姜小丹
- 作品数：29 被引量：60H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TNF结合肽和TNFR封闭肽的筛选及其鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的筛选能与TNF-α结合的环肽(称为TNF结合肽)以及既能与TNFR-Ⅰ结合又不诱导TNFR相关生物学效应的环肽(称为TNFR封闭肽)。方法采用噬菌体随机肽库展示技术分别以hrTNF-α和hrTNFRⅠ为诱饵进行亲和筛选,ELISA方法进行噬菌体特异性鉴定,应用细胞毒抑制实验和RT-PCR技术等进行噬菌体的生物学效应鉴定。根据噬菌体展示肽的DNA序列合成环肽。结果对肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果;5种TNF结合噬菌体克隆(5、6、7、32及38号克隆)和2种TNFR封闭噬菌体(X2、X4号克隆)分别能与TNF-α和TNFR特异性结合,并且均能显著抑制sTNF-α对L929细胞和U937细胞的杀伤作用,TNFR封闭噬菌体不仅本身无促进U937细胞IL-1βmRNA转录的作用,而且还能有效抑制sTNF-α的生物学效应;并且发现X4与32号、X4与38号联用的细胞毒抑制效应均较其单独作用的效果好,其中X4与38号联用的抑制率高达85.3%,显著高于各自单独的抑制作用(P<0.01)。选择32、38和X4号噬菌体克隆进行DNA测序并合成环肽。结论从噬菌体随机环肽库中筛选得到能够抑制sTNF-α生物学功能的TNF结合肽和TNFR封闭肽,为研制TNF相关的多肽类抗炎药物奠定了实验基础。
- 尹丙姣王晶喻明霞姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：噬菌体肽库肿瘤坏死因子-Α
- 非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立
- 2005年
- 目的 建立非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型。方法常规培养NK92细胞和猪内皮细胞(PEC)，利用MTT法检测NK92细胞对PEC细胞的杀伤效应，通过β-hexosaminidase释放实验显示杀伤过程中，NK92细胞的胞吐量。结果效靶比为10：1时作用时间6h，NK92细胞的胞吐量最大，对PEC的杀伤率为100％。结论NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立成功。
- 姜小丹吴群熊平冯玮郑芳龚非力
- 关键词：非何杰金氏淋巴瘤细胞杀伤MTT法检测杀伤效应EC细胞胞吐
- 87位氨基酸在TM-TNF-α诱导靶细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2004年
- 目的 研究TM TNF α分子结构与功能的关系 ,阐明其诱导靶细胞凋亡的分子机制。方法 构建定点突变的 87/PheTM TNF pcDNA3.0 ,并瞬时转染Cos 7细胞 ,利用MTT法 ,annexinⅤ ,Westernblot检测TM TNF α突变体的胞毒效应 ,对靶细胞死亡方式及对核转录因子NF κB转位的影响。结果 87位氨基酸置换后 ,TM TNF α对靶细胞的杀伤率无明显改变 ,但TM TNF α突变体通过促进NF κB核转位 ,诱导靶细胞死亡的方式由凋亡转为坏死。结论 87位氨基酸是TM TNF α诱导靶细胞凋亡的关键氨基酸残基 。
- 郑芳姜小丹冯玮龚非力李卓娅
- 关键词：靶细胞凋亡坏死MTT法定点突变
- 重组肿瘤坏死因子-α抗血清对大鼠实验性结肠炎的影响被引量：2
- 2005年
- 目的探讨灌胃给予肿瘤坏死因子α(TNFα)多克隆抗体对溃疡性结肠炎的作用。方法以50mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)经肛门注入大鼠肠腔,复制大鼠溃疡性结肠炎模型;用兔抗人TNFα多克隆抗体血清10mg/kg给大鼠灌胃,观察一氧化氮(NO)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性及TNFα在大鼠溃疡性结肠炎组织中的表达。结果抗TNFα多克隆抗体治疗可明显减轻溃疡性结肠炎的病理改变,抑制局部结肠组织NO的产生、MPO活性以及TNFα表达。结论抗TNFα血清通过中和TNFα,可抑制溃疡性结肠炎结肠组织表达TNFα及炎性介质的释放,从而减轻溃疡性结肠炎的病理损伤。
- 姜小丹尹丙姣石文芳冯玮徐勇李卓娅
- 关键词：溃疡性结肠炎肿瘤坏死因子-Α
- 人跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)特异性单克隆抗体的制备、鉴定及功能初探
- 2007年
