型半胱氨酸致ApoE-/-鼠动脉粥样硬化中的意义 被引量:10 2013年 目的探讨ox-LDL/HDL在同型半胱氨酸(Hcy)致ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)中的意义。方法选用SPF级5周龄雄性ApoE-/-小鼠为研究对象,随机分为3组:对照组,高蛋氨酸组,folic acid and VitB12干预组。所有小鼠喂养14周后处死,进行后续实验。行主动脉病理切片HE染色;全自动生化分析仪检测血清Hcy、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)含量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ox-LDL含量。结果与对照组比较,高蛋氨酸组与folic acid and VitB12干预组动脉粥样硬化斑块面积不同程度的增大,高蛋氨酸组ApoE-/-小鼠主动脉内膜见灶性病变部位隆起并突入动脉腔内,富含粥样坏死物质。高蛋氨酸组血清Hcy、LDL、TC和ox-LDL均升高,血清HDL含量减少,LDL/HDL、TC/HDL及ox-LDL/HDL升高,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);叶酸与维生素B12可以改善高蛋氨酸所致的改变。血清Hcy浓度与LDL/HDL比值(γ=0.4938,P<0.05)、TC/HDL比值(γ=0.4474,P<0.05)及ox-LDL/HDL比值(γ=0.5434,P<0.05)均呈正相关。结论 ox-LDL/HDL比值更能预测和反映Hcy诱导AS形成及进展程度,在探索防治AS途径中更有价值。 王菊 杨安宁 孙炜炜 巩慧慧 马胜超 马长剑 姜怡邓关键词:动脉粥样硬化 同型半胱氨酸 一种用于描记家兔呼吸曲线的组合装置 一种用于描记家兔呼吸曲线的组合装置。它是把传统的玛丽氏气鼓和现在的张力换能器通过挂钩和悬挂线连接到一起,玛丽氏气鼓远端用乳胶管将张力强度和频率传输至动物气管插管的一个侧管,避免了单纯用张力换能器描记呼吸曲线造成的张力换能... 姜怡邓 杨晓玲 赵迅霞 徐华 杨安宁文献传递 LncRNA H19调控肾小球足细胞焦亡中作用 被引量:6 2023年 目的探讨lncRNA H19在高糖调控肾小球足细胞焦亡中的作用。方法qRT-PCR方法检测高糖中lncRNA H19本底表达;Western blot检测高糖中肾足细胞结构性相关蛋白Nephrin、Podocin表达;Western blot及免疫荧光方法检测细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平;qRT-PCR检测转染Ad lncRNA H19及si lncRNA H19后lncRNA H19的mRNA表达,细胞转染分别设置:(1)对照组(不做处理)、lncRNA H19过表达阴性对照组、lncRNA H19过表达组;(2)对照组(不做处理)、lncRNA H19干扰阴性对照组和lncRNA H19干扰组(si-lncRNA H19-1、si-lncRNA H19-2、si-lncRNA H19-3);Western blot检测转染Ad lncRNA H19及si lncRNA H19后NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平,细胞转染分别设置:(1)对照组(不做处理)、高糖组、lncRNA H19过表达对照+高糖组、lncRNA H19过表达+高糖组;(2)对照组(不做处理)、高糖组、lncRNA H19干扰对照+高糖组、lncRNA H19干扰+高糖组。结果(1)与对照组(不做处理)相比,lncRNA H19在高糖诱导肾足细胞损伤过程中呈低表达(P<0.05),而lncRNA H19低表达可调控细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达增高(P<0.05),lncRNA H19表达与细胞焦亡相关蛋白表达两者呈负相关;(2)与对照组(不做处理)相比,在高糖诱导肾足细胞损伤过程中,肾足细胞结构蛋白Nephrin、Podocin表达水平降低(P<0.05);(3)与lncRNA H19过表达对照+高糖组相比,过表达lncRNA H19后,缓解高糖诱导肾足细胞焦亡,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β呈低表达(P<0.05);(4)与lncRNA H19干扰对照+高糖组相比,干扰lncRNA H19后,促进高糖诱导足细胞焦亡,而焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β呈高表达(P<0.05)。