陈莹莹
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
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- 固醇调节元件结合蛋白1c对骨骼肌细胞胰岛素受体底物1表达调控的影响
- 目的 探讨固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1(IRS-1)表达调控的影响.方法 采用酶联合消化法取大鼠原代骨骼肌细胞,免疫组化法鉴定.将原代细胞分为对照组(C)、对照+胰岛素组...
- 尹雯雯毕艳朱大龙陈莹莹汤孙寅焱吴文君
- 转录因子SREBP1c在高脂诱导L6细胞胰岛素抵抗中的作用及机制被引量：9
- 2015年
- 目的 探讨固醇调节元件结合蛋白-1c （SREBP-1c）对骨骼肌细胞胰岛素受体底物-1（IRS-1）的调控机制,以明确SREBP-1 c在高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中的作用.方法 L6细胞经2％胎牛血清（FBS）诱导分化成肌管细胞,经500 μmol/L棕榈酸（PA）处理建立胰岛素抵抗模型.采用Western印迹检测L6肌管细胞经PA处理后0.5、1、3、6、12、24、48 h的SREBP-1c、p-IRS-1（Tyr608/612）、IRS-1、p-AKT（Ser473）、AKT的蛋白表达.检测L6肌管细胞过表达SREBP-1 c或用肝X受体（LXR）激动剂TO901317（5 μmol/L）处理后SREBP-1 c、脂肪酸合成酶（FAS）及胰岛素信号通路相关分子的蛋白表达.采用双荧光素酶报告基因实验分析SREBP-1 c转录因子对IRS-1启动子区域的调控作用.结果 L6肌管细胞经PA处理后,SREBP-1c蛋白表达在1h后即显著增高,胰岛素信号通路蛋白p-IRS-1（Tyr608/612）、IRS-1及p-AKT（Ser473）表达在6h后显著下降,AKT蛋白表达无变化.L6肌管细胞经LXR激动剂TO901317处理后SREBP-1c、FAS基因及蛋白表达增高,IRS-1基因表达下降,p-IRS-1（Tyr608/612）、IRS-1及p-AKT（Ser473）/AKT蛋白表达下降.L6肌管细胞过表达SREBP-1c后相关蛋白出现与LXR激动剂干预相似的变化.双荧光素酶报告基因实验结果显示SREBP-1c显著抑制IRS-1的启动子活性,SREBP-1c DNA结合域的酪氨酸突变成丙氨酸后则对IRS-1启动子无作用.结论 SREBP-1c通过抑制IRS-1基因转录表达而影响胰岛素信号通路,在高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗中起关键作用.
- 吴文君毕艳汤孙寅炎尹雯雯陈莹莹朱大龙
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白-1C棕榈酸骨骼肌胰岛素抵抗胰岛素受体底物-1
- 固醇调节元件结合蛋白1c对骨骼肌细胞胰岛素受体底物1表达调控的影响被引量：4
- 2014年
- 目的 探讨固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体底物1（IRS-1）表达调控的影响.方法 采用酶联合消化法取2～3 d SPF级雄性SD大鼠原代骨骼肌细胞,将原代细胞分为对照组（C）、对照＋胰岛素组（C＋I）、高脂组（PA）及高脂＋胰岛素组（PA＋I）.将表达SREBP-1c腺病毒转染L6细胞,根据感染复数（MOI）分为含绿色荧光蛋白阴性载体（GFP）组、MOI值为5、50、100、200组.将靶基因为SREBP-1c的干扰RNA （siRNA）转染L6细胞,并分为空白对照组、阴性siRNA组及SREBP-1c siRNA组.Western blotting和实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测SREBP-1c、IRS-1、蛋白激酶B（Akt）基因及蛋白表达,油红O染色法检测细胞内脂质沉积情况.多组资料比较采用方差分析,两两比较采用最小显著差异法.结果 与C组相比,PA组SREBP-1c基因和蛋白水平升高（分别为2.72±0.08比1.00±0.18,3.02 ±0.19比1.00±0.05,t=15.240、18.289,均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白水平降低（分别为0.71 ±0.04比1.00 ±0.05,0.82 ±0.04比1.00±0.04,t=-7.960、-6.052,均P＜0.05）,丝氨酸磷酸化IRS-1蛋白表达升高,丝氨酸磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达下降（t=20.987、-5.869,均P＜0.05）.与GFP组相比,MOI值为50、100和200组的SREBP-1c基因和蛋白表达呈剂量依赖性上升（均P＜0.05）,IRS-1基因和蛋白表达水平呈剂量依赖性下降（均P＜0.05）.与空白对照组和阴性siRNA组相比,SREBP-1c siRNA组SREBP-1c基因和蛋白水平降低,IRS-1蛋白表达升高（均P＜0.05）.结论 SREBP-1c可抑制骨骼肌IRS-1胰岛素信号通路,参与肌细胞胰岛素抵抗的发生.
