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金色中仓鼠胚胎植入小鼠子宫后PTEN、FAK、Shc信号分子的异常表达(英文)被引量：1: 2005年; 除了马属动物外,种间妊娠的胚胎总在妊娠的一定时期流产。以往的研究多集中在宏观结构和解剖学差别的研究上,对于这种现象产生的分子机制却少有报道。为了从信号分子角度阐明种间妊娠维持失败的可能原因,我们通过免疫组化和明胶酶谱法比较了科间和同种妊娠部位整合素αvβ3、FAK、p-ERK、IGFⅡ、IGFBP-1、Shc、PTEN和MMP-2、-9表达的差异。科间妊娠是将金色中仓鼠(Mesocricetus auratus)的胚胎移植入假孕小鼠(Mus musculus)子宫并取妊娠D4、D8、D12的子宫为实验材料,相应时间同种小鼠胚胎移植小鼠妊娠后的子宫和假孕小鼠子宫分别为阳性和阴性对照。免疫组化结果表明D8时,科间妊娠孕体integrinαvβ3、IGF-Ⅱ、IGFBP-1、PTEN、Shc、FAK的表达强度均与正常同种妊娠有差异。而妊娠D8时同种、科间妊娠子宫p-ERK的表达部位与表达量无明显差异。明胶酶谱显示,科间妊娠时MMP-2,-9的分泌模式与同种妊娠明显不同。这些结果表明,上述信号通路分子的差异表达有可能是造成科间妊娠时母胎界面异常的组织学表现的一个原因。; 王希朝段恩奎; 关键词：小鼠 PTEN FAK SHC

双氢青蒿素对小鼠T细胞的免疫抑制作用被引量：22: 2010年; 目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖情况;利用流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测CD3+T细胞早、中、晚期活化标志CD69、CD25、CD71表达情况;用Fluo-4/AM荧光钙离子探针技术检测细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的变化;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布;运用流式细胞术(FCM)结合三色荧光染色技术检测CD4+CD25highTreg早期活化抗原CD69表达情况。结果:CFDA-SE染色结果显示,DHA能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性;DHA对ConA刺激的CD3+T细胞CD69、CD25的表达有促进作用,而对CD71的表达有抑制作用,均呈剂量依赖性;DHA单独作用不能引起T细胞[Ca2+]i的升高,在ConA的刺激下能引起[Ca2+]i浓度升高;PI染色流式分析结果显示,DHA阻滞细胞于G0/G1期,阻止细胞进入S期和G2/M期;DHA能够下调CD4+CD25highTreg细胞CD69的表达。结论:DHA对小鼠淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。; 叶燕霞曾耀英黄秀艳陆晓宇曾祥凤王希朝; 关键词：双氢青蒿素免疫抑制 T淋巴细胞流式细胞术

喜树碱诱导Jurkat细胞线粒体膜电势和线粒体质量变化的研究被引量：4: 2006年; 目的:研究喜树碱(camptothecin,CPT)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。方法:用喜树碱处理Jurkat细胞,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡,PI染色流式细胞术测细胞周期,Annexin V-PE/DiOC6(3)双染流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm),NAO染色流式细胞术检测线粒体质量。结果:在10μmol.L-1CPT诱导下,6 h时Jurkat细胞早期凋亡的细胞比率(22.59±1.04)%显著高于对照组(3.93±0.73)%(P<0.01)。CPT组坏死比率(2.48±0.53)%与对照组(2.78±0.63)%无显著差异(P>0.05);并可使细胞出现明显的凋亡峰。晚期凋亡的细胞比率为(13.58±0.97)%显著高于对照组(3.18±0.51)%(P<0.01),CPT组G0/G1期细胞比率(48.14±0.96)%,明显高于对照组(44.09±0.43)%(P<0.01)。CPT组线粒体发生明显去极化现象,AnnexinV+DiOC6(3)-的细胞比率为(19.47±0.69)%,而对照组比率为(4.21±0.40)%,差异显著(P<0.01)。同时,CPT组线粒体质量显著低于对照组:CPT组NAO+细胞比率为(74.77±1.66)%,对照组为(92.24±1.41)%(P<0.01)。结论:CPT诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体去极化作用增强并且线粒体质量下降,表明该凋亡过程与线粒体途径密切相关。; 江颖娟曾耀英王通肇静娴刑飞跃王希朝梁佩燕; 关键词：喜树碱 JURKAT细胞线粒体膜电位细胞凋亡

