马忠飞 作品数:7 被引量:21 H指数:2 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 更多>> 发文基金: 云南省应用基础研究基金 云南省自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
云南省2009年埃可病毒6型分离株KM57—09全基因序列分析 被引量:1 2012年 目的对云南埃可病毒6型(Ech06)分离株KM57—09全基因序列进行分析和研究,了解其遗传特性。方法设计针对Ech06引物,提取病毒RNA、RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega5.05、RDP3和SimPlot3.5.1等生物学软件分析全基因序列。结果获得KM57—09全基因组核苷酸序列长度为7419bp,编码含2191个氨基酸残基的多聚蛋白;与其他Ech06参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为79.3%~80.2%和93.3%~94.4%,与原型株D’Amor核苷酸和氨基酸同源性分别为79.3%和93.6%。在基因组各个区段上,Ech06KM57—09分离株的2C和3A区,与HN-2-E25核苷酸同源性最高,分别为86-3%和85.0%,而其5’UTR、VP4、3D和3’UTR区则与CoxB5-Henan-2010核苷酸同源性最高,分别为91.7%、81.2%、89.7%和96.9%。在VP1区上,与中国其他省份分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.0%~96.0%和95.8%~99.0%,而与其他国家分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为77.6%~96.0%和95.2%-99.0%。进化分析发现Ech06可分为5个分支,中国分离株分属C和E分支,其中KM57—09属于E分支,且5个分支之间核苷酸的差异为15.6%~23.3%。3D基因序列种系进化分析以及RDP3和SimPlot3.5.1软件分析发现KM57—09序列在非结构区可能存在重组。结论Ech06可分为5个基因型,KM57—09分离株属于E基因型;中国大陆曾存在不同Ech06株传播链的流行。 朱艳菊 潘玥 陈俊英 马忠飞 邓新强 刘建生 马绍辉关键词:全基因组 TritonX-100裂解流感病毒的研究 被引量:7 2009年 在流感病毒高浓度条件下,寻找TritonX-100裂解流感病毒的适宜条件.在不同条件下用TritonX-100裂解WHO推荐用2007~2008年度流感病毒疫苗毒株制备的3个亚型的流感病毒,用电镜观察裂解程度,通过蔗糖密度梯度离心纯化抗原后免疫动物,以检测疫苗的免疫效果.结果表明当流感病毒的血凝效价是1:16382,裂解时间为24h时,TritonX-100在质量分数为1%可以完全地裂解B型,质量分数达到2%才可以完全裂解流感病毒H1N1和H3N2,这说明TritonX-100对A,B亚型毒株的裂解效果不同.由于每年都要更换毒株工人生产新的流感疫苗,因此应该对使用TritonX-100的裂解不同亚型的流感病毒条件进行研究,以保证裂解疫苗的质量. 宋绍辉 李卫东 廖国阳 马娜 杨佳 梁海孝 杨耀云 马忠飞关键词:流感病毒 TRITONX-100 裂解疫苗 柯萨奇B组1型病毒株MSH-KM9-09的分离鉴定及其VP1基因序列特征分析 被引量:1 2012年 目的对2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B组1型病毒(Coxsackievirus B1,CVB1)分离株MSH-KM9-09进行鉴定,并分析其VP1基因的序列特征。方法采用RD细胞和Hep-2细胞对22份疑似无菌性脑膜炎患者脑脊液标本进行病毒分离,采用微量中和试验,经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对分离株进行鉴定,RT-PCR法扩增病毒全长VP1基因,进行序列测定,并采用Mega 4.1等软件进行分析。结果所分离的毒株经微量中和试验定型为CVB1亚型,编号为MSH-KM9-09。经RT-PCR扩增获得834 bp的VP1基因,与国内CVB1分离株核苷酸和氨基酸序列的同源性分别在86.1%和97.8%以上,与国外CVB1分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为80.2%~83.2%和94.3%~96.0%;在系统进化树上,MSH-KM9-09株与国内分离株属于同一个分支,而国外分离株分属其他两个不同的分支。结论 MSH-KM9-09分离株为肠道病毒CVB1。 刘建生 潘玥 吉玛 马忠飞 叶君 马绍辉关键词:VP1基因 2009年云南省昆明地区柯萨奇病毒B5的遗传特性分析 2013年 目的对2009年中国云南省昆明地区柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus group B5,CVB5)的部分VP1基因序列进行分析,以了解CVB5的遗传特性。方法收集2009年中国云南省昆明地区临床诊断为无菌性脑炎患儿的200份粪便标本,设计针对CVB的通用引物,利用半巢式RT-PCR扩增部分VP1基因。PCR产物直接测序后,采用Omiga和Mega 5.05等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列及系统进化分析。