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毕研伟: 作品数：40 被引量：30H指数：3; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：云南省自然科学基金协和青年科研基金云南省重点新产品开发计划更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>

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一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法。系采用搭桥PCR构建含有B群脑膜炎球菌V1变异型全长FHBP蛋白和V2变异型的位于C结构域的一段抗原表位的融合基因片段，克隆入pET30a(+)载体后，IPTG...; 李健峰彭世泽姬秋彦李智华毕研伟高丹丹徐维明; 文献传递

HPV16 L2肽段偶联AP205 VLP的原核表达及免疫原性分析被引量：1: 2012年; 目的:将编码HPV16衣壳蛋白L2的65～71、112～120免疫优势表位连接到RNA噬菌体衣壳蛋白AP205氮端,组装形成病毒样颗粒,通过在大肠杆菌中实现表达及纯化,对其免疫原性进行研究。方法:合成编码AP205衣壳蛋白基因和HPV16 L2的65～71、112～120位氨基酸表位的基因序列,PCR连接并克隆至pET30a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET30-AP205-HPV16ΔL2,转化大肠杆菌BL21(DH3)感受态细胞,IPTG诱导表达。表达蛋白经凝胶层析纯化及SDS-PAGE、Western blot等理化性质检测,免疫接种ICR小鼠,通过间接ELISA法检测其免疫原性。结果:成功构建重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性表达,透射电镜观察可见典型病毒样颗粒,该VLP在动物实验中表现出较好的免疫原性。结论:成功将HPV16 L2表位偶联AP205以形成VLP,在大肠杆菌中实现可溶性表达。; 姜博毕研伟张营营蔡路奎姬秋彦李智华徐维明; 关键词：人乳头瘤状病毒

一种丙肝病毒滴度测定方法被引量：1: 2015年; 目的:建立一种测定丙肝病毒(HCV)滴度的方法,为HCV的基础研究及临床药物评估提供有效的实验手段。方法:对HCV JFH1病毒株进行倍比稀释并感染Huh7细胞,甲醇固定后,采用抗HCV核心蛋白一抗进行孵育,加入二抗后采用DAB显色,通过计数病毒斑得到HCV的滴度。结果:采用甲基纤维素限制HCV于细胞间感染,利用免疫组化技术使被病毒感染的细胞形成肉眼可见的清晰斑块。结论:建立了一种简单、经济的HCV滴度测定方法。; 李亚东李智华毕研伟陈晨寸韡; 关键词：丙肝病毒滴度免疫组化

RNA导向核酸酶介导的病毒基因组高效定点编辑: 如何利用病毒基因组突变和重组筛选减毒疫苗株和抗病毒药物、构建重要疾病的基因治疗载体以及建立病毒生物学研究的有效方法，是研究病毒遗传和变异的主要目的之一。为了提高病毒基因组的突变效率，常用于诱导突变的经典方法包括物理诱导、...; 毕研伟孙乐高丹丹丁晨李亚东寸韡李琦涵

利用丙型肝炎病毒复制子模型检测重组人λ2干扰素的体外活性: 2017年; 目的:利用丙型肝炎病毒(HCV)复制子细胞模型,体外研究重组人λ2干扰素(hIFNλ2)对HCV复制子的抑制作用。方法:构建重组质粒pcDNA3.1-hIFNλ2-HA,转染293T细胞,表达带有HA标签的hIFNλ2,表达后的上清通过Western印迹检测,然后稀释至不同浓度后作用于带有HCV复制子的Huh7.5细胞系,每隔24h取样并更换培养液,通过报告基因检测hIFNλ2对HCV复制子的抑制作用。结果:构建了pcDNA3.1-hIFNλ2-HA真核表达重组体,并在293T细胞中表达出hIFNλ2,该蛋白能有效抑制HCV复制子的复制。结论:hIFNλ2对HCV复制子具有抑制作用。; 张辉李亚东李亚东宫悦毕研伟丁晨宫悦

