孔祥英
- 作品数：30 被引量：33H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 宋内氏痢疾菌侵袭相关基因的克隆与表达
- 1993年
- 用粘粒PJB8为载体,构建了宋内氏痢疾茵I相大质粒基因库,用菌落原位杂交,Western blot方法从文库中筛选到1株表达IpaA,B,C,D 4种蛋白的重组子,经重组质粒酶切和Southern blot等方法对宋内氏菌和福氏2a痢疾菌的侵袭相关基因片段作了初步比较分析。
- 罗振革高杰英孔祥英苏新
- 关键词：基因克隆基因表达
- 人整合素分子α4亚基片段的克隆和表达被引量：2
- 2001年
- 目的克隆并表达人整合素分子α４亚基１．２ｋｂｃＤ－ＮＡ片段。方法从 ＨＬ－６０细胞系中提取总 ＲＮＡ，以 ＲＴ－ ＰＣＲ法扩增人整合素分子 α４亚基片段 １． ２ ｋｂ ｃＤＮＡ（１７５３－ ２ ９３４ｂｐ），并将该片段亚克隆至表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ，用ＩＰＴＧ（诱导表达。结果克隆了 α４亚基 １．２ ｋｂ ｃＤＮＡ片段。序列分析表明，其所编码的氨基酸序列与文献相比较只有一处错义突变（Ａｒｇ→Ｇｌｎ），经分析该突变对抗原性影响不大。将该片段亚克隆至表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ，经ＩＰＴＧ诱导在大肠杆菌中获得高效表达。结论获得了α４亚基１．２ｋｂｃＤＮＡ片段及其原核表达产物，对研究α４整合素的功能具有重要的意义。
- 刘永全高杰英罗振革孔祥英梅俊杰彭虹
- 关键词：RT-PCRCDNA克隆
- 重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备被引量：3
- 1999年
- 用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段，直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，经ＤＮＡ序列测定后，再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ位点之间，构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ，将此质粒导入大肠杆菌，经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ重组融合蛋白的表达，用谷胱甘肽偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ经亲合层析获得纯化的ＧＳＴ－ｈＦＡＳ蛋白，经凝血酶酶切和二次亲合层析去除ＧＳＴ部分，得到纯化的ＦＡＳ蛋白．用纯化的ＦＡＳ抗原免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体。
- 罗振革孔祥英彭虹张明高杰英
- 关键词：FAS分子GST融合蛋白纯化抗体
- 小鼠白细胞介素5融合蛋白在大肠杆菌的表达被引量：5
- 1997年
- 将质粒ｐＢＶ－ｍＩＬ－５的小鼠白细胞介素５（ｍＩＬ－５）的ｃＤＮＡ插入表达载体ｐＥＸ３１ｂ，转化大肠杆菌ＲＲＩ，经热诱导获得高效表达，表达的重组蛋白占菌体总蛋白的４０％。该融合蛋白由大肠杆菌ＭＳ２聚合酶的９９个氨基酸和ｍＩＬ－５的１１３个氨基酸组成，在菌体中以包涵体的形式存在，用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００、尿素洗涤包涵体，初步纯化的重组蛋白纯度达９０％，已用于制备抗ｍＩＬ－５的单克隆抗体。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和ＥＬＩＳＡ证实ｍＩＬ－５重组蛋白能与抗ｍＩＬ－５多克隆ＩｇＧ特异结合。