结果共分离出7株CVB5,其部分VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为92.7%~98.5%和93.6%~100.0%;与中国其他不同地区参考株的核苷酸序列同源性为80.1%~99.1%,其中与中国山东株98388-SD-CHN-1998同源性较低;与中国其他不同地区参考株的氨基酸序列同源性为84.4%~100.0%,其中与中国河南株CoxB5-Henan-2010和中国山东株98388-SD-CHN-1998之间同源性最低;与其他不同国家参考株比较,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在77.5%~89.1%和92.1%~96.3%之间;与原型株Faulkner的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.6%~80.9%和92.1%~95.4%。基因系统进化分析显示,分离的7株CVB5属于相对独立的1个分枝,中国流行株除98388-SD-CHN-1998外,构成1个分枝。结论 2009年中国云南省昆明地区CVB5流行株属于相同基因型。 邵聪文 潘玥 邓新强 叶君 马忠飞 孙强明 马绍辉关键词:VP1基因 2009年云南省柯萨奇病毒B5:分离株A210/KM/09全基因序列分析 被引量:10 2014年 目的分析柯萨奇病毒B5(CVB5)云南分离株A210/K2~I/09全基因序列及其遗传特性。方法设计针对CVB5引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列,利用Mega4.1、RDP3和SimPlot3.5.1软件分析全基因序列。结果CVB5A210/KM/09全基因组核苷酸序列长度为7372bp,编码含2185个氨基酸残基的多聚蛋白;A210/KM/09全基因组核苷酸及所推导的氨基酸与CVB5/CCl0/10同源性最高,其同源性分别为92.5%和97.3%;而与其他CVB5毒株如17Y、19CSF、20CSF、1954/85/US、2000/CSF/KOR、03001N、CoxB5/Henard2010、CVB5/SD/09和Faulkner核苷酸和氨基酸同源性分别为80.1%~92.5%和95.0%~97.3%;A210/KM/09与其他CVB5毒株的各区段核苷酸和氨基酸同源性分别为75.3%~96.3%和85.3%~100.O%,其中与VP3、3D区段核苷酸的同源性最低。基于CVB5全长VPl基因序:列进行种系进化分析,可将CVB5分为A、B、C和D4个基因型,其中C基因型可再分为C1~C4基因亚型,D基因型可再分为D1~D4基因亚型。中国CVB5流行株主要聚集在C4基因亚型,国外流行株主要聚集在D1、C2亚型。结论A210/KM/09分离株为C4基因型。 刘建生 邵聪文 赵卫中 张云昆 吉玛 朱艳菊 马忠飞 马绍辉关键词:全基因组 甲型肝炎病毒H2快速复制株在人二倍体细胞中的增殖研究 被引量:1 2022年 研究甲型肝炎病毒H_(2)快速复制株在人二倍体细胞中的生长特性,并缩短甲肝病毒的培养周期。将甲型肝炎病毒H_(2)株感染人二倍体细胞(KMB_(17)细胞株),采用高病毒感染复数(MOI)将病毒培养时间从26d缩短至10d后收获病毒,并通过连续传代进行适应研究,建立H_(2)株快速复制毒种库,在不同培养时间检测病毒抗原、感染性滴度,绘制病毒生长曲线,进行传代稳定性验证和病毒形态学的观察。甲肝H_(2)株快速复制病毒株在KMB_(17)细胞上培养10d后收获,连续传代从第5代至第9代,抗原含量均在512~2048之间,感染性滴度均在8.33 lgCCID_(50)/mL±0.125lgCCID_(50)/mL,H_(2)株快速繁殖至5代病毒和9代病毒在电镜下观察到多为成熟的实心颗粒。在5批次的重复试验中,病毒培养至10d、16d、22d时,收获的病毒感染性滴度无显著差异(P>0.005)。筛选后的甲型肝炎病毒H_(2)株的快速复制株缩短了甲肝病毒的培养时间,且保持较好的稳定性和重复性,具有重要的应用价值。 王东宝 马忠飞 刘泽 宋盛波 卢志敏 施红进 何陆涛 李燕 李卫东 廖国阳关键词:甲肝病毒 连续传代 2009年云南省柯萨奇病毒B3型分离株A103/KM/09全基因序列分析 被引量:1 2013年 目的分析2009年云南省脑炎患儿粪便标本分离的柯萨奇病毒B3型分离株A103/KM/09全基因序列,了解其遗传特性。方法设计针对柯萨奇病毒B3型引物,提取病毒RNA、RT-PCR扩增和产物直接测序获得全基因组序列,利用Geneious和Mega5.05软件进行核苷酸、氨基酸序列比对及其系统进化分析,应用RDP3和SimPlot3.5.1重组软件对序列进行重组分析。结果该分离株全基因组核苷酸序列长度为7389bp。其核苷酸和氨基酸序列与其原型株Nancy的同源性分别为81.0%和95.7%;与其他柯萨奇病毒B3型毒株的各区段核苷酸和氨基酸同源性分别为81.0%~88.0%和95.7%~98.0%;进化分析发现CVB3可分为5个分支(I~V),核苷酸之间的差异为16.2%-24.3%;中国分离株属V分支,又可分为A~D亚分支,核苷酸之间的差异为4.3%~11.4%。并发现A103/KM/09株基因序列在非结构区可能存在重组事件。结论柯萨奇病毒B3型分为5个基因型,云南分离株A103/KM/09属于V—D亚型,而中国分离株已经发生一定进化。 杨卉娟 刘建生 张云昆 马忠飞 赵卫中 潘玥 陈俊英 邵聪文 马绍辉关键词:全基因序列