陈海旭
- 作品数：5 被引量：79H指数：3
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗菌肽Magainin基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达被引量：38
- 2002年
- 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽magainin基因片段 ,合成片段拼接后 ,与pUC19重组 ,获得magainin基因 .Magainin基因与酵母表达载体pPIC3重组 ,构建胞内表达载体pPIC3 Mag ,电击法转化GS115宿主菌 ,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .阳性克隆用甲醇诱导表达 ,用免疫印迹法确定了产物的正确性 .
- 陈海旭邹冠玉屈贤铭杨胜利
- 关键词：抗菌肽克隆
- 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：8
- 2002年
- 为了大量制备重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa) ,对构建的基因工程菌株E .coliBL2 1(DE3)pET2 2b mETIa进行了表达条件的优化 .用摇瓶培养 ,rETIa蛋白占菌体总蛋白 4 0 %以上 .经破碎菌体 洗涤包涵体 溶解包涵体 复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化获得电泳纯的rETIa蛋白 .测定了rETIa对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、组织型纤溶酶原激活因子缺失突变体 (NTA)的抑制活性 .
- 王新陈海旭陆坚峰张毅屈贤铭杨胜利
- 关键词：大肠杆菌纯化
- 抗菌肽基因的克隆表达和基因表达的转录后调控研究
- 抗菌肽是生物体先天性防御系统的重要组分,有望成为新一代抗菌剂.天然来源的抗菌肽不能满足研究和应用的需要,因此希望利用基因工程手段来产生大量的抗菌肽.我们从果蝇中克隆抗菌肽diptericin cDNA,重组到融合表达载体...
- 陈海旭
- 关键词：抗菌肽基因工程转录后调控
- 文献传递
- 抗菌肽Diptericin cDNA的克隆及在E.coli中的融合表达被引量：34
- 2001年
- 从果蝇成虫中抽提总 RNA,RT- PCR扩增编码伏蝇素 diptericin的 c DNA,克隆并测定了全序列 .将该 c DNA亚克隆到融合表达载体 p MAL- CR1上 ,转化大肠杆菌 BL2 1菌株 ,进行了高效的可溶性融合表达 .通过离子交换层析纯化融合蛋白 ,经 Xa因子酶切后得到的重组 diptericin具有抗菌活性 .
- 陈海旭胡泰山王新屈贤铭
- 关键词：抗菌肽CDNA克隆
- 抗菌肽MagaininⅡ单链抗体基因的构建及其表达被引量：3
- 2000年
- 目的将克隆的抗体轻重链可变区基因拼接成单链抗体基因并将其在大肠杆菌中表达。方法通过RT—PCR从两株抗MagaininⅡ杂交瘤细胞株 (2D1 ,3F8)中克隆出VH 和VL 基因 ,然后利用重组PCR技术 ,将VH 和VL 基因通过柔性肽段(GLY4Ser)3 的Linker拼接成单链抗体基因(ScFv) ,将ScFv克隆到表达载体 pCANTAB5E上并将其分别在大肠杆菌E.coliHB2151及TG1 中进行表达。结果SDS PAGE和Western blot分析表明 ,ScFv在大肠杆菌E.coliHB2151中得到了分泌表达。间接ELISA结果显示可溶性ScFv及其表面展示噬菌体均具有抗原结合活性。结论成功地获得了ScFv 2D1和ScFv 3F8基因并在大肠杆菌中得到了功能性表达 ,为新型抗菌肽的设计打下了基础。
- 胡泰山陈海旭杨运桂钱友存陈登鸿屈贤铭杨胜利
- 关键词：重组PCR单链抗体分泌表达抗菌肽