- 目的:制备TM-TNF-α特异性单克隆抗体,并进行鉴定和初步功能分析。方法:用表位预测软件选定TM-TNF-α特异的20个氨基酸多肽,偶联载体蛋白,免疫BALB/c小鼠;用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用ELISA、流式细胞术和Western blot鉴定单抗的特异性,观察单抗对Jurkat细胞在AICD模型中凋亡率的影响。结果:成功制备了6株抗TM-TNF-α的单克隆抗体。ELISA结果显示6株单抗均特异性结合免疫原多肽,与S-TNF-α等细胞因子无交叉反应;流式细胞术显示6株单抗均能结合细胞膜表面TM-TNF-α分子,并可区分人源和鼠源TM-TNF-α;Western blot结果证实6株单抗只能识别26kD的人TM-TNF-α,而不识别17kD的S-TNF-α。在AICD模型中,单克隆抗体不影响Jurkat细胞凋亡率。结论:成功制备了6株TM-TNF-α特异性单克隆抗体,且单抗不干扰TNF-α与TNFR结合,为进一步研究TM-TNF-α在相关疾病中的作用提供又一研究手段。
- 柯杭君喻明霞王晶石文芳姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：跨膜型TNF-Α单克隆抗体杂交瘤技术
- 跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序稳定表达细胞株的建立及功能研究
- 2007年
- 目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获得能稳定表达TNF-ICD细胞株。采用MTT法检测转染细胞对TNF-α的敏感度,比色法检测NO含量,ELISA方法检测NF-κB的活性。结果TNF-ICD基因转染入MCF-7细胞后表达在细胞膜上,并能提高该细胞NF-κB活性,抵抗TNF-α的杀伤,增加其NO产生;应用NF-κB抑制剂PDTC处理后能恢复该细胞对TNF的敏感性。结论获得稳定表达TNF-ICD的MCF-7细胞株,TNF-ICD可能作为TM-TNF-α细胞内的一段活化基序参与TM-TNF-α的反向信号,并通过活化NF-κB,抵抗可溶性TNF-α介导的细胞毒作用,增加NO的产生。
- 秦娜琳尹丙姣王妮丹朱建华庞艳姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：反向信号MCF-7细胞
- GFP-TNF融合蛋白的制备及在亲和力研究中的运用
- 2005年
- 目的:在TNF的研究中寻找一种取代同位素标记的检测亲和力的方法。方法:表达及纯化GFP-TNF融合蛋白;鉴定GFP-TNF融合蛋白;用GFP-TNF与TNF做TNF受体的竞争结合分析。结果:GFP-TNF与TNF可竞争结合U937细胞表面的TNFR。结论:GFP-TNF有望取代125I-TNF在TNF的研究中作为检测亲和力的工具。
- 张磊李卓娅刘丽江姜小丹
- 关键词：TNF-Α
- 利用噬菌体肽库筛选TNF-α表位的相关短肽被引量：9
- 2002年
- 目的 从噬菌体肽库筛选TNF α相关短肽 ,为临床上治疗肿瘤奠定基础。方法 用可溶性TNF受体Ⅰ (sTNFRⅠ )筛选噬菌体随机 12肽库 ,利用细胞毒效应进行生物学效应筛选 ,再进行单链DNA测序。结果 分别得到若干模拟跨膜型TNF α(TM TNF α)和模拟分泌型TNF α(S TNF α)细胞毒效应的短肽 ,选择细胞毒效应最好的模拟TM TNF α短肽进行人工合成 ,体外实验显示此肽段对S TNF α耐受肿瘤细胞系HL 6 0具有明显细胞毒效应 ,且主要引起靶细胞凋亡。另外 ,利用激光共聚焦显微镜证实该合成肽段不能诱导NF κB发生核转位。结论 获得模拟TM TNF α的短肽 ,为TM TNF α用于临床抗瘤治疗提供新线索。
- 叶飞姜小丹李卓娅龚非力徐勇冯玮熊平
- 关键词：噬菌体肽库跨膜型TNF-Α细胞毒效应免疫疗法
- NK92细胞的胞吐效应与SNAP-23蛋白转位相关被引量：1
- 2005年
- 目的 研究SNAP 2 3蛋白在NK细胞系NK92细胞胞吐效应中的作用 ,探讨NK细胞胞吐的分子机制。方法 利用已糖氨酶 (β hexosaminidase)释放实验检测NK细胞的胞吐作用。通过RT PCR和Westernblot显示NK92细胞中SNAP 2 3amRNA和蛋白的表达 ,利用激光共聚焦显微镜扫描术确定靶细胞触发前后SNAP 2 3α在NK92细胞中的定位。结果 NK细胞的胞吐作用在靶细胞刺激后 2h明显 ,4～ 6h达高峰 ;NK92细胞组成性表达SNAP 2 3amRNA和蛋白 ,靶细胞刺激前后蛋白表达量虽无明显差异 ,但其定位发生了显著改变 :激光共聚焦显微镜扫描结果显示在静息NK92中SNAP 2 3a主要表达在胞浆内的颗粒上 ,经靶细胞刺激后逐渐向细胞膜发生转位 ,2h明显转位 ,4～ 6h几乎完全转位。结论 NK细胞的胞吐效应与SNAP 2 3蛋白转位相关。
- 郑芳吴群姜小丹冯玮熊平刘君炎龚非力
- 关键词：激光共聚焦显微镜胞吐作用NK细胞系BLOT细胞组成胞浆内
- TM-TNF-α单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的研究
- 目的:研究TM-TNF-α单克隆抗体体内外抗肿瘤的效应。方法:在体外实验中,用FACS检测乳腺癌细胞株MDA-MD-231的TM-TNF的表达;用经典ADCC和CDC方法检测C1单克隆抗体抗肿瘤效应。在体内实验中,采用常...
- 喻明霞牛麟王晶尹丙娇姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：单克隆抗体TM-TNF-ΑADCCCDC抗肿瘤活性
- 文献传递