结论在高糖诱导足细胞焦亡过程中lncRNA H19具有可调控细胞焦亡相关蛋白表达,为未来治疗糖尿病肾病提供一定的理论依据。 汪乐新 刘超 马天龙 杨安宁 杨安宁 吴凯 焦运 白志刚 姜怡邓 姜怡邓 张旭 卢冠军 马胜超关键词:糖尿病肾病 脂肪酸结合蛋白4 DNA甲基化在L-NAME干预胎盘滋养细胞脂代谢异常中的作用 被引量:2 2017年 目的观察并分析一氧化氮合酶抑制剂L-NAME对滋养细胞脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因启动子区DNA甲基化及脂质代谢异常的影响。方法体外培养人胎盘滋养细胞(HTR-8)并用100μmol/L-NAME干预48 h后检测胎盘滋养细胞脂质含量;qRT-PCR和Western blot检测胎盘滋养细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、FABP4 m RNA和蛋白表达改变;巢式甲基化特异性PCR(NT-MSP)检测胎盘滋养细胞中FABP4启动子区DNA甲基化的程度改变。结果 L-NAME干预滋养细胞后脂质含量明显增多,且细胞内FABP4 mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05),而FABP4基因启动子区甲基化程度以及DNMT1的表达水平显著减低。结论 FABP4启动子区低DNA甲基化可能参与了L-NAME诱导的胎盘滋养细胞脂代谢异常的调控过程。 杨珺 毛彩艳 杨松昊 杨安宁 邓梅 吴凯 杨晓玲 姜怡邓 张慧萍关键词:滋养细胞 DNA甲基化 脂代谢 CoQ<Sub>10</Sub>在抗矽肺纤维化中的应用 本发明公开了CoQ<Sub>10</Sub>在抗矽肺纤维化中的应用,其特征在于,包括以下步骤:(1)设置对照组:选取SPF级6周龄雄性C57小鼠24只,体重20±2g,先适应性饲养一周后随机分为对照组、模型组、治疗组;模... 刘志宏 孙岳 姜怡邓 杨安宁 蔺文轩 王宇欣 德小明文献传递 同型半胱氨酸引起平滑肌细胞LDLR启动子区DNA甲基化改变的位点分析 被引量:5 2012年 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)引起平滑肌细胞低密度脂蛋白受体(LDLR)启动子区DNA甲基化改变的特点及机制。方法原代培养人脐静脉平滑肌细胞(VSMCs)并鉴定,用50、100、200、500μmol·L-1Hcy干预,巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测LDLR甲基化改变,甲基敏感性限制性内切酶HpaII和BssHII分析LDLR DNA甲基接受能力。结果 50、100、200、500μmol·L-1Hcy组平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化(P<0.05),经限制性内切酶HpaII消化后,LDLR启动子区C↓CGG序列被酶切,经限制性内切酶BssHII消化后,LDLR启动子区GC↓GCGC序列被酶切,与对照组比较,DNA甲基接受能力下降,其中HpaII引起的效果更明显。结论 Hcy可使平滑肌细胞LDLR启动子区DNA去甲基化的效应偏重于一般的CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小。 杨安宁 王菊 杨晓玲 马长剑 孙炜炜 马胜超 王磊 徐华 姜怡邓关键词:同型半胱氨酸 低密度脂蛋白受体 DNA甲基化 平滑肌细胞 一种基于GOQDs的pH响应型仿生纳米制剂及其制备方法、应用 本发明属于生物医药技术领域,具体涉及一种基于GOQDs的pH响应型仿生纳米制剂及其制备方法和应用。该pH响应型仿生纳米制剂是由PEG化氧化石墨烯量子点、疏水性药物、仿生杂化膜和磷脂化透明质酸构成,疏水性药物负载于PEG化... 姜怡邓 张慧萍 尤沛栋 杨安宁 马胜超文献传递