种间胚胎植入对母体免疫系统T细胞比例的影响: 2008年; 目的:研究种间胚胎植入期母体外周血、外周免疫器官(淋巴结、脾脏)、中枢免疫器官(胸腺、骨髓)中总T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同期假孕母体外周血、淋巴结、脾脏、胸腺、骨髓中T淋巴细胞的百分率。结果:种间胚胎植入时其外周血T细胞计数极显著低于同种和同期假孕小鼠(P<0.01),而淋巴结、胸腺、骨髓中的T细胞计数则极显著高于同期假孕小鼠(P<0.01)。脾脏中同种胚胎植入母体则极显著高于种间和同期假孕小鼠(P<0.01),两后者之间无显著性差异(P>0.05)。结论:种间妊娠时早在植入期开始,母体全身免疫系统就开始发生不利于种间妊娠的反应。; 王希朝曾耀英; 关键词：胚胎植入流式细胞术

金黄地鼠与小鼠科间妊娠及CD57,CD68分子的表达被引量：2: 2003年; 不同种属动物之间的妊娠是进行异种克隆的关键步骤之一.异种动物的克隆胚胎已经构建成功,但胚胎却不能在受体内完全发育至出生.为揭示此现象的机理,对金黄地鼠(Mesocricetus auratus)-小鼠(Mus musculus)科间妊娠做了研究.体外共培养结果显示,金黄地鼠囊胚在小鼠子宫上皮细胞单层上12,24,48,72h的黏附率和48,72h的扩展率均显著低于小鼠囊胚(P<0.01).经胚胎移植,金黄地鼠的囊胚可以在不同科的动物小鼠子宫内植入并发育至D11(胚胎移植后7 d).但与小鼠胚胎移植小鼠子宫相比,科间胚胎移植成功率低,并且胎儿体积明显要小、科间妊娠D8与同种妊娠相比,远侧蜕膜部组织疏松.妊娠D8时,无论科间妊娠还是同种妊娠,CD57,CD68分子的表达在远侧蜕膜部均高于次级蜕膜部.科间妊娠CD57,CD68分子的表达丰度都小于同种妊娠.这些结果表明,金黄地鼠-小鼠之间可以建立科间妊娠,但科间妊娠的胎儿发育较同种妊娠迟缓,妊娠在一定阶段终止.CD57,CD68分子在科间、同种妊娠之间表达的差异提示,二者免疫反应的不同可能是引起科间妊娠终止的原因之一.; 王希朝戴博杰陈大元刘泽隆刘为敏段恩奎; 关键词：金黄地鼠 CD57 CD68 异种克隆

利用激光共聚焦研究金黄地鼠与小鼠科间妊娠中MHCⅡ和Gal-α-Gal的表达(英文): 2007年; 目的:种间胚胎移植是挽救濒危动物的一个有效手段。以往的研究主要集中于对种间、同种妊娠之间微观结构和解剖学差异的描述上,而对导致这些现象产生的分子机制的研究却所见甚少。本研究的目的是阐明同种妊娠和科间妊娠之间免疫反应的差异,并初步探讨科间妊娠中流产的可能原因。方法:以科间妊娠第4天、第8天、第12天的孕体为实验组,小鼠同种移植妊娠第4天、第8天、第12天的子宫孕体和相应时间假孕小鼠的子宫为阳性和阴性对照。结果:采用间接免疫荧光和激光共聚焦扫描的方法对冰冻切片显色的结果表明:妊娠第8天时,MHCⅡ分子和Gal-α-Gal抗原决定簇的表达位置和表达密度在科间妊娠、阳性、阴性对照之间均不相同。妊娠第八天时,MHCⅡ分子在科间妊娠中的表达弱于同种妊娠,其表达模式在第12天时也不相同。Gal-α-Gal抗原决定簇在科间妊娠第8天时不表达,但在同种妊娠中却有一定水平的表达。在妊娠第12天,科间妊娠中有一定量的表达,但与同种妊娠的表达模式不同。结论:科间妊娠和同种妊娠的免疫反应有差异,这些差异可能是造成科间妊娠失败的原因之一。; 王希朝段恩奎; 关键词：金黄地鼠

