沈瑞明
- 作品数：9 被引量：1H指数：1
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- MEKK3稳定表达细胞株的建立及其对A549细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的 构建人MEKK3基因编码区序列（cDNA）的真核表达载体、建立其稳定表达细胞株并观察其对肺腺癌细胞增殖的影响.方法 从A549细胞中提取总RNA,应用RT-PCR扩增MEKK3 cDNA的全长序列后克隆入pcDNA3.1/hygro（＋）质粒中,构建成MEKK3基因的真核表达载体,然后转染入人肺腺癌A549细胞中,潮霉素筛选稳定转染克隆,通过MTT实验,研究转染MEKK3基因前后细胞增殖的变化.结果 重组载体经酶切鉴定和测序证实目的 基因正确无误,Western印迹检测结果显示MEKK3基因在A549细胞中具有良好的表达;荧光实时定量PCR结果表明MEKK3基因在其稳定转染的A549细胞克隆中表达上调,与空载体稳定转染及未转染细胞比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）;MTT结果显示MEKK3表达上调的稳定克隆组,A549细胞的增殖活性显著增强（A570=0.876 1±0.074 5）,明显高于空载体稳定转染组（A570=0.582 8±0.070 3）及未转染亲代细胞组（A570=0.584 9±0.035 2）,差异具有统计学意义（P＜0.01）,而后两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 MEKK3表达上调可导致肺腺癌细胞的增殖增强.
- 沈瑞明兰风华钱凤英王志红董荔红黄俏佳
- 关键词：基因克隆基因转染荧光实时定量PCR
- 兔脑皮质静脉闭塞后脑组织Caspase-3活性的变化
- 2012年
- 目的观察兔脑皮质静脉闭塞后Caspase-3活性的变化。方法采用电凝法制作兔脑皮质引流静脉急性闭塞模型，琼脂糖凝胶电泳、荧光实时定量PCR和Western印迹检测Caspase-3表达。结果脑皮质静脉闭塞后8hCaspase-3活性已升高，24h达高峰，48h明显下降。结论细胞凋亡是脑缺血后脑损伤发生机制，Caspase-3蛋白参与了皮质静脉闭塞后脑缺血后神经元损伤的病理过程。
- 周建沈瑞明杨堃王守森
- 关键词：静脉闭塞荧光实时定量PCR
- MEKK3在TNF-α刺激后的恶性肿瘤细胞所产生的IL-6中的作用
- 目的：探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶(MEKK3)在TNF-α刺激后的肺癌A549和乳腺癌MDAMB-231细胞所产生的IL-6中的作用.
方法：应用EUSA测定IL-6的产生,Western blot测定MEK...
- 沈瑞明兰风华钱风英董荔红王志红林炎鸿黄俏佳
- 关键词：TNF-Α恶性肿瘤细胞IL-6
- siRNA表达载体稳定沉默肺癌A549细胞MEKK3基因的细胞株建立被引量：1
- 2010年
- 目的构建人MEKK3基因的小干扰RNA（siRNA）表达载体并建立稳定沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。方法设计并合成针对人MEKK3基因4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列，以BamHI及Hindm酶切位点分别克隆入pSilencer4．1-CMVhygro载体，测序鉴定后以脂质体分别转染入A549细胞，Western印迹检测它们对MEKK3表达的抑制，并选择抑制效率最高的表达载体转染入A549细胞，潮霉素筛选后获得含该载体的抗性细胞克隆株，荧光实时定量PCR检测该细胞克隆株中MEKK3表达抑制。结果测序鉴定表明4个MEKK3siRNA表达载体正确无误；Western印迹结果显示对MEKK3的表达有抑制作用，其中pSilencer4．1-MEKK3siRNA2的抑制率达84％；荧光实时定量PCR结果表明，pSilencer4．1-MEKK3siRNA2可稳定沉默MEKK3mRNA的表达，有效率达83％。结论成功地构建了针对人MEKK3基因的siRNA表达载体，并成功地建立了能高效且稳定地沉默MEKK3基因表达的肺癌A549细胞克隆株。
- 沈瑞明兰风华钱凤英董荔红黄俏佳
- 关键词：肺癌A549细胞株基因表达荧光实时定量PCR
- MyD88基因真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的:构建人髓样分化因子88(MyD88)基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体,观察其在GES-1细胞中的表达.方法:从健康人外周血单个核细胞中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增MyD88基因cDNA全长序列,经NheI和KpnI酶切位点,插入到pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建成MyD88基因的真核表达载体;用脂质体Lipo-fectamine2000将其转染入人胃黏膜细胞株GES-1细胞中,Western Blot检测其在GES-1细胞中的表达.结果:重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误;Western Blot结果显示MyD88基因在GES-1细胞具有良好的表达.结论:成功构建了pcDNA3.1/myc-His(-)A-MyD88真核表达载体,并在GES-1细胞中进行了表达,为进一步研究MyD88的结构和功能奠定了基础.
- 沈瑞明凌彩虹黄俏佳
- 关键词：基因克隆基因转染
- MyD88基因真核表达载体的构建及其在GES-1细胞中的表达
- ＜正＞目的:构建人髓样分化因子88（MyD88）基因编码区序列（cDNA）的真核表达载体,观察其在GES-1细胞中的表达.方法:从健康人外周血单个核细胞中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增MyD88基因cDNA全长序...
- 沈瑞明黄俏佳
- 文献传递
- MEKK3基因siRNA表达载体的构建及其RNAi效应的初步研究
- ＜正＞目的:构建人MEKK3基因的siRNA表达载体并初步研究其RNAi效应.方法:设计针对MEKK3 mRNA 4个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,并合成相应的寡核苷酸,经退火后在5′及3′端分别形成带有Bam...
- 黄俏佳沈瑞明兰风华董荔红
- 文献传递
- MEKK3在TNF-α刺激后恶性肿瘤细胞产生IL-6作用中的初步研究
- 恶性肿瘤是危害人类健康和生命的头号杀手,许多细胞因子与恶性肿瘤密切相关。大量研究发现,肿瘤细胞自身分泌或接受致炎因子/(TNF-a等/)刺激后产生的细胞因子IL-6,与恶性肿瘤的发生发展、侵袭转移及化疗抵抗作用等预后不良...
- 沈瑞明
- 关键词：TNF-AIL6WESTERN-BLOTSIRNA技术荧光实时定量PCR
- 文献传递
- 脆性X智力障碍1基因新型可变剪接外显子和剪接异构体的发现
- 目的：对脆性X智力障碍1基因( FMRI)的剪接异构体进行鉴定,并探讨不同个体间、不同组织间FMR1基因可变剪接的差异.
方法：提取外周血总RNA,用长链RT-PCR扩增FMR1基因全长编码序列,胶回收试剂盒纯...
- 沈瑞明兰风华钱风英董荔红王志红林炎鸿黄俏佳
- 关键词：剪接异构体
