李向农 作品数:100 被引量:299 H指数:8 供职机构: 徐州医学院附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省卫生厅医学科技发展基金 江苏省医学重点学科基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
Survivin多表位真核表达载体的构建及其在树突状细胞中的表达 被引量:3 2011年 目的:构建人生存素(survivin)的多表位真核表达载体,并在人树突状细胞(DC)中进行表达。方法:人工合成含4个survivin的HLA-A2类限制性CD8+CTL表位和一个CD4+Th表位的重组cDNA片段,克隆到pBluescript II SK(+)载体上,测序正确后将目的基因连接到真核表达载体pIRESneo3.0中,构建的重组真核表达质粒pPIRESneo3.0-survivin(4)/Th。将其转染人DC并筛选,进行稳定表达。结果:构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并成功地转染了人DC。结论:成功地构建了含有survivin的多表位真核表达载体,并在人DC中稳定表达,为进一步研究多表位肿瘤疫苗奠定基础。 王效远 宋文哲 李向农 郭萌 梁骁 李莹关键词:SURVIVIN 多表位 树突状细胞 肿瘤疫苗 大鼠30%小体积肝移植模型两种切肝方法的比较 2011年 目的探讨建立理想的成功率较高的大鼠30%小体积肝移植模型的可靠方法。方法采用改良"二袖套法"非动脉化法建立大鼠30%小体积肝移植模型。实验组分为两组:A组,右叶+三角叶+尾状叶做供肝的30%小体积肝移植组,共40例;B组,中叶做供肝的30%小体积肝移植组,共40例。观察两组术后并发症和术后3 d生存率。结果 A、B组切肝时间分别为(11±3)、(14±3)min,P<0.01;术后发生肝后下腔静脉狭窄分别有2例、8例,P<0.05;术后3 d生存率分别为53%(21/40)、40%(16/40),P>0.05;断面出血、胆漏和感染的发生率两组无明显差异。结论通过技术改良,可以以右叶+三角叶+尾状叶为供肝建立稳定的大鼠30%小体积肝移植模型。 宋军 丁志龙 徐为 李文美 李向农 王学浩关键词:肝移植 小体积 hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞的体外免疫抑制作用 被引量:1 2009年 目的研究hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stam cell,MSC)对异种混合T淋巴细胞增殖的影响。方法反转录PCR克隆hIL-10基因并构建慢病毒hIL-10/pLOX-CWgfp,然后将hIL-10/pLOX-CWgfp转入豚鼠MSC内;ELISA法测定hIL-10基因修饰的MSC(hIL-10-MSC)培养上清液内hIL-10含量;CCK-8法检测hIL-10-MSC和其培养上清液对体外混合淋巴细胞培养的影响。结果hIL-10-MSC培养上清液的hIL-10水平明显高于未转染hIL-10者(P<0.05);hIL-10-MSC能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05);加入IL-2能逆转MSC的抑制作用(P<0.05);hIL-10-MSC培养上清液能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05)。结论hIL-10-MSC和其培养上清液对混合异种淋巴细胞培养有显著的抑制作用。 牛坚 刘斌 张业伟 李向农关键词:白细胞介素10 T淋巴细胞 免疫耐受 PI3K-Akt信号通路与大鼠肝脏缺血预处理保护作用关系的研究 被引量:4 2008年 目的研究PI3K-Akt信号转导系统在大鼠肝缺血再灌注(IR)及缺血预处理(IPC)后的激活规律,探讨其与IPC保护作用的关系。