程秀丽
- 作品数：5 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Jurkat细胞Kv1.3钾通道的基本电生理学特性及动力学特征
- 2012年
- 目的采用膜片钳技术记录Jurkat细胞膜的Kv1.3通道电流,分析通道的动力学特征,并体会成功记录的要领。方法选择T淋巴细胞性白血病Jurkat E6-1细胞系为研究对象,采用全细胞膜片钳记录方式记录Kv1.3电流,选择合适的刺激方案,分析通道的激活、失活和复活动力学特性。结果 Jurkat细胞的Kv1.3电流具有电压门控特性,并能被ShK(100pmol/L)选择性阻断。Kv1.3通道的激活时间常数(τact)、失活时间常数(τin)和复活时间常数(τrec)分别为τact=6.47±2.44ms,τin=622.49±93.90ms,τrec=6.141s。在胞内钙没有被螯合的条件下,Kv1.3通道电流常掺杂有中等电导钙激活钾通道KCa3.1电流。玻璃微电极的口径和电极内液是否含EGTA是能否记录到纯净Kv1.3电流的关键。结论 Jurkat细胞表达功能性Kv1.3通道,该通道呈现快速激活、缓慢失活和缓慢复活的动力学特征。记录Kv1.3通道须注意剔除KCa3.1电流的掺杂。该工作对研究T淋巴细胞Kv1.3通道的功能具有一定的借鉴意义。
- 代中华谭晓秋闫莉程秀丽祝红郝维曹济民
- 关键词：JURKAT细胞电压门控钾通道失活
- 表达在HEK293细胞上的BK_(Ca)通道基本特性与动力学调控研究
- 2013年
- 目的构建稳定表达人血管平滑肌大电导钙激活钾通道(BKCa)的293细胞系,并研究其基本电生理学特征和动力学模型。方法通过脂质体(lipofectamine 2000)转染法转染BKCa表达质粒pcDNA3.1-BKα和(或)pIRES-BKβ1,筛选稳定表达的单克隆细胞系。使用膜片钳多种记录方式研究其基本电生理学特性,同时建立BKCa动力学研究模型。结果构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系,通过膜片钳能够记录到具有与天然细胞BKCa电生理学特性相似的电流,包括大电导特性[内面向外式构型下单通道电导为(216.38±3.55)pS]、电压依赖性、Ca2+依赖性、钾离子选择性和200nmol/L IbTX(BKCa特异性阻断剂)阻断;联合表达β1亚单位能够明显增加通道的开放时程。采用inside-out宏观电流记录方式可以记录到明显的尾电流。可以用于分析通道激活、去激活等动力学模型及药物动力学作用机制。结论成功构建稳定转染BKCa通道α和(或)β1亚单位的HEK293细胞系。膜片钳实验证明具有典型的BKCa电生理学特性,同时建立的细胞系可以很好的用于BKCa通道功能调控研究和动力学参数分析。
- 谭晓秋程俊程秀丽李畅毛亮曾晓荣曹济民杨艳
- 关键词：大电导钙激活钾通道血管动力学
- Flag与EGFP双标记表达质粒构建及在BKCa通道转运功能研究中的应用
- 目的通过Overlapping PCR法构建Flag与EGFP双标记表达质粒pcDNA3.1-Flag-hBK-EGFP(Flag-hBK-EGFP),使用电生理、分子生物学和细胞生物学的方法研究该表达质粒在研究BK通道...
- 谭晓秋程秀丽李慧高倩刘枭曹济民
- 文献传递
- 促离子型谷氨酸受体介导RAW264.7巨噬细胞释放TNF-α
- 目的外周谷氨酸信号通路与炎症和动脉粥样硬化的关系尚不明确。该工作探讨促离子型谷氨酸受体与RAW264.7巨噬细胞释放促炎细胞因子TNF-α的关系。方法将RAW264.7细胞分成正常对照组、谷氨酸单钠组(10 ML-glu...
- 程秀丽丁帆闫莉谷婧丽郝维高雪曹济民
- 关键词：谷氨酸受体RAW264.7巨噬细胞TNF-Α
- 文献传递
- 高糖对大鼠心肌细胞NMDA受体表达、胞内钙和超氧自由基水平的影响
- 2014年
- 目的探讨高浓度葡萄糖对心肌细胞促离子型谷氨酸受体亚型NMDA受体(NMDAR)表达、胞内钙水平以及活性氧自由基产生的影响。方法分离新生(1~3天)大鼠心室肌细胞,心肌细胞与不同浓度葡萄糖(对照组葡萄糖浓度5mmol/L,高糖组葡萄糖浓度33mmol/L)共孵育24~72h后,用Western blot法检测心室肌细胞NMDAR1和NMDAR2B亚单位的表达水平,活细胞工作站检测胞内Ca2+水平,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量。结果与对照组细胞相比,高浓度葡萄糖使心肌细胞的NMDAR2B的表达水平明显上调(P<0.05),而NMDAR1的表达则降低。经高糖处理的心肌细胞在收缩时胞内钙水平高于对照细胞,高糖处理使心肌细胞的ROS水平升高,而用MK-801选择性阻断NMDAR可明显降低由高糖所致的胞内ROS增高(与高糖组对比,P<0.05)。结论高浓度葡萄糖可上调乳鼠心肌细胞NMDAR2B及下调NMDAR1的表达,并增加细胞内Ca2+水平及ROS的生成,而阻断NMDAR可抑制ROS的生成。提示NMDAR可能参与糖尿病性心肌损害。
- 刘枭程秀丽郝维曹济民高雪
- 关键词：心肌细胞NMDA受体CA^2+
