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转基因兔骨髓间充质干细胞对异体跟腱重建前交叉韧带生物力学特性的影响被引量：5: 2008年; 目的分别观察转PDGF-BB、VEGF165和TGFβ1基因的兔骨髓间充质干细胞(mesen chymal stem cells,MSCs)施加于异体跟腱重建兔前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)的影响,探讨改善和加强异体移植物重建ACL的途径。方法40只成年新西兰大白兔随机分为5组,每组8只。选用经Gamma射线照射,-80℃储存的同种异体跟腱进行前交叉韧带的重建。1组为对照组,2组为细胞组(MSCs),3组为经逆转录病毒转染稳定表达PDGF-BB的MSCs(PDGF-BB组),4组为经腺病毒转染稳定表达VEGF165的MSCs(VEGF165组),5组为经腺病毒转染稳定表达TGFβ1的MSCs(TGFβ1组)。各组细胞混合l00μL纤维蛋白胶粘附于重建韧带表面,术后12w取材。结果组织学观察发现,VEGF165组新生血管和成纤维细胞浸润高于其他各组。生物力学测试证明,PDGF-BB组和TGFβ1组移植物的最大载荷刚度、吸收能和最大拉张强度明显较对照组增强(P<0.05),细胞组和VEGF165组最大载荷、刚度和吸收能虽高于对照组,但无显著差异(P>0.05),VEGF165组拉断位移大于对照组(P<0.05)。所有实验组移植物、正常ACL和跟腱都在体部断裂。结论转VEGF165基因的MSCs可增加重建韧带的血管,但对生物力学功能无改善;转PDGF-BB基因和TGFβ1基因的MSCs有加速重建韧带成熟的作用。; 魏学磊李峰林霖侯宇张继英付欣于长隆; 关键词：骨髓间充质干细胞同种异体前交叉韧带

骨形态发生蛋白4重组腺病毒的构建及其对NIH3T3细胞成骨分化作用的研究被引量：2: 2008年; 目的:构建骨形态发生蛋白4(BMP4)重组腺病毒,探讨其对NIH3T3成纤维细胞向成骨方向分化的影响。方法:将BMP4基因克隆连接到载体pAdTrack-CMV中,在细菌BJ5183中与pAdEasy腺病毒基因组进行同源重组,得到BMP4重组腺病毒基因组,通过转染HEK293细胞包装出重组腺病毒。利用BMP4重组腺病毒转染NIH3T3细胞,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和western-blot检测BMP4在细胞中的mRNA和蛋白表达。Gomori改良钙钴法检测BMP4重组腺病毒转染后的NIH3T3细胞碱性磷酸酶表达;von kossa染色检测BMP4重组腺病毒转染后NIH3T3细胞的成骨分化情况。结果:获得了BMP4转移质粒pAdTrack-BMP4和BMP4重组腺病毒基因组,并包装出重组腺病毒。BMP4在转染后的NIH3T3细胞中得到表达,表达的BMP4蛋白具有生物学活性。转染后的NIH3T3细胞碱性磷酸酶表达增加。BMP4促进了NIH3T3细胞向成骨方向分化,形成钙结节。结论:本实验成功构建了BMP4重组腺病毒;BMP4重组腺病毒可促进NIH3T3细胞向成骨方向分化。; 林霖傅欣张辛陈连旭王海军魏学磊侯宇张继英于长隆; 关键词：骨形态发生蛋白4 腺病毒 NIH3T3细胞基因治疗

骨形态发生蛋白4、脱钙骨基质和切断跟腱诱导的异位骨化动物模型的研究被引量：6: 2008年; 目的:建立骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)、脱钙骨基质和切断跟腱诱导的异位骨化动物模型,并初步探讨其形成机制,为异位骨化的研究奠定实验基础。方法:制备动物模型:(1)构建BMP4重组腺病毒,实验组裸鼠的一侧腓肠肌内注入50μl1×107pfu BMP4重组腺病毒液,对照组腓肠肌内注入50μl1×107pfu空病毒液。4周后行X线和组织学检查。(2)无菌条件下,股后外侧入路,将50mg脱钙骨基质植入裸鼠股后肌群内,4周后行X线和组织学检查。(3)20只小鼠于跟腱中点行跟腱切断术,10周后行X线和组织学检查。结果:X线和组织学检查显示4周后,注射BMP4重组腺病毒的动物均出现异位骨,注射空病毒组未见异位骨形成。4周后,植入脱钙骨基质的动物均出现异位骨。10周后,行跟腱切断术的动物均在跟腱部位出现异位骨。结论:BMP4、脱钙骨基质和切断跟腱可有效诱导异位骨化,结果稳定可靠。; 林霖陈连旭张辛王海军魏学磊侯宇傅欣张继英于长隆; 关键词：异位骨化动物模型骨形态发生蛋白4 脱钙骨基质

