彭正华
- 作品数：12 被引量：28H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 雌性恒河猴月经周期异常与肠道微生物的相关性研究
- 2024年
- 目的以健康雌性育龄期恒河猴为研究对象,采用16S rRNA宏基因组方法探讨雌性恒河猴月经周期异常与肠道微生物组成的相关性。方法将27只健康雌性恒河猴分为月经规律和不规律两组,分别采集两组实验猴卵泡期(follicular phase,FP)、排卵期(ovulatoryperiod,OP)和黄体期(lutealphase,LP)粪便样品,对16SrRNA基因的V3~V4高变区测序,分析比较两组实验猴月经周期肠道菌群结构及多样性。结果在门水平,规律组和不规律组猕猴在卵泡期、黄体期和排卵期3个不同时期均以厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为主要菌群,占比总和超过98%;在属水平以普雷沃菌属_9(Prevotella_9)、瘤胃球菌(Ruminococcaceae_UCG-002)、乳杆菌属(Lactobacillus)、普雷沃菌属_2(Prevotella_2)、考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)、瘤胃球菌_UCG-005(Ruminococcaceae_UCG-005)、链球菌属(Streptococcus)、布劳特菌属(Blautia)、普雷沃菌属_NK3B31(Prevotellaceae_NK3B31_group)、理研菌属(Rikenellaceae_RC9_gut_group)为主;在黄体期规律组厚壁菌门(Firmicutes)占比高于不规律组,而拟杆菌门(Bacteroidetes)刚好相反。规律组3个阶段,螺旋体门(Spirochaetes)均高于不规律组(P<0.05)。结论月经周期规律与月经周期不规律的两组猕猴肠道微生物组成存在一定差异,为研究肠道细菌与排卵障碍提供一定的参考依据。
- 谢明学赵宸颜宇宸彭正华李娇春谭银珍王学付张朝武杨武赵远
- 关键词：恒河猴月经周期肠道微生物宏基因组
- 幽门螺杆菌napA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析被引量：14
- 2008年
- 实验目的是在乳酸菌中表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)中性粒细胞激活蛋白(NAP),口服免疫小鼠后检测其免疫原性。在实验中利用了分子克隆技术构建携带nap基因的重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,将重组质粒转化乳酸菌NZ9000株,筛选鉴定阳性菌落,诱导表达的NAP蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。将雌性ICR(CV级)小鼠随机分为4组,分别用PBS、携带空质粒的乳酸菌、携带pNICE:sec-nap的乳酸菌、灭活的H.pylori灌胃。免疫7次后检测其特异性IgG和IgA的产生。成功扩增了nap基因并构建了重组原核表达质粒pNICE:sec-nap,转化乳酸菌NZ9000后经nisin诱导可表达Mr约17kDa的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的9.5%,表达的蛋白能与兔抗H.pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性。携带pNICE:sec-nap质粒的乳酸菌刺激产生的IgG水平明显高于携带空质粒组,与灭活H.pylori组没有明显的差异,但其刺激产生的IgA水平明显高于其他组。结果说明表达NAP蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能够刺激小鼠产生特异的IgG和IgA,对幽门螺杆菌疫苗的研究开发具有理论的意义。为乳酸菌作为抗原递送载体的研究和H.pylori口服疫苗的开发提供一定的实验基础。
- 李建芳彭正华肖红剑罗娜杨增福李健峰徐维明
- 关键词：幽门螺杆菌乳酸乳球菌中性粒细胞激活蛋白
- 重组B群脑膜炎球菌fHBP融合蛋白的表达和免疫原性研究被引量：3
- 2011年
- 采用PCR构建编码B群脑膜炎球菌fHBP蛋白V1变异型全长序列和V2变异型C结构域抗原表位融合蛋白的基因片段。并克隆入pET30a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),在其实现表达,表达量约占菌体蛋白总量的30%。表达产物经离子交换层析纯化后,获得了纯度达到90%以上的融合蛋白。将融合蛋白免疫小鼠,对其免疫原性进行了初步分析。结果显示,经2次腹腔免疫,血清IgG滴度达到15 849,同时杀菌力实验显示此融合蛋白能诱导针对B群脑膜炎球菌的补体依赖的杀菌反应。表明此融合蛋白具有较好的免疫原性,为B群脑膜炎球菌蛋白疫苗的研究提供了一定的理论基础。
- 彭世泽肖红剑彭正华毕妍伟孙振璐戴宗祥高丹丹徐维明李智华李健峰
- 关键词：脑膜炎奈瑟氏菌原核表达融合蛋白
- 肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)原液质量分析
- 目的：按照疫苗生产工艺的最简化原则，我们从多个方面进行了肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)详细的技术工艺的探索研究。方法：利用纯化疫苗SDS-PAGE胶各条带质谱分析，系统分析不同的纯化工艺于对肠道病毒71型灭活疫苗...
- 董承红蔡路奎纳锐雄赵红玲杨丽仙杨槐彭正华杨增福夏龙辉于丽
- 关键词：疫苗肠道病毒71
- B群脑膜炎球菌lpxL2基因敲除突变株的构建及初步鉴定
- 2011年
- 应用基因敲除技术的方法和原理,通过PCR扩增B群脑膜炎球菌lpxL2基因及载体pGBK T7上的Kan抗性片段,lpxL2片段与puc-18载体连接得到重组质粒msb-puc,以重组质粒msb-puc为基础,分别通过反向PCR和酶切2种方法构建lpxL2基因中间片段的缺失,并在缺失位点连入Kan抗性表达盒,从而得到重组质粒mpK,mpK转化B群脑膜炎球菌,并用PCR的方法对转化子进行初步筛选鉴定,初步确定突变株1株.本研究通过基因敲除MenB中LPS合成途径相关基因lpxL2的方法,降低LPS毒性,为B群脑膜炎球菌OMV疫苗的研发做了铺垫.
