孙雪萍
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Sox2-R_9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定
- 2011年
- 构建、表达、纯化、鉴定Sox2-R9-EGFP融合蛋白,验证其在体外培养的成纤维细胞中的转导活性。以胎猪原始生殖嵴为材料提取总RNA,反转录成cDNA第一链,设计带9聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪Sox2基因,克隆到pET-28a-EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,Ni2+柱亲和层析纯化和SDS-PAGE检测表达产物后,将Sox2-R9-EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞中以观察其转导活性。成功构建Sox2-R9-EGFP融合蛋白原核表达载体,纯化后蛋白经SDS-PAGE检测证实融合蛋白片段大小正确,加到培养的猪胎儿成纤维细胞中可观察到Sox2-R9-EGFP融合蛋白能进入细胞,且部分可定位于细胞核。获得了Sox2-R9-EGFP原核蛋白表达载体,R9能介导Sox2蛋白进入细胞,为进一步利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS细胞)的研究奠定了基础。
- 殷慧群张运海刘亚曹鸿国孙雪萍章孝荣
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 牛iPS细胞无限定因子慢病毒诱导
- 为了诱导形成牛iPS细胞用于深入研究和应用,试验直接采用慢病毒作为诱导材料感染牛胎儿成纤维细胞,并对诱导形成的细胞集落进行检测分析.结果显示,慢病毒介导的EGFP在牛胎儿成纤维细胞中稳定和高效表达,在含有LIF和bFGF...
- 曹鸿国孙雪萍殷慧群张运海刘亚李运生陶勇章孝荣
- 关键词：成纤维细胞逆转录病毒
- 文献传递
- 一种猪诱导性多能干细胞诱导方法
- 本发明公开了一种猪诱导性多能干细胞诱导方法，利用外源限定因子与增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein，EGFP)报告基因构建融合蛋白慢病毒表达载体用于猪诱导性多能干细胞的...
- 张运海曹鸿国章孝荣李运生殷慧群孙雪萍薛奕杰张卫琴黄伟玲陈涛宋锐陶勇刘亚方富贵刘旭光任春环张子军殷宗俊丁建平
- 文献传递
- 提高猪囊胚后期贴壁能力的优化培养体系
- 2010年
- 为了提高猪孤雌囊胚贴壁率,试验从饲养层及培养液两方面研究猪孤雌囊胚贴壁能力;用小鼠、猪和牛的胎儿成纤维细胞制作饲养层,分别添加DMEM、NCSU-23、DMEM/NCSU-23培养液,探讨猪孤雌囊胚在3种饲养层上的发育效果。结果表明,BEF饲养层能更好地促进猪孤雌囊胚贴壁生长,其囊胚贴壁率为33.67%,与MEF饲养层组的囊胚贴壁率(19.08%)之间差异显著(P<0.05),与PEF饲养层组之间囊胚贴壁率差异不显著(P>0.05),MEF饲养层组和PEF饲养层组之间囊胚贴壁率差异不显著(P>0.05);在BEF牛胎儿成纤维细胞饲养层组,用猪胚胎培养液NCSU-23培养猪孤雌囊胚后,囊胚贴壁率(22.53%)显著高于DMEM培养液组(10.41%)和DMEM/NCSU-23培养液半量混合组(12.05%)(P<0.05),DMEM培养液组和DMEM/NCSU-23培养液半量混合组之间差异不显著(P>0.05)。牛胎儿成纤维细胞饲养层和猪胚胎培养液NCSU-23能更好地促进猪孤雌囊胚后期贴壁。
- 孙雪萍曹鸿国陈涛殷慧群薛奕杰刘亚张运海李运生陶勇宋锐章孝荣
- 关键词：囊胚饲养层培养基
- Klf4的功能研究进展被引量：7
- 2009年
- Klf4作为真核生物转录因子,参与调控细胞增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程,是体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS细胞)的重要诱导因子之一。本文综述了Klf4在细胞增殖、分化、肿瘤发生、皮肤屏障、热休克及iPS细胞诱导等方面的研究进展,为深入研究Klf4在重编程中的作用机制和功能提供参考。
- 孙雪萍曹鸿国张运海刘亚
- 关键词：KLF4基因结构IPS细胞
- 一种猪体细胞诱变方法
- 本发明公开了一种猪体细胞诱变方法，利用携带增强型绿色荧光蛋白标记的慢病毒多次感染作用胎猪成纤维细胞，在干细胞培养液的生长环境条件下胎猪成纤维细胞逐步改变原有的纤维状生长形态，形成鸟巢状细胞集落，分离培养传代的细胞集落边缘...
