孙永珍
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白多克隆抗体的制备及初步应用被引量：2
- 2014年
- 以鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株基因组为模板,应用PCR方法扩增gG基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建pET-30a-gG-gG串联质粒,转化Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达及纯化,获得His-gG-gG重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。用ELISA检测抗体效价为1∶104。Western-blot分析结果表明,制备的家兔抗-ILTV gG抗体能与纯化的gG蛋白发生特异性反应,且能检测到内源性gG蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,制备的家兔抗ILTV-LJS09gG蛋白的多克隆抗体分别能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298株反应,特异性良好。
- 孙永珍赵妍孔聪聪崔红玉王云峰
- 关键词：传染性喉气管炎病毒原核表达多克隆抗体间接免疫荧光试验
- 鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究被引量：4
- 2014年
- 为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体,并研究鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gC蛋白在LMH细胞内的分布及gC蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用,本研究以ILTV—LJS09毒株基因组为模板,应用PCR方法扩增gC基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)构建pET-32a—gC质粒,经IPTG诱导表达并纯化,获得His—gC重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。Western blot结果表明,所制备的兔抗-ILTV gC抗体能与纯化的His—gC蛋白发生特异性反应且能检测到内源性gC蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,所制备的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多抗能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298毒株反应,特异性良好。采用获得的抗gC抗体观测LJS09-gC蛋白在LMH细胞内的分布,发现gC蛋白主要存在于病毒感染细胞的胞质和胞膜上,细胞核和未感染的细胞中没有gC蛋白。利用抗体中和ILTV gC蛋白的试验结果表明,gC蛋白可能直接参与病毒在细胞间传播,从而影响病毒蚀斑的形成。本研究成功制备了具有诊断价值的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多克隆抗体,并证实LJS09 gC蛋白在分布及功能上具有a-疱疹病毒的保守性,为gC蛋白生物学特性和ILTV感染机制的研究提供了重要数据。
- 孙永珍赵妍崔红玉王云峰
- 关键词：ILTV多克隆抗体细胞定位
