王凤苹
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：成都中医药大学医学技术学院更多>>
- 发文基金：四川省教育厅重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表皮葡萄球菌luxS基因敲除重组质粒的构建
- 目的用重组DNA技术构建一个含有1uxS基因上游片段、抗卡那霉素基因和1uxS基因下游片段的重组克隆质粒,将重组质粒转化表皮葡萄球菌,为后续的同源重组1uxS基因敲除实验奠定基础。方法第一步:获取包含完整luxS基因及其...
- 宋瑱王凤苹李燕
- 表皮葡萄球菌luxS基因敲除重组质粒的构建
- 2013年
- 目的构建1个含有luxS基因上、下游片段、抗卡那霉素基因的重组克隆质粒,用以敲除表皮葡萄球菌luxS基因。方法检索GenBank获得luxS基因序列以设计引物,以生物膜阳性表皮葡萄球菌基因组DNA为模板,采用高保真PCR扩增得到包含luxS基因上游片段、完整的luxS基因和luxS基因下游片段的长片段DNA;以pEASY-T4质粒为模板扩增得到抗卡那霉素基因,再用内侧引物分别扩增luxS基因上、下游序列,按luxS基因上游片段+抗卡那霉素基因+luxS基因下游片段的顺序重组连接,转化JM109感受态细胞,通过卡那霉素筛选、酶切分析和PCR-测序验证luxS基因敲除的重组克隆载体。结果经酶切后电泳验证重组质粒中各目的片段插入无误,PCR检测结果证明重组质粒luxS基因缺失,测序结果显示碱基无错配,含目的基因的重组质粒菌株在含卡那霉素培养平板内正常生长,证明插入的抗卡那霉素基因表达良好。结论表皮葡萄球菌luxS基因敲除重组质粒构建成功,为后续luxS基因缺陷株的构建奠定了基础。
- 宋瑱王凤苹米娇李燕
- 关键词：表皮葡萄球菌LUXS基因生物膜