方法将68只SD雄性大鼠随机分成空白对照组(Sham)、缺血再灌注组(IR)、缺血预处理组(IPC)、阻断剂组(LY)、溶剂对照组(DMSO)5组,于复灌0、1/2、1、2、4h各不同时间点取材,应用免疫组化和免疫印迹法测定肝组织中Akt1、p-Akt1等信号蛋白的表达;HE染色观察肝组织显微结构;同时测定血清肝功酶水平。结果IR组大鼠在各复灌时间点上都显示明显肝细胞损伤,并随复灌时间延长加重;肝细胞质内有p-Akt1(Thr-308)表达。IPC组大鼠血清肝功酶指标在复灌0、2、4h较IR组明显降低(P<0.01),p-Akt1(Thr-308)表达更强、时程延长;同时,IPC使Akt1下游底物Bad(Ser-136)磷酸化水平增强、caspase-3的活化减少。应用PI3K特异性阻断剂LY294002阻断PI3K-Akt信号系统活化的同时,也抑制了IPC的保护作用。结论IPC通过对PI3K-Akt信号转导通路的调控发挥了对肝脏的保护作用;该信号通路的激活水平上调,可能是肝IPC保护作用的机制之一。 徐磊 刘畅 李向农关键词:缺血再灌注损伤 缺血预处理 肝脏 依达拉奉减轻大鼠小体积肝移植物缺血再灌注损伤 2010年 目的探讨依达拉奉减轻大鼠小体积肝移植物缺血再灌注损伤的作用及其可能机制。方法采用成年雄性SD大鼠作为肝移植的供、受者,随机将受者分为依达拉奉组和对照组,每组8只。依达拉奉组受者移植前30min经阴茎背静脉注射依达拉奉3mg/kg,对照组受者仅给予等量生理盐水。采用改良的二袖套法建立大鼠40%(供肝重量与受者全肝重量比)小体积供肝肝移植模型。术后6h时,处死两组受者,使用全自动生化分析仪检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测移植肝组织中肿瘤坏死因子a(TNF-α)含量,使用相应的检测试剂盒检测移植肝组织中MDA含量以及SOD和MPO的活性。同时,取移植肝组织进行病理学检测,观察肝组织病理损伤情况。结果术后6h,依达拉奉组受者血清AST和ALT水平分别为(825.50±72.87)U/L和(687.40±72.21)U/L,对照组分别为(1188.03±124.04)U/L和(988.66±91.07)U/L,依达拉奉组明显低于对照组,两组间比较,差异均有统计学意义(P〈0.01)。与对照组比较,依达拉奉组受者移植肝组织中MDA和TNF-α含量明显下降,MPO活性也明显下降,而SOD活性则明显增加,两组间比较,差异均有统计学意义(P〈0.01)。移植肝组织病理学检查发现,对照组肝细胞发生明显的空泡样变性伴局部坏死灶,肝小叶结构破坏,门脉周围水肿、充血,炎症细胞浸润明显;依达拉奉组肝损伤明显减轻,小叶结构保存完整,肝细胞变性、坏死轻微,炎症细胞浸润明显减少。结论依达拉奉能够明显减轻大鼠小体积肝移植物缺血再灌注损伤,其机制可能与增强抗氧化能力、抑制脂质过氧化以及减轻炎症反应密切相关。 宋军 徐为 符炜 华志元 姚爱华 俞悦 李向农 王学浩关键词:肝移植 依达拉奉 移植物 再灌注损伤 体重监测下使用硫代乙酰胺诱导大鼠肝硬化模型 被引量:11 2004年 目的探索根据体重变化监测肝硬化诱导过程中大鼠对硫代乙酰胺 (thioacetamide,TAA)反应的个体差异 ,以提高肝硬化形成率和质量。方法雄性Wistar大鼠 4 6只 (2 0 0~ 2 30 g) ,随机分为 3组。 1组 (2 0只 )以 0 0 3% (w/v)TAA作为饮用水 ,共 12周。 2组 (2 0只 )以 0 0 3%TAA作为初始浓度 ,然后根据每周体重变化调整饮用水中TAA浓度。 3组 (6只 )给予饮用水 ,作为对照组。结果 1组大鼠病死率为 30 % (6 / 2 0 ) ,肝硬化形成率仅 4 5 % (9/ 2 0 )。 2组病死率为 0 ,肝硬化形成率为 90 % (18/ 2 0 )。结论肝硬化诱导过程中大鼠对TAA反应的个体差异可根据每周体重变化加以监测。该法可降低大鼠病死率至 0 ,同时显著提高肝硬化形成率和质量。 李向农关键词:体重 硫代乙酰胺 肝硬化 动物模型 液递物质在肝硬变门静脉高压维持中的作用 1992年 根据门静脉高压症“递质机制”的发病学说,作者设想若将肝硬变大鼠的血液换输入正常大鼠体内,似应对后者的门静脉血流动力学有所影响。