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王丽梅: 作品数：23 被引量：91H指数：6; 供职机构：中国海洋大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金上海市青年科技启明星计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程政治法律更多>>

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多聚唾液酸转移酶研究进展被引量：9: 2005年; 多聚唾液酸(polysialic acid,PSA)是一类线性、均一多聚α2,8连接唾液酸的独特碳水化合物,它主要通过典型的N-连接糖苷键附着在脊椎动物神经系统神经黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)上。PSA通过改变NCAM的黏附性调节神经细胞发育、神经导向以及突触形成,从而在神经发育中起关键作用。PSA表达的调节具有时间和结构依赖性,NCAM的唾液酸化是由两种多聚唾液酸转移酶(polysialyltrans ferases)-ST8Sia II(STX)和ST8Sia IV(PST)所催化,它们都属于6个基因编码的α2,8唾液酸转移酶家族。STX和PST都可将多个唾液酸残基转移到含有NeuNAcα2-3(或6)Galβ1-4GlcNAcβ1-R结构的N糖链受体上;两种酶共同作用时远远大于一种酶形成的PSA量。总之,多聚唾液酸转移酶可调节PSA的合成并参与了脊椎动物的神经发育。; 戴功王丽梅杨新颖耿美玉; 关键词：转移酶神经系统脊椎动物神经发育 PSA ACID

胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因的克隆表达及其活性研究被引量：2: 2002年; 为了获得重组胶质细胞源性神经营养因子受体α1(glialcellline derivedneurotrophicfactorreceptoralpha1,GFRα1)并研究其生物学活性 ,从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GFRα1cDNA .将GFRα1cDNA克隆至含T7启动子的质粒 pET 2 8a (+)中 ,构建表达质粒 pET GFRα1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得表达菌株BLGFRα1.表达菌株经 1mmol/LIPTG诱导 3～ 5h后 ,GFRα1蛋白表达 ,并形成包涵体 .凝胶自动扫描分析表明 ,GFRα1表达量占全菌总蛋白的 2 1 5 % ,用Ni2 + NTA树脂纯化和复性后 ,纯度达 90 %以上。; 王丽梅陈哲宇朱伟张磬黄爱军路长林何成; 关键词：克隆活性基因表达 PC12细胞

GDNF家族及其受体在疾病治疗中的研究进展被引量：3: 2004年; 胶质细胞源性神经营养因子 (glialcellline derivedneurotrophicfactor ,GDNF)对多巴胺能神经元、运动神经元、感觉神经元、肠道神经元等多种神经元均具有促存活及损伤保护作用。GDNF的神经营养作用主要是通过胶质细胞源性神经营养因子受体 α (glialcellline derivedneurotrophicfactorreceptors α ,GFRαs)亚基和受体酪氨酸激酶Ret亚基两类受体亚基介导。GDNF家族配体包括GDNF、neurturin (NRTN) ,persephin (PSPN)和ARTNemin (ARTN) ,它们在结构和功能上有很大的相关性。; 魏传银王丽梅陈雪红路长林耿美玉; 关键词：胶质细胞源性神经营养因子信号转导

血小板源性生长因子和bFGF促进猫角膜内皮细胞增生的协同作用研究被引量：3: 2006年; 目的观察血小板源性生长因子(PDGF-BB)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对猫角膜内皮细胞(CECs)增生的影响及其联合应用对细胞增生是否有协同作用。方法猫CECs原代培养,传1代后,分别在培养液中加不同浓度的PDGF-BB和bFGF,加药后第1、3、5d分别利用MTT法测定在490nm处的吸光值来判断CECs的增生情况;同时应用倒置相差显微镜观察细胞形态,扫描电镜检测细胞超微结构。结果与对照组比较,加药后第1、3、5d,PDGF-BB和bFGF均能增加培养的猫CECs的数量,最有效质量浓度分别为100ng/ml和10ng/ml,二者联合培养组猫CECs的增生能力更强。结论PDGF-BB和bFGF可促进猫CECs的增生,二者具有协同作用。; 罗文娟王传富王丽梅; 关键词：血小板源性生长因子碱性成纤维细胞生长因子角膜内皮细胞 MTT法

神经营养素受体p75^(NTR)介导的信号转导被引量：12: 2005年; 魏传银王丽梅陈雪红路长林耿美玉; 关键词：神经营养素 P75^NTR 信号转导

胶质细胞源性神经营养因子受体α1定点突变体制备及其稳定转染细胞株的构建及鉴定: 2004年; 目的 :制备胶质细胞源性神经营养因子受体 α1(GFRα1)的突变体质粒 ,并建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定 RCE细胞株。方法 :通过 Fugene6脂质体转染试剂 ,将 PCR法快速制备的 pc DNA3- r GFRα1突变体质粒分别与带潮霉素 B抗性筛选标记的 pc DNA3.1- RET质粒共转染野生型 PC12细胞 ,建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定PC12细胞株。经 Western印迹和细胞免疫荧光化学方法对转染入 PC12细胞中的各 r GFRα1突变体基因和 RET基因的表达进行鉴定。结果 :Western印迹和细胞免疫荧光化学方法检测均证实了所构建的细胞株中有转入基因的正确表达。结论 :成功构建了 r GFRα1各突变体基因和 RET基因同时转入表达的稳定细胞株 ,为研究 r GFRα1中关键氨基酸的位点参与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)信号转导的作用奠定基础。; 朱伟张勇陈哲宇王丽梅路长林何成; 关键词：RET PC12细胞