- 曹鸿国章孝荣刘亚张运海陶勇方富贵殷慧群孙雪萍薛奕杰张卫琴黄伟玲陈涛李运生任春环张子军丁建平刘洪瑜刘旭光王力生
- 文献传递
- 利用限定因子诱导牛iPS细胞
- iPS细胞在家畜新品种培育及细胞重编程机制的研究中具有重要意义。本研究采用慢病毒感染法以融合有绿色荧光蛋白的pSox2、hOct4、pMyc和pKlf4四种限定因子诱导牛胎儿皮肤成纤维细胞为iPS细胞，并对形成的iPS细...
- 孙雪萍
- 关键词：牛胎儿成纤维细胞IPS细胞细胞克隆
- Myc-R9-EGFP融合蛋白的表达及穿膜能力鉴定
- 2012年
- 构建、表达、纯化和鉴定Myc-R9-EGFP融合蛋白,验证其在体外培养成纤维细胞中的转导活性。从胎猪原始生殖嵴中提取总RNA,反转录cDNA第一链。设计带九聚精氨酸(R9)的特定引物,从cDNA中扩增出猪c-Myc基因,克隆到pET-28a-EGFP载体中,经酶切和测序鉴定后,重组质粒转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导表达,Ni 2+柱亲和层析纯化、SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达产物后,将Myc-R9-EGFP蛋白作用于体外培养的猪胎儿成纤维细胞以观察其转导活性。结果显示:Myc-R9-EGFP融合蛋白原核表达载体构建正确,目的蛋白在诱导后获得了高效表达,经SDS-PAGE和Western blot检测证实融合蛋白片段大小正确,并在体外培养的成纤维细胞中证实了其高转导活性。本实验为进一步研究Myc蛋白的生物学特性和利用重组蛋白建立诱导性多潜能干细胞(iPS细胞)的研究奠定了基础。
- 殷慧群张运海王恒孙雪萍刘亚曹鸿国章孝荣
- 关键词：核表达融合蛋白
- 限定因子诱导胎猪成纤维细胞重编程为多能性细胞被引量：3
- 2010年
- 尝试运用限定因子融合蛋白建立猪的诱导多能性干细胞.试验采用Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc四种限定因子经慢病毒表达载体系统介导感染猪胎儿成纤维细胞,对表达外源限定因子的猪胎儿成纤维细胞进行培养传代,逐步分离培养出集落边缘界限清晰的细胞克隆,细胞集落生长状态稳定、核型正常、碱性磷酸酶检测为阳性,免疫细胞化学检测显示,Oct4、Nanog、SSEA-1蛋白表达为阳性,体内能够分化形成含有三个胚层的畸胎瘤.结果证实分离培养的细胞克隆为猪诱导多能性干细胞,为进一步完善诱导方案和深入研究应用猪诱导多能性干细胞奠定了基础.
- 殷慧群曹鸿国孙雪萍薛奕杰张卫琴黄伟玲陶勇刘亚李运生张运海章孝荣
- 慢病毒直接诱导形成猪iPS细胞无需限定因子
- 2013年
- 为了证实慢病毒对细胞具有遗传修饰和重编程作用,在本实验中使用慢病毒感染猪胎儿成纤维细胞.结果显示:慢病毒介导的EGFP在猪胎儿成纤维细胞中稳定和高效表达,使用添加LIF和bFGF的细胞培养液,部分猪的胎儿成纤维细胞逐渐改变原有的纤维状形态,形成圆形的细胞,细胞逐步增殖形成细胞集落,细胞集落边界清晰,在饲养层上细胞集落生长迅速,具有稳定的生长性能和正常核型,细胞碱性磷酸酶染色为阳性,表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog和SSEA1,在体外能够形成拟胚体,在体内分化形成包含三个生殖层的畸胎瘤.作为核移植的供体细胞,克隆胚的卵裂率为53.33%、桑椹胚率为9.03%、囊胚率为2.07%、孵化囊胚的总细胞数为26.5,在桑椹胚率和囊胚率方面显著低于猪普通胎儿成纤维细胞核移植克隆胚的发育能力(P<0.05).结果证实慢病毒能够直接使猪的胎儿成纤维细胞转变成iPS细胞,因此慢病毒将成为一种理想的材料和工具用于细胞的遗传修饰和细胞重构等方面的研究.
- 曹鸿国陈涛殷慧群孙雪萍蒲勇杨盼张运海刘亚李运生陶勇章孝荣
- 关键词：慢病毒胎儿成纤维细胞