- 李晓晶姬秋彦肖红剑彭正华罗娜杨增福杨槐李健峰李智华徐维明
- 关键词：脑膜炎奈瑟氏菌基因敲除脂多糖
- 人白细胞介素11的定点聚乙二醇修饰被引量：6
- 2009年
- 利用hIL-11无Cys残基这一特点,通过定点突变将一个Cys残基引入hIL-11的N末端。然后,利用与Cys巯基特异性反应的mPEG-马来酰亚胺将mPEG偶联到预先选定的位点,经层析纯化得到hIL-11的定点PEG修饰物。利用依赖型细胞株7TD1测定其生物学活性,结果表明,其体外生物学活性保持原有hIL-11活性的30%左右。定点聚乙二醇修饰方法为定向改造hIL-11,提高其药效的应用研究打下基础。
- 李智华胡满仓阎玲梅赵玉娇杨旭彭正华徐维明李健峰
- 关键词：聚乙二醇化学修饰
- 治疗型VP22Δ-mE6Δ/mE7重组蛋白疫苗的表达与免疫学初步分析
- 2009年
- 制备16型人乳头瘤病毒mE6Δ/mE7蛋白与I型人单纯疱疹病毒VP22Δ蛋白的治疗型分子内佐剂融合蛋白疫苗,并检测其免疫原性和抗肿瘤相关生物活性。通过克隆HSV-1 VP22Δ及HPV-16 mE6Δ/mE7基因,构建pET28a-VP22Δ-mE6Δ/mE7原核表达载体。重组质粒在Rosetta(DE3)宿主菌中进行诱导表达,表达蛋白经分离、复性后,通过镍离子亲和层析进行纯化,纯化蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定,并免疫BalB/C及C57BL/6小鼠,检测其免疫原性和抗肿瘤活性。结果显示,VP22Δ-mE6Δ/mE7蛋白以包涵体形式表达,分子量约为34kDa,表达量约占菌体总蛋白的45%。该蛋白免疫小鼠后血清特异性IgG、特异性淋巴细胞增殖效果及对TC-1致瘤小鼠的肿瘤治疗效果均高于无佐剂单一重组蛋白疫苗。以上结果说明,所获得的重组融合蛋白具有较好的免疫原性和抗肿瘤活性,为治疗型HPV分子内佐剂疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 高丹丹彭正华杨旭毕研伟李智华姬秋彦李建芳李健峰徐维明
- 关键词：HPV-16重组蛋白疫苗
- 单纯疱疹病毒I型糖蛋白D在酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 从提取的HSV-1基因组中扩增得到编码gD蛋白胞外区1～314aa的基因gDt,将其插入毕赤酵母表达质粒pPIC9K的醇氧化酶(AOX1)启动子下游,构建携带gDt的重组载体,经电转化GS115菌株和G418筛选,得到了高效分泌表达gD蛋白的毕赤酵母菌株,表达量达到250mg/L,该目的蛋白可被gD单抗(1-I-9)特异性识别。表达产物经离子交换、金属螯合、分子筛柱层析纯化后得到纯度较高的重组蛋白。重组gD蛋白免疫BALB/c小鼠可诱生一定水平的特异性抗体,表明该蛋白具有较好的免疫原性,能够诱导小鼠产生体液免疫应答。
- 李智华徐维明姬秋彦龙海亭彭正华李健峰
- 关键词：单纯疱疹病毒毕赤酵母表达纯化
- 基因工程重组蛋白技术体系的创新与应用
- 李智华姬秋彦孙强明闫玲梅李健峰肖红剑彭正华
- 该项目研究内容主要包括四个基因工程中试水平技术体系建设：（1）建立了大肠杆菌、酵母和乳酸菌等表达体系。用基因工程技术构建重组细胞因子及疫苗抗原，通过融筛选具有中国自主知识产权的高表达工程菌毒种，建立有代表性的基因工程重组...
- 关键词：
- 关键词：基因工程生产工艺
- 幽门螺杆菌napA基因的克隆表达及免疫原性研究
- 2007年
- 采用PCR方法扩增幽门螺杆菌napA基因片段并克隆至原核表达载体pET28a获得重组质粒pET28a-nap.将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌后经IPTG诱导表达融合蛋白NAP,相对分子质量约为18ku,表达量约占菌体蛋白总量的40%.融合蛋白经纯化后获得纯度为95%以上的重组蛋白,Western blot分析其能与幽门螺杆菌抗血清特异性反应.与佐剂CpG ODN联合口服免疫小鼠后,可有效诱导免疫应答,产生高水平的IgG,与未加佐剂组相比具有显著性差异(t=7.095,P<0.01).以上结果说明融合蛋白NAP联合佐剂CpG ODN经口服免疫可有效诱导免疫应答.NAP可作为幽门螺杆菌口服疫苗候选抗原.
- 张莹丹杨旭彭正华何春艳陈阳徐维明李健峰
- 关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白
