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徐荣左

作品数：1 被引量：0H指数：0
供职机构：复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇肾小球
  • 1篇肾小球疾病
  • 1篇肾小球系膜
  • 1篇肾小球系膜细...
  • 1篇趋化
  • 1篇趋化因子
  • 1篇转染
  • 1篇系膜
  • 1篇系膜细胞
  • 1篇细胞
  • 1篇细胞趋化
  • 1篇细胞趋化因子
  • 1篇淋巴
  • 1篇淋巴细胞
  • 1篇淋巴细胞趋化...
  • 1篇基因
  • 1篇基因转染
  • 1篇大鼠系膜细胞

机构

  • 1篇复旦大学上海...

作者

  • 1篇朱春芳
  • 1篇欧周罗
  • 1篇徐荣左

传媒

  • 1篇复旦学报（医...

年份

  • 1篇2003
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
稳定表达淋巴细胞趋化因子的大鼠系膜细胞载体的构建
2003年
目的 探讨以肾小球系膜细胞作为高表达大鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)的载体的可行性,从而为深入研究淋巴细胞趋化因子的作用和体内活性创造条件。方法 采用RT-PCR法获得大鼠的Ltn的编码区全长的cDNA序列;应用基因重组技术和限制性内切酶酶切法构建并鉴定pcDNA 3.1/Ltn真核表达载体;用Lipofec-tAMINE PLUS脂质体转染法将构建的质粒及空质粒瞬时转染于SKOV3细胞;用RT-PCR和ELISA法检测LtnmRNA及蛋白质水平的表达,进而用pcDNA 3.1/Lac Z和pcDNA 3.1/Ltn稳定转染原代培养的WKY大鼠肾小球系膜细胞,用潮霉素B筛选获得稳定表达报告基因Lac Z和大鼠Ltn的细胞克隆。结果 测序结果显示质粒载体中正确地插入了大鼠Ltn的编码基因;RT-PCR显示在瞬时转染的SKOV3细胞和稳定转染的4个系膜细胞克隆中Ltn mRNA表达增高;ELISA证实细胞培养上清中Ltn的蛋白质浓度较对照组明显升高。此外,X-gal染色显示获得了2个稳定表达β-半乳糖苷酶基因的系膜细胞克隆。结论 本研究成功地构建了真核表达质粒载体pcDNA 3.1/hygro/Ltn,获得了稳定表达大鼠Ltn的肾小球系膜细胞克隆,并在mRNA及蛋白质水平上证实了Ltn的表达,为进一步研究Ltn的体内活性奠定了基础。
朱春芳徐荣左欧周罗
关键词：淋巴细胞趋化因子肾小球系膜细胞基因转染肾小球疾病
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