吴志强
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
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- H19和IGF2R基因在体细胞克隆猪各组织中的甲基化状态被引量：6
- 2012年
- 为了探求新生克隆猪可能的死亡原因以及是否存在不完全的DNA甲基化重编程,本试验运用亚硫酸氢盐测序法分别检测了H19基因和IGF2R基因差异甲基化区(DMR)在新生死亡克隆猪和同期正常猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的甲基化状态。结果发现,H19基因DMR在克隆猪肺脏中表现为超甲基化,极显著高于正常猪(95.20%vs 46.80%P<0.01),且10个测序克隆中存在2处连续的全甲基化CpG位点(4～9位、12～S17位),而在其他组织中甲基化差异不显著(P>0.05);IGF2R基因DMR在肝脏中处于超甲基化状态,显著高于正常猪(80.00%vs 39.41%P<0.05),而在肺脏中为去甲基化状态,极显著低于正常猪(14.71%vs 66.47%P<0.01),在其他组织差异不显著(P>0.05)。结果说明,在死亡克隆猪中,H19基因DMR在肺脏和IGF2R基因在肝脏与肺脏中存在不完全的DNA甲基化重编程,这可能是导致克隆动物死亡的因素之一。
- 吴志强谢一妮戴建军张廷宇吴彩凤张树山顾晓龙刘亮吴斌陈慧兰张德福马恒东
- 关键词：DNA甲基化体细胞克隆
- 新生克隆猪不同组织中IGF2/H19基因和IGF2R基因的甲基化状态研究
- 猪体细胞克隆技术在畜牧业生产、医药研究、治疗性克隆和珍稀濒危动物的保护等方面具有重要的意义,然而克隆效率低及克隆动物发育异常等严重制约了该技术的发展和应用。供体细胞的不完全重编程是导致其效率低和发育异常的重要原因。印迹基...
- 吴志强
- 关键词：体细胞克隆DNA甲基化印迹基因
- 文献传递
- 体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究被引量：1
- 2014年
- 为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。
- 戴建军吴彩凤张树山顾晓龙张廷宇吴志强张德福
- 关键词：植酸酶
- 单层细胞共培养对猪去卵丘卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响
- 2011年
- 本试验比较观察第一极体(The first polar body,PbⅠ)、Oosight imaging system观察和hocchst33342染色法对第2次减数分裂中期(Metaphase Ⅱ,MⅡ)卵母细胞判定结果的相关性分析,并探讨卵巢皮质细胞(porcine ovarian cortex cells,pOCCs)、猪输卵管上皮细胞(porcine oviductal epithelial cells,pOECs)和猪卵丘颗粒细胞(porcine cumulus cells,pCCs)等3种单层细胞体外共培养体系对猪去卵丘卵母细胞(cumulus cells denuded oocytes,Dos)体外成熟(in vitro maturation,IVM)和孤雌发育的影响。结果显示:(1)Oosight imaging system判定卵母细胞成熟的结果与hocchst33342染色法判定的结果有很强相关性(R=0.973,P<0.01,N=90);(2)pOCCs单层细胞共培养体系中猪去卵丘卵母细胞成熟率显著高于pOECs((52.5±0.30)%vs(43.8±2.18)%,P<0.05),且这2组成熟率显著高于其余各组(P<0.05);Dos在3种单层细胞共培养体系培养后,成熟卵母细胞GSH含量较非共培养组都能显著升高(P<0.05),pOCCs组GSH含量最高((7.1±0.32)pmol/卵);(3)成熟后的Dos经孤雌激活,pOCCs组和pOECs组卵裂率和囊胚率都显著高于其余2组(P<0.05)。
- 顾晓龙孟祥黔吴彩凤戴建军张廷宇谢一妮吴志强刘亮曾宪垠张德福
- 关键词：共培养体外成熟
- 克隆猪印迹基因IGF2/H19印迹控制区的甲基化状态被引量：5
- 2011年
- 为了探求核移植过程中DNA甲基化重编程是否充分,运用亚硫酸氢盐测序法分别检测新生死亡克隆猪和同期正常猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织中IGF2/H19基因印迹控制区(DMR1、DMR2、DMR3)的甲基化状态。结果发现,DMR1、DMR3在克隆猪和正常猪各组织中的甲基化水平不同,但差异不显著(P>0.05)。DMR2在克隆猪肺脏组织表现为超甲基化,极显著高于正常猪(P<0.01),且10个测序克隆中存在2处连续的全甲基化CpG位点(分别为4-9位和12-17位),而在其它组织中甲基化差异不显著(P>0.05)。说明DMR2在克隆猪肺脏组织可能存在DNA甲基化重编程紊乱,这也可能是导致该克隆猪死亡的因素之一。
- 吴志强谢一妮张廷宇戴建军吴彩凤马恒东张德福
- 关键词：DNA甲基化体细胞克隆
- H19和IGF2R基因在体细胞克隆猪各组织中的甲基化状态
- 本实验采用亚硫酸氢盐测序法对H19和/GF2R基因在新生克隆猪心脏、肝脏、脾 脏、肺脏和肾脏中的甲基化状态进行检测,通过比对其与正常猪各组织甲基化程度的差异,以求找出导致克隆猪死亡的可能原因.
