杨怡
- 作品数：36 被引量：59H指数：4
- 供职机构：宁夏医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 地方医学院校国家级实验教学示范中心的建设与管理实践被引量：4
- 2012年
- 着眼于创新性实用型医学人才培养的实验教学创新及高校实验教学示范中心的建设与管理,学校以国家级基础医学实验教学示范中心建设单位的获得为契机,探讨建设具有特色的地方高校基础医学实验教学体系及实验室管理机制运行系统,培养适应于新型实验教学改革的复合型实验教学技术人员队伍,构建高效的中心管理平台及网络信息教学管理平台,在西部地区起到示范辐射作用。
- 王琦杨怡阎乾顺张艳丽杨继华王燕蓉
- 关键词：地方医学院校实验教学
- 迁移侵袭抑制蛋白MIIP基因K167E位点突变体的构建和表达
- 2014年
- 目的构建人迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)蛋白K167E突变体的原核表达载体pGEX-4T-1-MIIP(K167E)并进行表达和纯化,为MIIP的后续功能研究提供有效工具。方法以pGEX-4T-1-MIIP重组质粒为模板,PCR扩增得到人MIIP基因(K167E)突变体的cDNA全长,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建获得pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体,经酶切鉴定及测序验证完全正确后,将其转化至大肠杆菌BL21细胞中诱导表达,纯化获得GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结果酶切鉴定和测序结果显示,pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体构建成功。经诱导表达及纯化后,成功获得的GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结论成功构建了pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体,并获得了GST-MIIP(K167E)融合蛋白。
- 高玉婧马晓东芦晓红姚青裴秀英杨怡李建宁张茜孙玉宁
- 关键词：融合蛋白
- 大鼠类胚体的制备及实时观察
- 2022年
- 目的探讨悬滴法与悬浮法制备的大鼠类胚体(embryoid bodies,EBs)的差异以及培养时间对EBs所包含三胚层组织特异性基因表达的影响。方法使用悬滴法与悬浮法将大鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)制备为EBs并连续培养10 d,在第5天和第10天分别对两种方法制备的EBs进行形态学观察,并进行数量统计与直径检测,随后提取EBs蛋白与mRNA,通过Western blot与RT-qPCR实验检测EBs三胚层特异性蛋白和基因的表达水平。结果与悬浮法相比,悬滴法制备的EBs生成率低(P<0.01),但同质性更好;ESCs和EBs均表达多能基因Naong和OCT4,但随着培养时间的增长,多能基因表达逐渐降低,与ESCs相比,EBs(xf5、xf10和xd10)中OCT4与Naong基因的表达量均降低(P均<0.05)。EBs成功表达AFP、Gata-6、cdh1、Gata-1、Mixl1、Brachyury、Nestin以及VIM等三胚层特异性基因,且随着EBs培养天数的增加,内胚层基因AFP表达升高(P<0.05),Gata-6和cdh1的表达无明显变化(P>0.05);中胚层基因Brachyury表达降低(P<0.05),Gata-1和Mixl1表达无明显变化(P>0.05);外胚层基因VIM表达降低(P<0.05),Nestin表达无明显变化(P>0.05)。在同时期不同方法制备的EBs中,xf10的EBs三胚层特异性基因表达高于xd10的EBs(P<0.05)。结论悬滴法制备的EBs生成率低于悬浮法,但大小均一,分化同步,培养时间对EBs特异性基因的表达具有重要的影响。
- 李家瑞徐彧徐海瑾李建宁李建宁宋辉李岩
- 关键词：胚胎干细胞悬浮法
- Bcl-2、Bax、Insulin在高脂诱导C57BL/6J小鼠胰岛损伤中的表达被引量：2
- 2018年
