姚海燕
- 作品数：16 被引量：49H指数：4
- 供职机构：兰州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 早期胃腺癌原代细胞适配子的筛选与鉴定被引量：2
- 2013年
- 胃腺癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,由于没有针对早期胃腺癌有效的诊断方法,目前胃腺癌手术治疗还主要针对中晚期患者,预后差.本文应用cell-SELEX技术,筛选早期胃腺癌原代细胞的适配子,为早期胃腺癌的诊断提供新的思路.从早期胃腺癌组织中分离得到早期胃腺癌原代细胞,应用体外合成全长88 bp中间含52 bp随机序列的单链DNA文库,通过对PCR扩增条件的优化,借助生物素-链霉亲和素磁珠系统,经cell-SELEX反复筛选,可获得针对早期胃腺癌原代细胞的特异性适配子.经12轮cell-SELEX筛选,ssDNA文库与早期胃腺癌原代细胞的亲和力由1 560上升到4 336,表明亲和力较高的适配子得到逐步富集.经克隆和测序,应用软件分析可知,30个克隆子中编号为C17和C27的2个序列完全一致,具同源性,二级结构预测可知单链DNA形成不同的茎环结构可能是适配子与早期胃腺癌原代细胞作用的结构基础.特异性分析显示,胃腺癌原代细胞组与正常胃粘膜上皮细胞、空白对照组之间荧光强度值差异非常显著(P<0.01);正常胃粘膜上皮细胞组与空白对照组之间差异不显著(P>0.05).经亲和力测定,各适配子与早期胃腺癌原代细胞的解离系数达到nmol/L,具有很高的亲和力.利用cell-SELEX技术成功筛选到早期胃腺癌原代细胞的适配子,为胃腺癌的早期诊断与治疗药物靶点方面的研究奠定了实验基础.
- 郭鹏习静张雪燕姚海燕马驰马鑫杨敏冯慧婷侯纯荣徐先云韩跃武
- 关键词：胃肿瘤腺癌适配子
- 临床生物化学检验技术课程中PBL+CBL教学案例的编写被引量：12
- 2020年
- “问题”结合“案例”的教学方法(PBL+CBL)具有研讨性、启发性和灵活性的优势,是激发学生学习兴趣、理论联系实践的一种有效教学方法。案例质量是PBL+CBL教学效果的决定性因素之一。在“临床生物化学检验技术”课程案例的编写过程中要明确教学目标,统筹学生已有知识架构,遵循由浅入深、循序渐进及学多深设计多深的原则。
- 张雪燕姚海燕郝春燕陈卫
- 关键词：PBLCBL教案
- 一种含有N-芳基磺酸酯的吡唑化合物及其合成和应用
- 本发明公开了一种含有N‑芳基磺酸酯的吡唑化合物，其结构式如下：<Image file="DEST_PATH_IMAGE002.GIF" he="127" imgContent="drawing" imgFormat="G...
- 王锐许兆青郭全平姚海燕
- 人源抗菌肽LL-37及其改良体串联体的原核表达及纯化被引量：2
- 2012年
- 目的克隆人源抗菌肽(Antimicrobial peptide,AMP)LL-37及其改良体串联体基因,原核表达并纯化重组蛋白。方法利用生物信息学手段,对人源抗菌肽LL-37基因序列进行改良设计,合成人源抗菌肽LL-37及其改良体基因片段,经重叠延伸PCR获得人源抗菌肽LL-37及其改良体串联体基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-dLL-37,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,Tricine SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式,镍金属螯合亲和层析纯化重组蛋白。结果改良后的人源抗菌肽LL-37的等电点、稳定性及其在大肠杆菌中的半衰期均显著提高;重组表达质粒pET-28a-dLL-37经测序鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为11 000,主要以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白纯度可达95%,浓度为0.473 mg/ml。结论已成功在大肠杆菌中表达并纯化了人源抗菌肽LL-37及其改良体串联体,为其后续生物学活性的研究奠定了基础。
- 杨浩姚海燕陈圆圆阎波郭鹏马驰韩跃武
- 关键词：抗菌肽串联体重叠延伸PCR原核细胞纯化
- 牛乳铁蛋白十肽的基因改造、克隆及表达被引量：3
- 2008年
- 目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟胺裂解位点,通过连接获得其二拷贝基因同向串联体。分别将该串联体克隆至载体pUC18上,经双酶切、PCR及测序鉴定后,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,用凝血酶切割及羟胺裂解。结果获得了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2二拷贝基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出相对分子质量约29000的目的蛋白条带,纯化后的蛋白经凝血酶切割后,相对分子质量约29000的目的蛋白条带消失。结论已成功克隆并表达了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,为基因工程抗真菌肽的制备奠定了基础。
- 姚海燕韩跃武张雪燕谢俊秋
- 关键词：抗真菌肽基因改造基因克隆
- 检测慢性粒细胞白血病的单链DNA适配子及其制备方法
- 本发明提供了一种检测慢性粒细胞白血病的单链DNA适配子及其制备方法，体外合成长度为88个碱基的随机单链DNA文库，采用生物素-链霉亲和素磁珠法制备次级文库，以正常人中性粒细胞为反筛细胞，利用SELEX技术筛选出与慢性粒细...
- 韩跃武刘玲玲姚海燕查成喜
- 文献传递
- 早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子及制备方法
- 本发明公开一种早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子及制备方法。本发明的早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子的基因序列分别为：SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5。...
- 韩跃武徐攀邵明洋杜振亚张雪燕姚海燕马驰
- 文献传递
- 人颗粒溶素活性片段原核表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建人颗粒溶素(GNLY)活性片段原核表达载体。方法采用RT-PCR技术从健康人外周单个核细胞中扩增出颗粒溶素活性片段cDNA,将其与表达载体pGEX-4T-1经限制性核酸内切酶双酶切后连接,转化E.coliBL21,挑取阳性菌落,抽提重组质粒并鉴定。IPTG诱导表达GST融合蛋白,亲和层析纯化,SDS-PAGE分析表达和纯化结果,抑菌圈法鉴定表达产物的活性。结果重组质粒插入基因序列测定证实为颗粒溶素活性片段cDNA。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量29000处出现一明显条带,与理论结果相符。抑菌试验表明,融合蛋白分子凝血酶切产物对革兰阳性的金黄色葡萄球菌ATCC25938有抑制作用。结论已成功构建了人颗粒溶素活性片段原核表达载体,为进一步研究其抗菌、抗肿瘤作用奠定了基础。
- 张雪燕韩跃武姚海燕谢俊秋张庆华
- 关键词：活性片段原核表达
- 早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子及制备方法
- 本发明公开一种早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子及制备方法。本发明的早期胃腺癌原代细胞单链DNA适配子的基因序列分别为：SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4和SE...
- 韩跃武徐攀邵明洋杜振亚张雪燕姚海燕马驰
- 文献传递
- 基于OBE教育理念的生物化学实验教学研究与实践被引量：8
- 2023年
- 将成果导向教育(outcome-based education,OBE)理念融入生物化学实验教学,对于学生未来的发展以及满足社会需求具有非常重要的意义。本文以学生学习产出为起点和核心,探索OBE理念下生物化学实验课程目标的制定、教学的实施及考核方式的革新。以期通过教学改革,增强学生学习的积极性和主动性,提高教学质量,为培养高素质医学人才打下基础。
- 张雪燕姚海燕张哲文郝春燕王媛
- 关键词：生物化学实验实验教学教学质量