微针皮内免疫增强新型冠状病毒S1蛋白免疫原性研究: 2023年; 目的研究新型皮内免疫方法对新型冠状病毒重组S1(rS1)蛋白的免疫效果。方法112只BALB/c小鼠随机分为对照组[只注射Al(OH)3佐剂]、5μg S1组、5μg S1+Al(OH)3组、10μg S1组、10μg S1+Al(OH)3组、20μg S1组、20μg S1+Al(OH)3组,每组分别进行肌内免疫和微针皮内免疫,各组免疫所用S1蛋白与佐剂Al(OH)3质量比为1∶10,共14组,每组8只。免疫程序为0、2和4周3次免疫。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)比较不同免疫途径和免疫剂量诱导的IgG、IgG1和IgG2a结合抗体水平。用SARS-CoV-2野生型(WT)和Omicron(BA.5)假病毒来评估中和抗体的水平。通过酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunosorbent spot,ELISpot)对细胞免疫反应进行评估。抗体终点滴度和中和数据通过Kruskal-Wallis检验进行分析,细胞免疫数据使用单因素方差分析进行分析。结果皮内免疫新型冠状病毒rS1蛋白诱导IgG、IgG1、IgG2a抗体效价高于肌内免疫。免疫rS1蛋白产生的特异性抗血清对新型冠状病毒野生型和Omicron BA.5有明显的中和效果,并且皮内免疫组诱导小鼠产生的中和抗体水平高于肌内免疫组,皮内免疫10μg+Al(OH)3对野生型新型冠状病毒的中和抗体GMT为922,对Omicron BA.5的中和抗体GMT为99。免疫rS1蛋白的小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4水平上升,且皮内组免疫诱导小鼠产生的细胞免疫反应高于肌内免疫组,皮内免疫20μg组引起的IFN-γ水平最高[(370.7±42.36)个免疫斑点];皮内免疫10μg+Al(OH)3组引起的IL-4水平最高[(416.7±51.83)个免疫斑点]。结论皮内免疫引起的免疫应答强于传统的肌内免疫方法,可应用于后续疫苗接种策略。; 孙鑫陈彩迪毕研伟刘晓娟李俊李俊肖红剑姚宇峰李智华; 关键词：新型冠状病毒微针

一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法。系采用搭桥PCR构建含有B群脑膜炎球菌V1变异型全长FHBP蛋白和V2变异型的位于C结构域的一段抗原表位的融合基因片段，克隆入pET30a(+)载体后，IPTG...; 李健峰彭世泽姬秋彦李智华毕研伟高丹丹徐维明

一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法: 本发明提供了一种特异性的DNA病毒基因组定点改造及筛选方法，如下：一、构建定点切割单链、双链核酸酶系统及同源序列；二、导入定点切割单链核酸酶系统和同源序列的细胞感染DNA病毒，待细胞病变，收集P1子代病毒；三、导入定点切...; 寸韡李琦涵毕研伟李智华丁晨; 文献传递

A群脑膜炎球菌多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物的制备及其初步评价被引量：1: 2012年; 目的制备A群膜炎球菌多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)-白喉毒素无毒变异体CRM197(Cross-reactive material 197)结合物,并分析其理化性质及免疫学特性。方法白喉棒状杆菌C7 M1菌株经发酵培养表达CRM197,表达产物经DEAE-4FF层析柱进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定。用溴化氰(CNBr)活化GAMP,己二酰肼(ADH)为连接剂,在碳二亚胺(EDAC)催化下将GAMP与CRM197共价结合,制备GAMP-ADH-CRM197结合物,经Sepharose 4FF层析柱纯化后,进行各项生化检测,采用免疫双扩散检测结合物的抗原性,将结合物皮下注射ICR小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗GAMP的抗体滴度,分析其免疫原性。结果发酵培养20 h时,菌液上清中的CRM197蛋白表达量最高;CRM197以分泌形式表达,纯化后纯度达95%以上,可与白喉类毒素单抗发生特异性反应;GAMP-ADH-CRM197结合物各项生化指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求,与A群流脑诊断血清形成明显的沉淀线,结合物诱生的多糖特异性抗体滴度显著高于多糖组和混合物组。结论成功制备了GAMP-ADH-CRM197结合物,其具有良好的抗原性和免疫原性,为以CRM197为蛋白载体制备脑膜炎球菌结合疫苗奠定了基础。; 张营营蔡路奎姜博毕研伟高丹丹闫铃梅姬秋彦李智华徐维明; 关键词：A群脑膜炎球菌多糖白喉毒素变异体结合物载体蛋白

树鼩γ干扰素在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：2: 2018年; 目的:克隆树鼩γ干扰素(IFNγ)基因,在大肠杆菌中高效表达纯化并鉴定其免疫原性。方法:提取树鼩肺组织总RNA,经RT-PCR扩增出树鼩IFNγ基因,再克隆到原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒p ET-30a(+)-IFNγ,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达树鼩IFNγ;经金属螯合柱复性及纯化,Western印迹和ELISA检测其免疫原性,并检测不同组织中IFNγ的分布情况。结果:构建了重组表达质粒p ET-30a(+)-IFNγ,重组蛋白在30℃、1 mmol/L IPTG诱导4 h获得较高表达量,镍柱复性纯化后得到较高纯度的树鼩IFNγ。Western印迹显示IFNγ可与兔抗人IFNγ单克隆抗体特异性结合,应用Western印迹和ELISA分别检测树鼩IFNγ的免疫原性和抗体滴度,在树鼩的鼻、心、肝、肺、肾、气管中检测到IFNγ。结论:在大肠杆菌中高效表达了重组树鼩IFNγ,复性纯化后具有良好的免疫原性。; 丁晨肖红剑龙琼李智华毕研伟闫玲梅李育中姚月婷寸韡; 关键词：树鼩 Γ干扰素原核表达免疫原性

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