- 梅俊杰高杰英丁广治孔祥英彭虹彭虹
- 关键词：白细胞介素5蛋白纯化大肠杆菌
- 痢疾双价工程菌株安全保护基础及遗传背景分析
- 1993年
- 本文通过毒力生物表型、抗原表达及相关基因结构的研究,对痢疾双价工程菌株FS-18、FS-15A及其回变株FS-15V安全保护的基础及遗传背景进行了分析。认为工程菌株同时表达福氏及宋内氏O抗原是其双价保护的基础。FS-18及其亲株48025A质粒缺失20Kb左右的侵袭相关基因片段,不表达四种侵袭相关蛋白,丧失侵袭生物表型是其安全与无毒力的分子基础。FS-15A与FS-15V侵袭基因完整,但Tn5插入位点的不同可能是它们毒力表型不同的原因。该研究为工程菌苗的改进提供了依据。
- 吴振彪高杰英孔祥英刘一平苏新
- 关键词：痢疾工程菌株
- 一个高效表达且纯化简单的重组蛋白载体系统被引量：2
- 1996年
- 目前已发展了几种快速、有效地纯化细菌表达重组蛋白的方法。谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合表达系统是通过非变性条件下亲和吸附到谷胱甘肽－琼脂糖上，从细菌粗提物中纯化融合蛋白的。为便于从融合蛋白中解离出目的多肽，这个载体中含有特异的蛋白酶裂解位点。本研究比较了这个系统中的两个不同的载体。结果表明，它们都能高效表达谷胱甘肽转硫酶－白介素１受体拮抗剂（ＧＳＴ－ＩＬ－１ｒａ）融合蛋白，但凝血酶对融合蛋白的裂解效率有很大区别，ｐＧＥＸ－ＫＧ载体不仅大大提高了凝血酶的裂解效率，而且简化了纯化过程。因此，它为大批量用细菌表达真核蛋白的制备纯化提供了一种简便、廉价而有效。
- 刘学博李胜华梁小兵孔祥英
- 关键词：重组蛋白基因表达基因载体
- 重组人可溶性白介素4受体基因克隆与表达
- 哮喘是一种过敏性疾病,严重危害人类健康。研究发现白细胞介素-4(interleukin-4)是引起哮喘的主要原因。IL-4通过与细胞表面的特异性受体结合而发挥作用。由此可见解决哮喘治疗的重要途径有研制IL-4的抗体。但目...
- 田光王希良孔祥英姚碧涛王英武素琴赵光宇
- 关键词：哮喘
- 文献传递
- 用PT－PCR法从U937细胞系克隆CD44H的cDNA
- 1995年
- 用ＰＴ－ＰＣＲ法从Ｕ９３７细胞系克隆ＣＤ４４Ｈ的ｃＤＮＡ罗振革，高杰英，孔祥英，苏新，朱锡华（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１００８５０）（第三军医大学免疫教研室，重庆６３００３８）ＣＤ４４是分布于多种细胞表面的糖蛋白分子，属粘附分子的成员，...
- 罗振革高杰英孔祥英苏新朱锡华
- 关键词：肿瘤肿瘤细胞CD44HCDNA
- 抗人粘膜地址素-1单克隆抗体的制备与初步鉴定被引量：1
- 2002年
- 目的制备抗人ＭＡｄＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）。 方法以重组人ＭＡｄＣＡＭ－１胞外区蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备ｍＡｂ。结果获得１０株可分泌特异性ｍＡｂ的杂交瘤细胞，其腹水ｍＡｂ的效价为３．２×１０５～１．９×１０６，ｍＡｂ的Ｉｇ亚类均为ＩｇＧ１，其中，８株ｍＡｂ的轻链属κ型，２株为λ型。应用于免疫组化染色法，检测表明，正常成人小肠、附睾及前列腺组织中存在ＭＡｄＣＡＭ－１阳性表达的血管内皮细胞。结论 成功地研制出抗人ＭＡｄＣＡＭ－１的ｍＡｂ，为进一步研究ＭＡｄＣＡＭ－１在肠道黏膜免疫中的作用提供了有用的试剂。
- 赖燕来高杰英孔祥英陈志华
- 关键词：单克隆抗体免疫组织化学
- 肝病患者血清中游离CD44和CD95的检测及其意义
- 2000年
- 罗振革彭虹张燕军孔祥英高杰英
- 关键词：肝疾病CD44CD95