- 吴志强陈慧兰张德福谢一妮戴建军张廷宇吴彩凤张树山顾晓龙刘亮吴斌
- 关键词：DNA甲基化体细胞克隆
- 猪精液、胚胎冷冻技术在地方猪种保种中的应用
- 张德福戴建军吴彩凤张廷宇张树山林田顾晓龙吴志强刘亮
- 进一步优化了猪精液冷冻技术(精液大管(5mL)冷冻技术)筛选并研制出高效、低毒(无毒)的冷冻保存液,进一步优化了猪精子冷冻保存的实用化技术-精液大管(5mL)冷冻技术,克服了传统颗粒、细管法存在的局限,实现一支冷冻精液输...
- 关键词：
- 关键词：冷冻保存胚胎移植
- 克隆猪中印迹基因IGF2/H19印迹控制区的甲基化状态
- 为了探求核移植过程中DNA甲基化重编程是否充分,运用亚硫酸氢盐测序法分别检测新生死亡克隆猪和同期正常猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏组织中IGF2/H 19基因印迹控制区(DMR1,DMR2,DMR3)的甲基化状态.结果发...
- 吴志强谢一妮张廷宇戴建军吴彩凤马恒东张德福
- 关键词：DNA甲基化体细胞克隆
- 超数排卵法生产奶牛胚胎效果的研究
- 本实验以荷斯坦牛作为试验动物，不同激素使用模式对同期发情处理及超数排卵法生产胚胎的效果进行了研究。
同期发情处理中，肌肉注射氯前列烯醇，分成0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg4个剂量组，同期发情率分别为...
- 吴志强
- 关键词：奶牛同期发情超数排卵氯前列烯醇
- 文献传递
- 海藻糖对猪精子冷冻真空干燥保存效果的影响被引量：4
- 2010年
- 猪精子经冷冻干燥后,在光学显微镜和电子显微镜下观察其超微结构,并借助辅助生殖技术将其注入猪卵母细胞后,进一步观察受精卵的发育情况。结果表明:海藻糖组雄原核形成率(68.52%)、卵裂率(59.17%)和囊胚率(19.16%)优于EDTA组(64.59%、56.26%和15.62%)和对照组(35.36%、52.33%和8.60%)(P<0.05);海藻糖组的冷冻真空干燥猪精子分别在4℃下保存60、120、180d,雄原核形成率、卵裂率和囊胚率均无显著差异(P>0.05);海藻糖组的冷冻真空干燥猪精子复水化后孵育1h和2h,卵裂率、卵裂率和囊胚率均差异显著(P<0.05);海藻糖处理组与EDTA处理组中的冷冻真空干燥猪精子分别在4℃和-20℃下保存后各处理组间精子形态差异不显著(P>0.05);海藻糖组中B级冷冻真空干燥精子百分数显著多于EDTA处理组(P<0.05)。超微结构分析表明,冷冻真空干燥猪精子的损伤主要表现在顶体和颈部的肿胀与缺损、尾部断裂。
- 孟祥黔顾晓龙吴彩凤戴建军张廷宇谢一妮吴志强刘亮马恒东张德福
- 关键词：猪精子冷冻真空干燥单精子注射