人血小板源性生长因子B链基因的克隆表达及其对猫角膜内皮细胞体外增殖的影响被引量：9: 2006年; 目的构建血小板源性生长因子B(PDGF B)原核表达载体,表达足量的PDGF BB蛋白,作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,观察角膜内皮细胞增殖情况。方法从健康剖宫产妇胎盘组织中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT PCR),扩增出PDGF BcDNA,将其克隆至含T7启动子的质粒pET28a(+)中,构建表达质粒pET PDGF B,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BL PDGF B,进行PDGF BB蛋白的表达,以Ni2+NTA树脂对表达蛋白纯化、复性;将得到的PDGF BB蛋白作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,用MTT法分析其对细胞增殖的影响;通过倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态变化以及细胞内部超微结构。结果经基因测序证明,成功构建出pET PDGF B质粒;凝胶自动扫描分析表明,PDGF BB在BL21(DE3)大肠杆菌中得到了高效表达,表达的PDGF B单体蛋白经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE),显示了1条特异蛋白带,相对分子质量约为27000;MTT法证明所表达的PDGF BB蛋白可促进体外培养的猫角膜内皮细胞增殖。结论pET PDGF B原核表达载体的成功构建和PDGF BB蛋白制备纯化为生产活性PDGF BB蛋白及其进一步功能研究奠定了基础。PDGF BB蛋白具有促进猫角膜内皮细胞增殖的作用。; 罗文娟刘美光王传富王丽梅; 关键词：血小板源性生长因子内皮细胞细胞分裂

GFRα1与GDNF结合位点的研究: GFRα1与GDNF结合位点的研究胶质细胞源性神经营养因子/(GDNF/)对多巴胺能神经元、运动神经元、感觉神经元、肠道神经元等多种神经元具有促进存活及保护作用，它还能促进肾脏的发育和精原细...; 王丽梅; 关键词：胶质细胞源性神经营养因子 PC12细胞缺失突变定点突变; 文献传递

硫酸多糖在介导胶质细胞源性神经生长因子神经营养活性中的作用被引量：1: 2005年; 目的:探讨硫酸多糖在介导胶质细胞源性神经生长因子神经营养活性中的作用。资料来源:应用计算机检索Medline1994-09/2005-02与胶质细胞源性神经生长因子和硫酸多糖相关文献,检索词“GDNF,sulfatepolysaccha-rideandsignaling”,并限定语言种类为English,以及中文全文数据库CNKI1994-09/2005-04期间的文章,限定文章语言种类为中文,检索词“胶质细胞源性神经生长因子,硫酸多糖”。资料选择:对资料进行初审,选出包含研究目的的文献,筛除与目的无关的文献。选择以胶质细胞源性神经生长因子,硫酸多糖为主要研究对象的文章30余篇。内容相似的,以近几年发表在较权威杂志者优先。资料提炼:共找出相关性最强的文献29篇,并查找全文,其中5篇关于硫酸肝素氨基葡聚糖的结构,12篇讲述硫酸肝素氨基葡聚糖介导胶质细胞源性神经生长因子信号转导,5篇关于C-Ret的磷酸化与胶质细胞源性神经生长因子信号转导,7篇关于硫酸肝素活性片段及其修饰与胶质细胞源性神经生长因子信号转导。资料综合:利用所查文献对硫酸多糖在介导胶质细胞源性神经生长因子神经营养活性中的作用进行综合分析。胶质细胞源性神经生长因子的信号转导需要硫酸肝素的介导,而这一过程可以从C-Ret的磷酸化来体现。硫酸肝素寡糖片段的大小及其硫酸化修饰对胶质细胞源性神经生长因子的信号转导至关重要。结论:硫酸多糖可促进胶质细胞源性神经生长因子介导的神经营养作用,其中2-O硫酸化基团的存在尤为重要。; 杨新颖王丽梅戴功耿美玉; 关键词：神经生长因子类多糖类信号传导

关于阿尔茨海默病的机制研究:Mint2基因在PC12细胞中的表达功能及其作用的初步研究: 2004年; 目的:获得高表达Mint2蛋白的PC12稳定表达株,观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响,深入研究阿尔茨海默病的发病机制。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达载体pcDNA3.1A-Mint2;采用脂质体lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选稳定克隆;用RT-PCR和Westernblot检测外源基因Mint2在PC12细胞中的转录及表达,并观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响。结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-Mint2;并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株;Mint2对PC12细胞具有明显的促分化和促胞体增大的神经营养作用。结论:Mint2可在PC12细胞中有效表达,目对PC12细胞形态有明显影响,这为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。; 魏传银郑舟军陈雪红路长林王丽梅; 关键词：PC12细胞阿尔茨海默病真核表达载体基因 PCDNA3 亚克隆

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