张旭
- 作品数：32 被引量：118H指数：7
- 供职机构：北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程自动化与计算机技术更多>>
- 蛋白质糖基化工程——白细胞介素-2(IL-2)与红细胞生成素(EPO)的基因克隆及其在酵母中的表达,红细胞生成素的基因克隆及其在大肠杆菌,哺乳动物细胞中的表达及糖基化研究
- 蛋白质糖基化工程——IL-2在酵母细胞中的表达及糖基化研究，EPO基因在大肠杆菌、酵母细胞及哺乳动物细胞表达体系表达及糖基化研究 大多数有临床应用价值的蛋白为糖蛋白，糖链对生物功能及活性起着重要作用。用基因工程手...
- 张旭
- 蛋白质糖基化工程被引量：21
- 1995年
- 蛋白质糖基化工程张旭综述黄秉仁审校（中国医学科学院基础医学研究所生化室）引言生物体内大多数蛋白质为糖蛋白。［１４］特别是随着基因工程产品的开发，蛋白上糖链的结构与功能愈来愈受到关注，以每年测定六百个新寡糖链顺序的速度增长。从美国国家生物技术信息中心（...
- 张旭
- 关键词：蛋白糖基化蛋白质工程
- 携带A53T突变人α突触核蛋白转基因帕金森病大鼠模型的建立被引量：3
- 2013年
- 目的大鼠在神经系统疾病模型方面比小鼠有更好的表现，建立人α-synA53T突变型转基因大鼠模型，为研究帕金森病发病提供更优良的疾病模型。方法构建人α—synA53T表达载体，显微注射法制备转基因大鼠。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因大鼠脑组织中人α-syn蛋白的表达。免疫组化和免疫荧光观察中脑黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数目变化，观察人α-syn蛋白在转基因大鼠黑质神经元中的表达和分布。Rotatingrod实验和步态分析系统评价转基因大鼠的行为学改变。结果获得1个α-synA53T高表达且可以稳定传代的转基因大鼠品系。转基因大鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元数目减少69％（P〈0．05），残存神经元胞浆中有大量的α—syn蛋白聚集。转基因大鼠在滚轴上保持平衡的时间显著减少40％～60％（P〈0．05），并表现出步态障碍如步宽加大、摆动期缩短和足迹最大接触面积减小等。结论建立了人α-synA53T突变型转基因的帕金森病大鼠模型。
- 张丽陈炜张旭孙秀萍杨亚军张连峰
- 关键词：转基因Α-突触核蛋白帕金森病突变
- Sleeping Beauty转座酶转基因小鼠模型的建立被引量：3
- 2013年
- 目的建立表达Sleeping Beauty(SB)转座酶转基因小鼠模型,为研究SB转座子在小鼠中的应用提供工具动物。方法利用人的泛素C启动子驱动SB转座酶基因的表达,利用显微注射方法建立C57BL/6J表达SB转座酶的转基因小鼠。PCR鉴定首建鼠的基因型,Western Blot(WB)和免疫组织化学(IHC)检测SB转座酶基因在小鼠生殖腺睾丸中的表达情况,筛选睾丸中高表达SB转座酶的转基因小鼠。结果通过显微注射方式产生了4只首建小鼠,其中3只能稳定传代,利用WB和IHC成功的筛选出一株在睾丸中高表达SB转座酶的转基因小鼠。结论成功建立了睾丸组织中高表达SB转座酶转基因小鼠动物模型,为将SB转座子应用于建立基因修饰小鼠模型提供非常重要的工具动物。
- 路迎冬张旭马婧张连峰高虹马元武
- 关键词：SLEEPINGBEAUTY转座酶
- 人载脂蛋白C3基因转基因小鼠的建立及血脂变化分析被引量：1
- 2012年
- 目的制备系统性表达人载脂蛋白C3(APOC3)基因的转基因小鼠,建立高血脂小鼠模型。方法将人APOC3基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOC3转基因C57BL/6J小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测基因表达水平,血生化分析检测不同月龄转基因小鼠与同龄野生型小鼠的血脂指标,脂肪染色观察肝脏脂肪水平。结果建立了高表达人APOC3基因的转基因小鼠品系;转入的人APOC3基因在血液、肝脏、小肠、肌肉、心脏、肾脏、脾脏中均有明显表达;不同月龄转基因小鼠的血浆甘油三酯水平明显高于同龄野生型小鼠;转基因小鼠的肝脏脂肪含量高于野生型小鼠。结论系统性表达人APOC3基因的转基因小鼠表现高脂血症表型,可以作为高血脂以及高血脂相关的心血管病的工具动物。
- 全雄志高翔张旭葛文萍关菲菲董伟张连峰
- 关键词：转基因小鼠甘油三酯高脂血症
- 蛋白质糖基化工程
- 蛋白质糖基化工程——IL-2在酵母细胞中的表达及糖基化研究，EPO基因在大肠杆菌、酵母细胞及哺乳动物细胞表达体系表达及糖基化研究 大多数有临床应用价值的蛋白为糖蛋白，糖链对生物功能及活性起着重要作用。用基因工程手段...
