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严琳

作品数:16 被引量:92H指数:6
供职机构:华中农业大学动物医学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
相关领域:农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 8篇期刊文章
  • 6篇会议论文
  • 1篇学位论文

领域

  • 12篇农业科学
  • 4篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 6篇细胞
  • 5篇疫苗
  • 5篇犬病
  • 5篇佐剂
  • 5篇伪狂犬病
  • 5篇狂犬
  • 5篇基因
  • 5篇白细胞
  • 5篇白细胞介素
  • 5篇病毒
  • 4篇猪白细胞
  • 4篇猪白细胞介素...
  • 4篇克隆
  • 4篇杆菌
  • 3篇单克隆
  • 3篇单克隆抗体
  • 3篇蛋白
  • 3篇毒素
  • 3篇胸膜肺炎
  • 3篇原核表达

机构

  • 15篇华中农业大学

作者

  • 15篇严琳
  • 14篇陈焕春
  • 6篇肖少波
  • 4篇贝为成
  • 4篇黄红亮
  • 4篇方六荣
  • 4篇余晓岚
  • 3篇江云波
  • 3篇宋云峰
  • 3篇赵武
  • 3篇牟帆
  • 3篇陈美玲
  • 2篇何启盖
  • 1篇卿柳庭
  • 1篇胡梦雨
  • 1篇董晓辉
  • 1篇吴美洲
  • 1篇覃雅丽
  • 1篇韩丽
  • 1篇吕建强

传媒

  • 2篇畜牧兽医学报
  • 2篇生物工程学报
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇微生物学报
  • 1篇病毒学报
  • 1篇中国生物工程...
  • 1篇中国畜牧兽医...
  • 1篇湖北省生物工...
  • 1篇全国首届动物...
  • 1篇中国畜牧兽医...
  • 1篇中国畜牧兽医...

