张秀华
- 作品数：7 被引量：5H指数：1
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- 家畜胚胎干细胞多能性候选信号通路及分子标志
- 2010年
- 家畜胚胎干细胞具有重要的生物学意义和广阔的应用前景。以下对比了小鼠、人胚胎干细胞多能性调控信号通路的异同,阐述了小鼠、人胚胎干细胞与家畜胚胎干细胞在多能性分子标志上的差异,并结合本实验室开展绵羊胚胎干细胞研究的实际经验,对目前家畜胚胎干细胞建系中可能存在的多能性候选信号通路及分子标志进行了探讨。
- 赵云程陈博周川张秀华黄俊成
- 关键词：家畜胚胎干细胞多能性信号通路候选基因
- 添加不同因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响
- 2012年
- 为筛选出更有利于维持绵羊类胚胎干细胞(oESC-like cell)多能性的因子,在基础培养基N2B27/CH中,分别添加PD、PD+hLIF、PD+BPM4、PD+hLIF+BMP4,通过比较分析,初步筛选出了比本实验室原培养体系(N2B27/CH+bFGF)更利于维持oESC-like多能性的培养基添加因子。结果显示:基础培养基中添加PD、PD+hLIF后细胞生长较好,细胞之间的结合更加致密;各种培养基培养物都表达AKP与Sox2、Oct4免疫荧光蛋白等oESC-like多能性标志;4种不同培养基与bFGF相比,细胞的生长速度减慢;在基础培养基N2B27/CH中添加PD和PD+hLIF使多能性候选基因Lin28与c-Myc表达量极显著升高(P<0.01),Nestin的表达量极显著下调(P<0.01),加入PD+hLIF使Oct4表达量极显著上调(P<0.01)。因此,在oESC-like基础培养液N2B27/CH的基础上,添加PD或PD+hLIF更有利于oESC-like细胞多能性维持。
- 张秀华石庆华赵云程林嘉鹏汪立芹周川金贤华黄俊成
- 关键词：体外培养候选基因
- 添加不同的因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响
- 胚胎干细胞是由内细胞团分离培养得到的,在适当的条件下能分化成所有类型的细胞。为筛选出能够维持绵羊类胚胎干细胞多能性的因子,以实验室建系的oESC-like为材料,培养细胞8d,从形态、增殖、AKP以及多能性候选基因Oct...
- 张秀华
- 关键词：绵羊胚胎干细胞
- 文献传递
- bFGF浓度对oESC-like增值、凋亡、多能性相关基因表达的影响
- 2012年
- 使用免疫荧光技术检测与增值、凋亡、多能性相关基因的表达水平。提高bFGF浓度可增强PCNA、Oct-4、Sox-2、Bax和Bcl-2的表达,同时使Bcl-2/Bax比值维持较稳定水平。结果表明提高bFGF浓度可增强oESC-like的增值能力和多能性,增强其抗凋亡能力以适应长期培养。
- 周川赵云程汪立芹林嘉鹏金贤华张秀华黄俊成
- 关键词：胚胎干细胞多能性碱性成纤维细胞生长因子
- 绵羊类胚胎干细胞长期培养中增殖、凋亡、多能性相关基因的表达动力学被引量：3
- 2012年
- 已报道的家畜类胚胎干细胞(embryonic stem-like cell,ESC-like)均无法实现长期培养,这制约了家畜ESC的研究.通过检测本实验室建系的绵羊类胚胎干细胞oESC-like,探究导致oESC-like无法持续培养的原因,为以后的研究打下基础.实验观察了oESC-like形态变化,检测了AKP的表达,使用免疫荧光技术检测了PCNA、Bcl-2、Bax、Sox-2、Oct-4蛋白的表达,并用软件Image-Pro Plus6.0计算蛋白表达水平.结果显示,oESC-like在长期培养过程中其形态具备ESC的典型形态特征;AKP持续表达;Sox-2和Oct-4的表达有不同程度的提高,增殖能力无明显变化;Bax表达水平逐代提高,Bcl-2的表达水平在5、10代显著高于Bax的表达水平可抑制Bax的活化,而从15代开始Bcl-2表达水平下降,低于Bax的表达水平,不能有效地抑制Bax的活化;Bcl-2/Bax表达水平的比值逐代下降,说明oESC-like在长期培养过程中逐渐走向凋亡.为解决绵羊类胚胎干细胞能够体外长期培养的科学问题,针对本实验室已有研究成果和存在的问题,进行逆向思维找出突破口,为遗传育种、基因工程、医疗等方面在实践上提供理论基础.
- 周川赵云程林嘉鹏汪立芹张秀华金贤华黄俊成
- 关键词：胚胎干细胞绵羊凋亡多能性
- 诱导幼龄绵羊卵泡发育的研究被引量：1
- 2012年
- 为了稳定并提高幼龄绵羊卵泡的发育效率。本研究从激素处理方案、激素生产厂家、羔羊日龄、重复处理周期等4个方面进行了研究。结果表明:国产FSH剂量在60、120、180IU之间差异显著(P<0.05);国产FSH和加拿大生产的FSH对幼羔卵泡发育没有影响;5～9周龄羔羊的卵泡数和卵母细胞数显著高于4周龄和11周龄的羔羊(P<0.05);4～7周龄羔羊首次处理后间隔15～30天再次处理的卵泡数和卵母细胞数都没有差异(P>0.05),2次重复处理总卵泡数和卵母细胞数间也没有差异(P>0.05)。
- 汪立芹林嘉鹏周川张秀华金贤华刘莉黄俊成
- 关键词：羔羊卵泡卵母细胞
- bFGF培养体系中添加不同因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响被引量：1
- 2012年
- 为筛选出能够维持绵羊类胚胎干细胞(oESC-like)多能性的因子,以oESC-like为材料,在N2B27/CH/bFGF培养体系中,分别加入PD、PD/hLIF、PD/BPM4、PD/hLIF/BMP4,培养细胞8 d,分析绵羊类胚胎干细胞多能性,确定最适培养体系。结果显示:在N2B27/CH/bFGF培养体系添加PD或PD/hLIF后,oESC-like细胞生长较好;所有培养液中oESC-like细胞的AKP染色及多能性候选基因Sox2和Oct4免疫荧光蛋白染色结果均呈阳性;添加PD后,多能性候选基因Oct4与Klf4 mRNA的表达量显著高于N2B27/CH/bFGF培养体系中的(P<0.01),Nestin与Lin28的表达量显著降低(P<0.01),Sox2与c-Myc升高但差异不显著。添加PD/hLIF后,Oct4的表达量显著高于N2B27/CH/bFGF培养体系中的(P<0.01),c-Myc、Klf4、Lin28表达量升高但不显著,Nestin和Sox2表达量降低但也不显著。以上结果表明:在oESC-like培养体系中,添加PD或PD/hLIF可能有利于维持绵羊类胚胎干细胞的多能性。
- 张秀华赵云程林嘉鹏汪立芹周川石庆华黄俊成
- 关键词：体外培养候选基因