本文发现正常和门静脉缩窄大鼠接受肝硬变大鼠换血后,门静脉压力(PVP)分别升高0.29kPa和0.69kPa,且主要是门静脉血流量(PVF)增加所致。作者认为由递质引起的PVP增加部分可称之为“功能性部分”。在门静脉缩窄大鼠,这种“功能性部分”与门静脉缩窄造成的PVP升高幅度相似。说明液递物质在门静脉高压的维持中具有重要作用。 李向农 黄萃庭关键词:血流动力学 肝硬变 门脉高血压 直肠癌保肛手术预防性造瘘的指征分析 被引量:8 2015年 目的研究直肠癌保肛手术后发生吻合口漏的原因,探索预防性造瘘的指征。方法以徐州医学院附属医院2004年3月至2014年3月收治的816例直肠癌保肛手术患者作为研究对象,收集其年龄、性别、基础疾病、营养状态、吸烟史、酗酒史,结合术中出血量、手术时间、吻合口高度等资料,观察以上因素与术后吻合口漏的关系,并进行统计学分析。结果男性、年龄≥65岁、糖尿病、酗酒、吻合口高度≤5cm、手术时间>3小时的患者术后出现吻合口漏的概率较其相应对照组高,差异有统计学意义。结论性别、年龄、糖尿病、酗酒、低位吻合及手术时间等指标作为直肠癌保肛手术后吻合口漏的危险因素,对于评估术中行预防性造瘘的必要性有重要临床意义。 韩亚东 朱孝成 李向农 李超 杨军 时林森 王辉 孟松关键词:直肠癌 保肛手术 吻合口漏 肝门部胆管癌的预后影响因素探讨 2008年 目的探讨影响肝门部胆管癌术后的预后因素。方法回顾性收治的86例肝门部胆管癌的临床资料,分析影响肝门部胆管癌预后的因素。结果分化较好组48例(乳头状腺癌22例、高分化腺癌26例),生存期为(21.3±3.0)个月;分化较差组38例(低分化腺癌21例、未分化癌5例、黏液腺癌12例),生存期为(5.1±0.8)个月,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。不同治疗方式的死亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。切除组(包括根治性切除和姑息性切除)的术后生存期为(19.4±2.2)个月,引流组(包括内引流和外引流)则为(7.2±1.2)个月,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。TNM临床分期Ⅰ、Ⅱ期者共28例,生存期为(27.4±2.1)个月;Ⅲ、Ⅵ期共58例,生存期为(8.8±1.0)个月,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论肝门部胆管癌的预后与组织学分型、手术治疗方式、肿瘤的分期等因素密切相关。 刘玉强 李向农关键词:肿瘤 胆管癌 预后因素 siRNA封闭胰岛素样生长因子Ⅰ类受体对肝癌细胞侵袭能力的影响及其机制 被引量:1 2008年 目的探讨人胰岛素样生长因子1类受体(IGFIR)的短发夹环RNA质粒(pSUPER-siRNA—IGFIR)能否有效抑制人肝癌细胞株MHCC97H侵袭能力并探讨其相关机制。方法设计并合成靶向IGFIR的siRNA片段并构建Psuper—siRNA-IGFIR表达质粒,将其转入MHCC97H、SMMC7721细胞,通过G418筛选出稳定株。通过黏附实验、Boyden小室实验、软琼脂克隆形成实验观察各细胞株侵袭能力的变化并采用明胶酶法测定肝癌细胞的金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的含量,Western blot检测增殖相关基因的变化。并设空白对照组、阳性对照组。结果MHCC97H-IG-FIR-siRNA、SMMC7721-IGFIR-siRNA黏附能力比对照组下降约5倍(MHCC97H)和6倍左右(SMMC7721),细胞迁移能力明显下降,下降各约3倍,细胞克隆形成率明显低于对照组约6倍和8倍,其MMP-2、MMP-9、ICAM-1、LNR、E-cadherin表达比对照组低。结论构建的pSUPER-siRNA-IGFIR具有RNA干扰作用,可抑制肝癌细胞株转移能力。 牛坚 梁磊 李向农 温泉 韩泽广关键词:肝细胞 RNA干扰 基因表达