肖啸
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 表氧化二十碳三烯对eNOS磷酸化水平的影响及其相关信号转导通路
- 2005年
- 内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)是一氧化氮(NO)参与的血管稳态调节过程中的关键酶.多种体液因子和机械刺激都可以通过磷酸化修饰调节eNOS的活性,但具体的信号转导通路因刺激物不同而异.最近发现花生四烯酸细胞色素P450(CYP)表氧化酶代谢产物表氧化二十碳三烯(EETs)可以显著上调eNOS的蛋白表达并增强其活性,但其分子机制尚不清楚.通过在4代以内培养的牛主动脉内皮细胞中直接加入外源性EETs和转染CYP表氧化酶基因CYP2C11和CYPF87V,并同时给予实验组不同信号转导抑制剂进行干预,观察其对总的eNOS表达及其在Ser1179和Thr497位点磷酸化水平的影响.结果显示,内外源性EETs均可以显著上调eNOS的蛋白表达并增强及其在Ser1179和Thr497位点的磷酸化水平;PI3K抑制剂LY294002可以阻断EETs对eNOS-Ser1179的磷酸化上调作用,但它对eNOS-Thr(P)497并无影响,而Akt抑制剂却可以抑制eNOS在这两个位点的磷酸化,且这两种抑制剂都可以阻断EETs对eNOS的蛋白表达上调作用.结果提示:(i)EETs对eNOS的活性调节可能与PI3K/Akt所介导的eNOS-Ser1179和Akt所介导的eNOS-Thr497磷酸化水平改变相关;(ii)PI3K/Akt信号通路可能参与了EETs对eNOS的蛋白表达上调过程.
- 陈瑞娟蒋建刚肖啸汪道文
- 关键词：ENOS碳三氧化酶基因体液因子活性调节
- 重组腺相关病毒介导核心蛋白聚糖基因转染对SiHa细胞周期和凋亡的影响被引量：11
- 2005年
- 背景与目的:核心蛋白聚糖(decorin,DCN)是一种多效性分子,具有许多重要功能。本研究旨在通过重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virusv ector,rAAV)载体介导DCN基因转染宫颈癌细胞(SiHa),观察其在SiHa细胞的表达及其对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:根据GenBank报道的DCN基因cDNA序列,克隆含开放读码框的DCN基因片段,测序后克隆至质粒UF1(UF1·DCN),通过磷酸钙鄄DNA沉淀法共转染293细胞,产生高滴度的含DCN基因的重组腺相关病毒(rAAV·DCN)。用rAAV·DCN转染处于对数生长期的SiHa细胞,并以rAAV·LacZ转染和非转染细胞作对照。通过Westernblot分析DCN的表达,PI染色流式细胞仪分析细胞周期的变化及DCN对细胞凋亡的影响。结果:获得了含开放读码框的人DCN基因片段(1080bp)。成功包装至重组腺相关病毒载体获得高滴度的rAAV·DCN重组体,转染SiHa细胞后能有效表达DCN并使细胞周期发生明显变化,G1期细胞百分率[(72.3±2.3)%vs.(59.5±2.5)%]明显增加,S期[(11.9±1.9)%vs.(17.8±0.8)%]和G2期[(13.4±1.1)%vs.(21.5±0.9)%]细胞百分率明显降低;对细胞凋亡无明显影响。结论:DCN高表达对SiHa细胞增殖周期有明显阻滞作用。
- 赵春霞赵荫涛汪培华肖啸汪道文
- 关键词：宫颈癌细胞核心蛋白聚糖细胞周期凋亡
- 花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET促进血管生成的研究被引量：8
- 2005年
- 目的研究花生四烯酸细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表氧化酶代谢产物表氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acid,EET)对牛主动脉内皮细胞(bovine endothelial cells,BAEC)、对血管生成的影响及其机制。方法分离BAEC培养,给予外源性EET刺激、重组腺相关病毒介导的各种CYP表氧化酶(CYP2J2,CYP2C11,CYPF87V)转染后,采用细胞计数、噻唑蓝比色法检测细胞增殖改变,用流式细胞仪检测对细胞增殖周期的影响,同时检测细胞趋化移行的改变,比较对Matrigel中毛细血管样结构形成的影响,观察表氧化酶过度表达对鸡胚尿囊绒毛膜血管生成和大鼠缺血后肢毛细血管生成的影响。结果各种EET刺激或表氧化酶病毒转染均显著促进BAEC的增殖、趋化和移行,并使Matrigel中毛细血管样结构的形成明显增加,且EET呈剂量依赖性效应,而合用一氧化氮合酶抑制剂、丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)抑制剂或磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)抑制剂均可显著抑制上述效应,另外表氧化酶病毒转染尚能明显促进CAM小血管和大鼠缺血后肢毛细血管的生成。结论花生四烯酸细胞色素P450(CYP)表氧化酶及其代谢产物EET可显著促进血管的生成,可改善局部组织的缺血,其作用由MAKP和PI3K介导,部分效应由其对一氧化氮的上调作用介导。
- 王炎王家宁刘珍君魏欣肖啸汪道文
- 关键词：血管生成因子花生四烯酸血管生成细胞色素代谢产物EET