- 目的探讨细胞凋亡因子在高脂引起的小鼠胰岛损伤中的表达。方法雄性C57BL/6J小鼠分高脂饮食组(HFD)和低脂饮食对照组(LFD),每组6只,喂养12周时尾部取血进行葡萄糖耐量实验(GTT)及胰岛素耐量实验(ITT)检测胰岛功能。持续喂养至20周时处死取胰腺组织用于透射电镜,苏木素-伊红(haematoxylineosin,HE)染色观察胰岛形态;免疫组化(immunohistochemical,IHC)检测Bcl-2、Bax及Insulin蛋白表达水平。结果喂养12周后,小鼠GTT和ITT显示,HFD组小鼠葡萄糖负荷时的血糖水平高于LFD组(P<0.05)。注射胰岛素后,HFD组小鼠血糖下降缓慢且血糖水平仍较LFD组高(P<0.05)。HE结果显示HFD组小鼠胰岛数量和体积较LFD组减少,形态损伤严重。电镜下观察HFD组胰岛β细胞超微结构受损较LFD组严重,HFD组β细胞形态不规则,细胞核固缩,染色质边集,有大量电子密度较小的脂滴堆积,其中胰岛细胞胞浆内胰岛素分泌颗粒减少。免疫组化的结果显示:HFD组Bcl-2表达低于低脂组,同时HFD组Bax表达高于LFD组,而HFD组胰岛中的Insulin表达低于LFD组(P<0.01)。结论高脂导致C57BL/6J小鼠胰岛细胞结构功能损伤,影响胰岛素的合成与分泌,并且增加细胞凋亡。Bcl-2及Bax在胰岛细胞凋亡中起一定的作用,并可能与高脂饮食有关。
- 马立荣马立荣栾延松李建宁宋辉杨怡
- 关键词：高脂胰岛损伤胰岛素
- 慢病毒介导的犬WRD细胞p53基因沉默及稳定感染细胞系的建立被引量：2
- 2014年
- 目的构建靶向犬p53基因慢病毒干扰载体,建立稳定沉默p53基因的WRD/p53-细胞系。方法设计并构建4条针对犬p53基因的特异性shRNA干扰质粒。将构建的慢病毒表达载体(p GMLV-p53)和包装质粒(packaging mix)组成的包装系统共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超滤浓缩,并测定滴度。包装好的慢病毒感染WRD细胞,Western blot和实时荧光定量PCR方法检测不同靶点RNA干扰载体对p53基因的干扰效果,确定有效靶点。针对有效靶点慢病毒颗粒以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染WRD细胞,puromycin抗生素筛选稳定感染细胞系WRD/p53-。结果结果显示p53 RNAi慢病毒载体构建成功,成功包装四种不同靶点的p53基因RNA干扰慢病毒,病毒滴度均达到1×109TU/ml。四种干扰载体慢病毒均具有较好的干扰效果,选用沉默效果最好的p GMLV-p53A1为最优靶点,成功建立p53 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系WRD/p53-。结论成功构建p53 RNAi慢病毒载体,并有效干扰WRD细胞中p53 mRNA和蛋白表达,同时成功筛选并建立p53RNAi慢病毒稳定感染WRD/p53-细胞系。
- 李芳闫琰张茜李建宁姚青高玉婧杨怡孙玉宁
- 关键词：P53慢病毒载体P53
- 三七总皂苷对糖尿病早期大鼠视网膜功能的保护作用被引量：11
- 2014年
- 目的观察三七总皂苷对糖尿病大鼠早期视网膜电图(ERG)及视网膜组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法采用链脲佐菌素(65 mg·kg-1)一次性腹腔注射SD大鼠建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、三七总皂苷组(35 mg·kg-1)及导升明组(167 mg·kg-1),另设正常对照组。灌胃给药,20周后测定ERG后应用免疫组织化学法、蛋白印迹和逆转录PCR法检测大鼠视网膜中GFAP蛋白及mRNA的表达。结果糖尿病大鼠视网膜ERG a波、b波和OPs振幅降低,a波潜伏期延长,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。三七总皂苷组大鼠视网膜ERG b波和OPs的振幅明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。同时,与正常组相比,糖尿病大鼠视网膜GFAP蛋白及mRNA的表达明显增加;与糖尿病模型组相比,三七总皂苷可降低糖尿病大鼠视网膜中GFAP蛋白及mRNA的表达(P<0.05)。结论三七总皂苷能够保护糖尿病大鼠视网膜,这一作用可能是通过降低视网膜GFAP的表达来实现的。
- 姚青马晓东张茜杨怡李建宁高玉婧芦小红孙玉宁
- 关键词：糖尿病视网膜病变三七总皂苷胶质原纤维酸性蛋白
- 脂肪酸对胰腺β细胞功能及凋亡影响的研究进展被引量：1
- 2017年
