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GalKO/hCD46的人源化五指山小型猪: 【目的】异种器官移植是解决器官短缺的重要途径之一,猪是公认最适合做异种器官移植的供体资源。然而,猪作为异种器官的供体移植到人之后会产生剧烈的免疫排斥反应,其中最主要的是超急性排斥反应(HAR)。α1,3-半乳糖基转移酶(...; 潘登科冯冲王宁龙川

Myostatin基因打靶载体的构建及猪胎儿成纤维细胞Myostatin基因的敲除被引量：9: 2010年; 目的:用缺口修复等技术构建Myostatin(肌肉生长抑制素,MSTN)基因打靶载体,并对大白猪胎儿成纤维体细胞进行转染,获得基因敲除细胞。方法与结果:首先构建用于MSTN基因同源长臂(LA)的抓捕载体,然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复,从含大白猪MSTN基因座的细菌人工染色体上亚克隆9.9 kb的LA到抓捕载体上,经过部分序列测定,同源性为100%;通过PCR获得1.4 kb的同源短臂(SA);将LA和SA连入载体pLOXP,构建含有neo和tk正负筛选标记基因的MSTN基因打靶载体pLOXP-MSTN-KO;将线性化的pLOXP-MSTN-KO通过电转染整合到大白猪胎儿成纤维细胞基因组中,利用G418和丙氧鸟苷进行药物筛选,获得抗性细胞克隆890个,通过PCR和DNA测序鉴定获得基因敲除的细胞克隆4个。结论:构建了有效的MSTN基因打靶载体,通过转染获得基因敲除细胞,为利用体细胞核移植制备MSTN基因敲除猪奠定了基础。; 李鸿辉冯冲王宁闫军哈福陈红星樊宝良潘登科; 关键词：MYOSTATIN基因基因打靶大白猪

体细胞克隆制备肌肉生长抑制素(Myostatin)基因敲除猪: 【目的】肌肉生长抑制素(Myostat in,MSTN)是一类对骨骼肌生长具有负调控作用的因子,MSTN基因的缺失或突变会引起其骨骼肌重量的显著增加。因此,生产MSTN基因敲除猪有望提升猪胴体瘦肉率,达到提高饲料利用率的...; 李鸿辉冯冲王宁闫军龙川郑道山李西睿罗学明朱彦宾潘登科; 关键词：基因打靶 MYOSTATIN基因胎儿成纤维细胞; 文献传递

利用体细胞LOH突变制备α1,3-半乳糖基转移酶基因(GGTA1)缺失的五指山小型猪被引量：5: 2013年; 制备α1,3-半乳糖基转移酶(αl,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础。在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山小型猪基础上,建立GGTA1+/-猪耳成纤维细胞系。利用特异性结合α1,3Gal的药物GSI-B4联合免疫磁珠筛选,成功分离出自发杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)的双等位基因敲除(GGTA1-/-)耳成纤维细胞。单细胞克隆培养与PCR鉴定后,以GGTA1-/-细胞为核供体,体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎并移植。先后将3 122枚重构胚移植到13头受体母猪,其中4头怀孕,产仔12头。采用PCR和Southern blotting进行GGTA1基因型检测,11头为GGTA1-/-猪;流式细胞术分析表明,GGTA1-/-仔猪耳成纤维细胞不表达α1,3Gal。获得能克服异种器官超急性排斥反应(HAR)的GGTA1-/-猪,不仅为异种器官供体的进一步基因修饰提供了平台,也为异种移植临床前研究提供了宝贵资源。; 王飞冯冲龙川岳成鹤王宁李西睿曹随忠李明洲储明星潘登科帅素容; 关键词：Α1,3-半乳糖基转移酶异种器官移植体细胞核移植五指山小型猪

GalKO/hCD46的人源化五指山小型猪: 目的异种器官移植是解决器官短缺的重要途径之一,猪是公认最适合做异种器官移植的供体资源。然而,猪作为异种器官的供体移植到人之后会产生剧烈的免疫排斥反应,其中最主要的是超急性排斥反应(HAR)。α1,3-半乳糖基转移酶(G...; 潘登科冯冲王宁龙川

利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系: 2013年; 本研究旨在建立一个用于干细胞示踪的报告体系,将EGFP cDNA及两侧带有LoxP位点的neo抗性基因插入五指山小型猪内源性Oct-4基因的终止密码子处,以Oct-4基因完整的5′调控区启动EGFP的表达,为猪干细胞研究提供有价值的工具。试验定制了针对猪Oct-4终止密码子的TALENs,与打靶载体共转染猪耳成纤维细胞,药物筛选得到抗性克隆点514个,经过PCR鉴定,共获得杂合阳性克隆点36个,打靶效率分别为5.6%和13.0%。本研究成功获得了Oct-4-EGFP转基因细胞系,并证明了TALENs技术可以明显提高同源重组效率。; 刘畅冯冲宋志强李西睿王宁储明星潘登科; 关键词：同源重组多能性

TALEN技术敲除巴马小型猪GGTA1基因研究: 本研究利用TALEN技术成功获得了GGTA1基因敲除克隆猪。与常规的基因打靶技术相比，利用TALEN技术介导的基因敲除效率在单细胞水平可以达到20％-26%之间，而常规同源重组的基因打靶效率仅在10-6～10-7,并且通...; 李西睿冯冲龙川王宁潘登科; 关键词：巴马小型猪器官移植细胞克隆基因敲除; 文献传递

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王宁