年份

  • 2篇2006
  • 4篇2005
  • 7篇2004
  • 2篇2003
16 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察被引量:8
2006年
为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程疫苗,以伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失标志疫苗株TK-/gE-/LacZ+为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达与牛疱疹病毒1型VP22(BHV-1 VP22)融合的PRRSV E及M蛋白的重组伪狂犬病毒(rPRV)TK-/gE-/VP22E+/VP22M+。经PCR、Southern blot、Westernblot证实rPRV构建正确,并能表达与BHV-1 VP22融合的PRRSV E及M蛋白。rPRV在IBRS-2、PK-15细胞中的增殖滴度与PRV亲本株相比无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV增殖。用该rPRV免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠抗PRRSV中和抗体及脾淋巴细胞增殖反应,并与未融合VP22的单表达PRRSV E蛋白及共表达E及M蛋白的rPRV TK-/gE-/E+与TK-/gE-/E+/M+进行比较。结果显示TK-/gE-/VP22E+/VP22M+可诱导小鼠产生更好的体液与细胞免疫反应,BHV-1 VP22发挥了佐剂效应。本研究为研制安全、有效的猪繁殖与呼吸综合征-伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了基础。
赵武肖少波方六荣江云波宋云峰严琳余晓岚陈焕春
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF6基因重组伪狂犬病毒
猪白细胞介素-2在甲醇酵母中的表达被引量:16
2004年
将猪白细胞介素-2(pIL-2)的完整cDNA序列克隆到甲醇酵母(Pichiapastoris)表达载体pPIC3 5K中,在E.coli体系中鉴定得到阳性克隆子pPIC3 5K-IL2。将pPIC3 5K-IL2经SacI线性化后,转化入经LiC1致敏的P.PastorisGS115菌株中,得到的重组菌株经1%浓度甲醇诱导后,利用SDS-PAGE电泳,斑点杂交及去糖基化酶消化证实,在培养上清中获得了分泌型表达的猪白细胞介素-2(蛋白分子量约为20KD),其表达量可达到80mg/L。用CTLL-2细胞进行活性检测,生物学活性可达2×106IU/ml。对其表达情况进行时间梯度分析,确定第5天表达量达到最高点,为最佳诱导时间;分析连续4个批次的重组菌株表达情况,结果表明重组菌株在适当菌体浓度下连续培养均能稳定、高效的表达外源蛋白pIL-2。本实验为进一步大规模生产pIL-2提供了理论依据。
严琳陈焕春覃雅丽何启盖肖少波
关键词:白细胞介素-2甲醇酵母基因表达
融合蛋白pIL6-IL2在E.coli中的表达及活性鉴定被引量:1
2004年
白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )与白细胞介素 6(interleukin 6,IL 6)能分别刺激T淋巴细胞增殖与B淋巴细胞分泌免疫球蛋白 ,从而促进动物机体的细胞免疫与体液免疫 ;另外IL2与IL6在发挥生物学活性时还有相互协同作用。因此 ,将去除信号肽的猪白细胞介素 6(pIL 6)与猪白细胞介素 2 (pIL 2 )cDNAs序列通过一段Linker相连 ,克隆到E .coli表达载体pPET 2 8a中。该融合蛋白IL6 IL2在E .coli表达菌BL2 1 (DE3)中获得成功表达 ,SDS PAGE分析分子量约为40kDa ,表达量达到总菌体的 66.2 6%。用IL6依赖的B9细胞与IL2依赖的CTLL细胞增殖试验进行融合蛋白IL6 IL2的生物活性检测 ,其活性可分别达到 0 8× 1 0 3 U mg和 6 4× 1 0 3 U mg。
严琳卿柳庭贝为成黄红亮陈焕春
关键词:融合蛋白T淋巴细胞增殖SDS-PAGE分析
重组猪白细胞介素2在小鼠模型中对伪狂犬病毒灭活疫苗的佐剂效应
白细胞介素2(Interleukin 2,IL-2)是重要的免疫调控因子,能以非特异性的方式增强针对特异性抗原的免疫力。众多试验结果与临床应用表明IL-2作为疫苗佐剂在治疗多种感染性疾病时具有良好的佐剂效应。本试验以两种...
严琳牟帆陈焕春
关键词:白细胞介素2佐剂体液免疫
文献传递
融合表达牛疱疹病毒1型VP22及猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组伪狂犬病毒TK^-/gE^-/VP22 GP5^+的构建被引量:4
2006年
To construct the bi-valent genetic engineering vaccine against pseudorabies virus(PRV)and porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV),the modified PRRSV ORF5 gene(ORF5M) and the VP22 gene of bovine herpesvirus 1(BHV-1),which encodes VP22 protein and has been demonstrated to exhibit the unusual protein transduction property,were inserted into a PRV universal transfer vector pIECMV by turns.A recombinant virus transfer vector pIECMV-VP22ORF5M possessing VP22-ORF5M fusion gene was generated.The recombinant virus transfer vector pIECMV-VP22ORF5M co-transfected the IBRS-2 cells with PRV TK-/gE-/LacZ+ genomic DNA digested by EcoRⅠusing liposome method.Based on homologous recombination,the recombinant virus was generated and then purified by the plaque assay and PCR amplification.After three rounds of plaque purification,the recombinant virus was further confirmed by PCR,Southern blot and Western blot.A recombinant PRV(rPRV)TK-/gE-/VP22GP5+ expressing VP22-GP5 fusion protein was constructed.The results of TCID50 tests showed that the insertion of the foreign genes had no influence on the propagation of rPRV in IBRS-2 or PK-15 cells.The construction of rPRV TK-/gE-/VP22GP5+ provides a basis for further study of bi-valent genetic engineering vaccines against PRRSV and PRV,and that this strategy may also be useful to develop more efficient genetic engineering vaccines against other pathogens.
赵武肖少波方六荣江云波宋云峰严琳余晓岚陈焕春
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒重组伪狂犬病毒
重组猪白细胞介素2对伪狂犬病疫苗的佐剂效应研究
白细胞介素2(Interleukin 2,IL2)是作为细胞因子的一种,能针对性地刺激T-淋巴细胞增殖分化,加强细胞毒活性,进而提高动物机体的细胞免疫能力,同时对动物体液免疫反应也有促进作用。众多试验结果与临床应用均表明...
严琳牟帆陈焕春
文献传递
猪白细胞介素-6在巴斯德毕氏酵母(Pichia pastoris)中的分泌表达被引量:2
2005年
白细胞介素6 (Interleukin_6 ,IL_6 )是一种具有多种生物学效应的细胞因子,在疾病诊断与疫苗佐剂领域有广阔的应用前景。在本试验中,猪白细胞介素_6 (pIL_6 )的cDNA序列被克隆入甲醇酵母(Pichiapastoris)分泌表达载体pPIC9K中,并转化入P .pastorisGS115菌株。其重组菌株GS115 pPIC9K_IL6经1%甲醇诱导后,能分泌表达分子量约为2 4 5KD的重组蛋白,Westernblot确证为pIL_6。该酵母表达产物无N端糖基化修饰。用依赖IL6生长的B9细胞株检测提纯后的pIL_6 ,其生物学活性可达8×10 4 IU mg。
严琳顾贫陈焕春
关键词:PICHIAPASTORIS酵母表达
胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ基因3'-端的克隆、原核表达及单克隆抗体的制备
本研究参照胸膜肺炎放线杆菌血清1型apxⅣA基因序列合成两条特异性引物,从本实验室分离鉴定的菌株中扩增到apxⅣA3,大小2993bp,克隆到pMD-18T中构建克隆载体pTapxⅣA3,鉴定后,将apxⅣA3插入原核表...
黄红亮陈焕春陈美玲贝为成严琳
关键词:胸膜肺炎放线杆菌单克隆抗体
文献传递
牛疱疹病毒Ⅰ型VP22和猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5融合基因DNA疫苗的免疫效应被引量:10
2005年
为了提高表达GP5的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗的免疫效应,将具有蛋白转导功能的牛疱疹病毒1型(BHV1)VP22基因插入到经过修饰具有更好免疫原性的PRRSV修饰型ORF5基因(ORF5M)上游,构建VP22和ORF5M融合表达的真核表达质粒pCIVP22ORF5M。经间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实体外表达后,免疫BALBc小鼠,检测小鼠免疫后的GP5特异性ELISA抗体、抗PRRSV中和抗体和脾淋巴细胞增殖反应,并与非融合的真核表达质粒pCIORF5M进行比较。结果显示,融合表达VP22GP5的DNA疫苗pCIVP22ORF5M诱导的体液免疫和细胞免疫反应均明显高于非融合表达的DNA疫苗pCIORF5M,表明蛋白转导相关蛋白BHV1VP22能显著增强表达GP5的PRRSVDNA疫苗的免疫效应,有效发挥了基因免疫佐剂效应;这为研制PRRSV高效DNA疫苗奠定了基础,同时也为其它疾病的高效新型疫苗研究提供了思路。
赵武肖少波方六荣江云波宋云峰严琳余晓岚陈焕春
关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白转导DNA疫苗
猪白细胞介素2(pIL-2)与猪白细胞介素6(pIL-6)的基因表达及作为疫苗佐剂的研究
由病毒、细菌等病原微生物侵染动物所引起的各种传染性疾病严重制约了各个国家和地区养殖业的健康发展,同时也对人类健康存在着巨大隐患。因此,对动物传染性疾病的防治措施研究具有重大的经济价值和社会意义。疫苗免疫是当前预防和控制传...
严琳
关键词:猪白细胞介素2灭活苗核酸疫苗佐剂
文献传递
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