- 脂肪酸特别是高浓度脂肪酸对胰腺β细胞存在脂毒性作用,通过细胞内外的多种机制与途径的介入(细胞外可通过受体、激素等作用;细胞内可通过线粒体功能障碍、内质网应激、氧化应激、神经酰胺合成、自噬等;细胞核内可通过细胞核受体与细胞周期),导致胰岛β细胞凋亡与功能障碍。
- 李建宁马立荣杨怡
- 关键词：脂肪酸胰腺Β细胞细胞凋亡
- 棕榈酸联合TGF-β1诱导脂肪性肝纤维化细胞模型被引量：2
- 2021年
- 目的通过使用不同浓度的棕榈酸(PA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)分别诱导人肝星状细胞(LX-2)与人肝癌细胞(HepG2)探讨制备脂肪性肝纤维化细胞模型的方法。方法选用人LX-2细胞与人HepG2细胞,分别给予100、200、400μmol·L^(-1) PA处理及2、5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1处理,两组均处理24 h后利用MTT细胞毒性实验检测细胞存活率,通过油红O染色检测细胞脂肪变性,采用qRT-PCR与Western blot实验检测细胞α-平滑肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的mRNA及蛋白表达水平,了解细胞纤维化情况。结果MTT结果显示,不同实验组与对照组比较,PA分别诱导HepG2细胞与LX-2细胞24 h后,两组细胞存活率在100、200、400μmol·L^(-1) PA的诱导下出现不同程度降低(P均<0.01);TGF-β1分别诱导两组细胞24 h后,细胞存活率在5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导下出现不同程度降低(P均<0.05)。油红O染色结果显示,与对照组相比,不同浓度PA诱导24 h后,HepG2、LX-2细胞均随PA浓度的增大,脂滴形成增多,具有明显的浓度依赖性;不同浓度TGF-β1诱导24 h后,HepG2细胞内未见明显脂滴,2、5 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后LX-2细胞内可见少量脂滴,10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后可见LX-2细胞内脂滴明显增多。qRT-PCR结果显示,200、400μmol·L^(-1) PA诱导HepG2细胞内、400μmol·L^(-1) PA诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均<0.01);10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导HepG2组细胞内CollagenⅠmRNA相对表达水平上调,5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导LX-2细胞内α-SMA、CollagenⅠmRNA相对表达水平均上调(P均<0.05)。Western blot结果显示,200、400μmol·L^(-1) PA及5、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导后两组细胞内α-SMA及CollagenⅠ的蛋白相对表达水平均升高(P均<0.05)。结论200μmol·L^(-1) PA诱导HepG2细胞24 h、10 ng·mL^(-1) TGF-β1诱导LX-2细胞与HepG2细胞24 h是成功构建脂肪性肝纤维化细胞模型的适宜条件。
- 梁涵子李雨涵李家瑞李建宁李建宁宋辉
- 关键词：HEPG2细胞TGF-Β1棕榈酸
- 南亚留学生医学生物化学中实施人性化教学探讨被引量：2
- 2016年
- 文章针对临床专业南亚留学生,从医学院校医学生物化学课程教学入手,结合实际教学经验与多种具体案例进行讲解,通过对理论课授课各个教学环节的分析,多层次、多方面阐述理论课人性化教学的重要性及应用。
- 李建宁张茜杨怡姚青孙玉宁
- 关键词：医学生物化学人性化教学南亚留学生
- 基础医学教育为现代中医人才培养奠定基石
- 2012年
- 在传统中医人才的培养体系中如何合理的加入现代基础医学的知识和技能,以便更好的推进中医药现代化的脚步?多年来,宁夏医科大学基础医学院的教师通过夯实基础医学教育、支持中医专业人才科技创新等措施对现代中医人才的培养进行了探索,在实践中取得了一定的成效,也对现代中医人才培养的教育改革进行了一定的思考。
- 杨怡张艳丽罗彦姚慧琴马轶姜怡邓王燕蓉
- 关键词：中医