- 张旭
- 关键词：博士学位论文哺乳动物细胞酵母细胞协和大肠杆菌表达甘露糖
- 文献传递
- Treacher collins综合征致病基因筛查及BOR与eya4基因在内耳发育中的功能研究
- 第一部分Treacher Collins综合征致病基因筛查
目的:分析已收集的两个Treacher Collins综合征(TCS)家系的临床表型特征，选取TCOF1基因进行突变检测分析。
方法:收集患者及其家...
- 张旭
- 关键词：毛细胞
- 文献传递
- SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠自发肺部肿瘤模型的建立被引量：1
- 2013年
- 目的构建一种利用Cre重组酶体内低表达诱导K-ras G12D在小鼠肺部活化的慢性自发性肺部肿瘤模型。方法首先构建一种肺脏特异性低表达Cre重组酶的SPC-CRE转基因小鼠,利用SPC-CRE转基因小鼠与LSL K-ras G12D转基因小鼠杂交,获得SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠。对4月龄,5月龄,7月龄,9月龄SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠肺部进行取材,固定并进行常规石蜡切片及HE染色,镜下观察小鼠肺部病理特征。使用micro-CT对7月龄,9月龄SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠肺部肿瘤结节进行检测。结果获得了SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠,该小鼠在肺组织特异性低表达Cre重组酶,并诱导K-ras G12D在肺组织的表达,由K-ras G12D引起肺组织肿瘤的发生。SPC-CRE-Kras双阳性转基因小鼠4月龄肺部出现轻度炎症反应,5月龄开始肺部可见散在腺瘤样的结节,成瘤率为100%(雌6/6,雄6/6),随着月龄增加,小鼠肺腺瘤结节呈增大趋势,病理变化呈进展状态,9月龄时通过micro-CT可以检测到肺部少量散在孤立的肿瘤结节。结论利用肺组织特异性低表达Cre重组酶的方式,建立了一种从肺部炎症反应到肺腺瘤进展时程较长的慢性自发肺部肿瘤小鼠模型,为肺癌发生的研究提供了更长的窗口期。
- 高昆刘学丽高珊高凯董伟张旭刘宁徐艳峰张连峰
- 关键词：CRE转基因小鼠K-RAS基因
- 瘦素基因敲除肥胖大鼠的血糖及病理长期观察被引量：2
- 2014年
- 目的：对Leptin基因敲除SD大鼠血糖变化及病理表型进行长期分析，为使用该大鼠作为糖尿病和脂代谢模型积累数据。方法 western blot检测Leptin＋/＋大鼠和Leptin-/-大鼠肝脏中Leptin的表达。利用称量方法测定Leptin基因敲除的SD大鼠（Leptin-/-）1，3，6，8月龄的体重变化，利用稳豪血糖仪采尾血测定1，3，6，8月龄Leptin-/-大鼠空腹血糖值。 HE染色和免疫组织化学观察Leptin-/-大鼠胰腺及肝脏的病理学变化。结果 Leptin-/-大鼠肝脏中表达变短的功能异常的Leptin蛋白。 Leptin-/-大鼠从1月龄开始出现显著的体重增加，8月龄时雌性体重为884 g，雄性体重可以达到1200 g，是野生SD大鼠的2倍。自1月龄起， Leptin-/-雌鼠的空腹血糖值显著高于野生大鼠，在1月龄到6月龄之间差别明显（40％～26％），到8月龄和野生大鼠恢复到近正常水平。8月龄Leptin-/-大鼠肝脏肝小叶中出现大量脂肪空泡，胰腺内较多脂肪细胞浸润、胰岛数量明显增多，体积增大，胰岛素阳性β细胞增多。结论 Leptin-/-大鼠表型表现为肥胖，脂肪肝，胰岛增生和早期高血糖。
- 张丽关菲菲张旭陈炜孙彩显张连峰
- 关键词：瘦素基因敲除空腹血糖肥胖
- 利用CRISPR/Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1(Irs1)基因被引量：18
- 2014年
- 目的为研究胰岛素受体底物1(Irs1)基因与代谢病之间的关系,我们利用CRISPR/Cas9系统敲除大鼠Irs1基因,为研究代谢病提供基因敲除大鼠。方法针对Irs1第一外显子,设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建sgRNA表达质粒。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9。将Cas9 mRNA和sgRNA混合物注射入SD大鼠的受精卵中,实现靶基因敲除。用T7EN1实验初步检测靶基因的修饰情况,再经过测序分析确定突变。结果获得了5个在Irs1基因突变的首建鼠,突变效率为83%。结论得到了稳定遗传的Irs1基因敲除大鼠。
- 马元武马婧路迎冬陈炜张旭于磊张连峰
- 关键词：基因敲除CRISPR