氨基葡萄糖和硫酸软骨素联合用药对兔骨关节炎治疗作用实验研究被引量：19: 2008年; 目的:观察氨基葡萄糖(GS)和硫酸软骨素(CS)对兔骨关节炎不同时期关节软骨退变和关节液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,初步探讨GS和CS对兔骨关节炎治疗作用的机制。方法:45只成年新西兰大白兔,随机分为5组,分别为低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照组、阴性对照组,每组9只(18个膝关节)。采用内侧副韧带切断术和内侧半月板切除术建立骨性关节炎模型,术后次日即进行动物的药物灌胃,每日1次,每组各取3只动物分别于灌胃1周、2周、3周后取材。阳性对照组灌胃用等剂量的蒸馏水。采用墨汁染色的方法大体观察软骨损伤情况,使用光镜观察关节软骨组织学的变化;采用酶联免疫吸附法测定关节液中IL-1β和TNF-α含量。结果:墨汁染色法和软骨组织学检查结果显示1周和2周后,低、中、高剂量组与阳性对照组之间均有显著性差异(P<0.05),低、中、高剂量组之间无显著性差异(P>0.05);3周后,低、中、高剂量组与阳性对照组之间均有显著性差异(P<0.05),中、高剂量组之间无显著性差异(P>0.05),低、高剂量组之间有显著性差异(P<0.05)。术后1、2、3周,各治疗组关节液中炎性因子IL-1β和TNF-α含量均显著低于阳性对照组,但显著高于阴性对照组。结论:不同剂量的GS和CS对兔骨关节炎不同时期软骨损伤均有一定的保护和治疗作用,减少关节液中炎性因子IL-1β和TNF-α的表达,可以较好地延缓OA的进展。; 傅欣林霖魏学磊侯宇张继英王锦程于长隆; 关键词：氨基葡萄糖硫酸软骨素骨关节炎白细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子Α

Runx2特异性siRNA筛选和功能鉴定被引量：2: 2009年; 目的:筛选Runx2特异性siRNA,优化反应条件,抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化,探讨异位骨化基因治疗的新思路。方法:使用Ambion公司提供的网上工具,设计5条针对小鼠Runx2的mRNA的模板,用体外转录合成法合成5条siRNA;采用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质两个水平,在培养的MC3T3-E1成骨前体细胞中筛选有明显抑制作用的siRNA,并优化反应条件。将筛选出的siRNA转染成骨细胞,在不同时间点检测成骨细胞相关基因I型胶原、骨桥蛋白、骨钙蛋白、骨涎蛋白mRNA的表达,采用碱性磷酸酶活性分析检测碱性磷酸酶活性的变化。结果:在合成的5条siRNA中,siRNA1657-1677对Runx2的抑制效果最明显,最佳反应条件是:浓度80nM、脂质体/siRNA为1∶1、转染时间为72小时。采用RNAi技术抑制Runx2的表达可以抑制成骨相关基因如I型胶原、碱性磷酸酶、骨桥蛋白和骨钙蛋白等的表达,阻止成骨细胞分化。结论:Runx2特异性siRNA可以抑制成骨细胞分化,可用于异位骨化基因治疗的实验研究。; 林霖陈连旭王海军侯宇薛涛傅欣于长隆; 关键词：RUNX2 SIRNA 成骨细胞异位骨化

不同频率冲击波促进兔管状骨成骨的实验研究被引量：4: 2010年; 目的:研究不同频率冲击波对兔管状骨骨膜及骨皮质的影响。方法:对正常新西兰大白兔的下肢胫骨部位应用不同频率的冲击波进行3天或7天冲击后,取材进行组织学HE染色,组织化学甲苯胺蓝染色,观察不同频率冲击波冲击对内、外骨膜和骨皮质影响的病理学过程。结果:正常胫骨经过不同频率冲击波冲击后均有外骨膜出血增厚,骨髓腔开放并纤维化,可见成骨样细胞增生;甲苯胺蓝染色未见成骨过程中有软骨形成,出现典型的骨膜成骨改变,7天组改变比3天组更明显,但是内骨膜无明显变化;较低频率的冲击波促进外骨膜增生及骨髓腔开放,纤维化的程度远较高频率冲击波明显。结论:不同频率冲击波作用于管状骨时主要是通过促进外骨膜生发层增生,骨髓腔开放,纤维化,骨皮质增厚来促进成骨,不经过软骨化骨的过程,而对内骨膜没有影响;不同频率冲击波促进成骨的能力与冲击波频率密切相关,高频冲击波不是促进成骨过程的理想手段。; 张继英侯宇薛涛段小宁傅欣田明于长隆; 关键词：冲击波骨皮质

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侯宇

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