氧化苦参碱对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞增殖影响的研究被引量：1: 2005年; 目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂C on A和O M T的共同作同下荧光强度的变化,并应用相关软件分析O M T对小鼠淋巴细胞增殖的影响程度。结果培养48h,流式细胞仪检测的淋巴细胞C FSE荧光强度,对照组未出现子代峰,即淋巴细胞没有增殖。C on A组明显的出现3个峰,说明C on A刺激后48h细胞出现了明显的细胞增殖,与对照组相比荧光强度减半明显。在C on A+O M T各剂量组中,高剂量组即O M T500μg/m L组,原代峰显著高于C on A组,各子代峰显著低于C on A组,但与对照组比较差异无显著性,说明O M T明显抑制了淋巴细胞的增殖,中剂量组即O M T125μg/m L组和高剂量组结果一致,说明这一剂量的O M T仍然明显抑制小鼠淋巴细胞的增值,O M T低剂量组即O M T31μg/m L组和C on A组比较差异没有显著性,和对照组比较,各代细胞荧光强度差异有显著性,即这一剂量的O M T对淋巴细胞增殖抑制作用不明显。培养72h后,各组之间荧光强度变化情况与48h的情况基本一致。经C ELLQ uest软件拟合后得到各项增殖指标显示,O M T在500?; 伍斌蔡小嫦曾耀英王通王希朝曾翔凤; 关键词：OMT 增殖

LIF,VEGF,CD57和CD68在大鼠胚胎移入小鼠子宫后的表达被引量：3: 2003年; 种间妊娠失败是异种克隆的主要障碍.为探讨种间妊娠失败的原因,将大鼠囊胚移入假孕第3天的小鼠子宫内.以前的研究显示,大鼠胚胎只能在小鼠子宫内发育到第9天.本实验结果表明,异种胚胎移植后母胎界面CD57和CD68分子表达较同种移植的增强.免疫组织化学和免疫印迹研究均显示,异种胚胎移植后白血病抑制因子(LIF)表达增强,但血管内皮生长因子(VEGF)表达下降.在体外共培养系统中,大鼠外胎盘锥在小鼠子宫蜕膜细胞上黏附率、扩展率和扩展面积较同种的显著降低.这些结果提示,大、小鼠种间妊娠中免疫排斥反应增强,异种胚胎侵入能力降低,可能是导致大、小鼠种间妊娠失败的重要原因.; 戴博杰曹宇静王希朝周家喜张键陈大元段恩奎; 关键词：异种克隆 LIF VEGF CD57 CD68 小鼠

种间妊娠的研究进展被引量：4: 2001年; 种间妊娠即胚胎与怀孕母体属于不同种动物的妊娠方式，是异种克隆的关键环节之一．借助于种间妊娠克隆濒危动物已成为人们关注的热点之一．目前，中国与美、日、韩等国在种间克隆大熊猫项目上展开了竞争，使得种间妊娠问题显得尤为重要．在系统介绍了种间妊娠的研究历史、建立方法及有关理论的基础上，着重就种间妊娠的障碍、排除策略和应用前景进行了评述．; 王希朝戴博杰段恩奎陈大元; 关键词：克隆繁殖

CD4^+、CD8^+、CD25^+、CD69^+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体及同期假孕小鼠淋巴结中的差异: 2007年; 目的:研究种间胚胎植入期母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同时期假孕母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+的T淋巴细胞对应CD3+细胞的百分率。结果:与同种胚胎移植后的植入相比,种间胚胎移植后植入期母体淋巴结中,CD3+CD4+、CD3+CD25+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞的比例均极显著低于同种胚胎移植的植入期受体(P<0.01);而CD3+CD8+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞的比例显著低于同种胚胎移植的植入期受体(P<0.05);CD3+CD69+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体淋巴结中的比例却无显著差异(P>0.05)。种间胚胎植入时母体淋巴结中CD4+/CD8+的比例,与同种胚胎植入受体和假孕小鼠相比,三者之间均无统计学意义上的显著差异(P>0.05)。结论:种间胚胎移植后从植入期开始,母体淋巴结中的淋巴细胞就发生了不利于胚胎植入的全身免疫反应。; 王希朝曾耀英刑飞跃肇静娴狄静芳冯铮曾山; 关键词：小鼠胚胎植入

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王希朝

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