- 尹雯雯毕艳陈莹莹汤孙寅焱孙婧吴文君曹姝朱大龙
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白1C胰岛素受体底物1胰岛素抵抗骨骼肌细胞
- 胰岛素对高脂诱导胰岛素抵抗的骨骼肌细胞SREBP-1c表达的影响
- 目的:探讨胰岛素对高脂诱导胰岛素抵抗的骨骼肌细胞脂代谢及其相关基因和蛋白表达的影响和机制。方法:培养L6成肌细胞,诱导分化成肌管,将部分诱导分化后的细胞用浓度为0.4rnM的棕榈酸干预24小时,用葡萄糖氧化酶法鉴定是否建...
- 孙婧汤孙寅焱陈莹莹朱大龙毕艳
- 文献传递
- 空腹血糖与胰岛β细胞功能及胰岛素敏感性关系的研究被引量：5
- 2012年
- 目的评估FPG与胰岛β细胞功能及IS之间的关系。方法采用多阶段分层整群随机抽样方法对江苏省1277例人群进行研究,根据OGTT分为NGT、IFG、IGT、IGR、T2DM组。IS用ISI及1/HOMA-IR评价;β细胞功能用经IS校正的处置指数DI(包括DI0、DI30、DI120)评估。结果同NGT组ISI、DI0、DI30、DI120相比,IGT组分别下降25.2%、17.1%、37.2%、12.5%;IFG组分别下降23.5%、65.4%、37.6%、37.1%;IGR组分别下降42.7%、70.1%、56.5%、38.1%;T2DM组分别下降44.7%、83.4%、76.0%、66.0%。结论在正常糖耐量阶段,随着FPG升高,IS和胰岛素分泌有下降趋势,两者共同促进FPG的升高。
- 杨慧杰毕艳童国玉孙婧陈莹莹杨东辉朱大龙
- 关键词：Β细胞功能胰岛素敏感性空腹血糖
- 艾塞那肽对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响
- 目的观察艾塞那肽和甘精胰岛素治疗4周对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响。方法建立高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病SD大鼠模型,STZ注射后第三天予以艾塞那肽或甘精胰岛素干预治疗,通过Western blo...
- 陈莹莹汤孙寅焱房其军李晓倩孙婧尹雯雯张红沈山梅朱大龙毕艳
- 文献传递
- 固醇调节元件结合蛋白1c抑制骨骼肌胰岛素受体底物1基因表达的分子机制被引量：2
- 2015年
- 目的探讨固醇调节元件结合蛋白lc（SREBP—lc）抑制骨骼肌细胞胰岛素受体底物1（IRS-1）基因转录的具体分子机制。方法将SREBP-1c表达质粒、IRS-1启动子荧光素酶报告质粒及海肾质粒胸腺嘧啶核苷激酶启动子{pRL-TK）采用Lipofectamin2000共转染L6细胞，以pCDNA3．1空质粒为对照，36h后裂解细胞按双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明书检测荧光素酶。将表达SREBP-1c的腺病毒感染L6肌管细胞，以表达绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒作对照，感染48h后收取细胞抽提核蛋白，进行凝胶迁移滞后实验（EMSA）和染色质免疫共沉淀（CHIP）实验，分析SREBP-1c转录因子与IRS-1启动子区域的相互作用。组间比较采用双因素方差分析。结果荧光素酶截断实验显示IRS．1启动子区域-450～-210bp为SREBP-1c的作用范围。序列分析显示IRS-1启动子-302～-292bp处存在SREBP-1c潜在的结合序列GCCTCCCGAG，该序列突变为TGTYAAATTA，荧光素酶实验显示SREBP．1c抑制野生型IRS-1启动子活性，而对突变型IRS-1启动子无抑制作用（分别为7．03±1．28比19．09±2．45、3．55±1．68比3．96±1．09，F=114．437、0．251，均P〉0．05）；EMSA结果显示SREBP-lc蛋白与野生型探针直接结合，而不被突变探针所竞争。CHIP结果显示SREBP-1c可直接结合到IRS-1的启动子区域，定量分析显示PA组细胞SREBP-1c结合到IRS．1启动子区域的量为对照组的2倍，SREBP-1c过表达组为GFP组的5倍（分别为2．15±0．03比1．07＋±0．24，5．48±1．28比0．86±0．19，t=6．8775、5．495，均P〈0．05）。结论SREBP-1c通过直接结合到IRS．1启动子区域的非典型固醇反应元件序列抑制IRS-1基因转录表达，继而影响胰岛素信号通路的转导。
- 吴文君时俊锋汤孙寅炎陈莹莹尹雯雯朱大龙毕艳
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白1C棕榈酸骨骼肌胰岛素受体底物1分子机制
- 胰岛素对高脂诱导胰岛素抵抗L6细胞固醇调节元件结合蛋白-1c表达的影响
- 2015年
- 目的探讨胰岛素对高脂诱导胰岛素抵抗的骨骼肌细胞脂代谢及相关基因、蛋白表达的影响和机制。方法 L6成肌细胞诱导分化后行棕榈酸干预建立胰岛素抵抗模型，胰岛素干预后，分别检测3组脂代谢相关基因和蛋白表达的变化。结果与对照组比较，高脂组诱导胰岛素抵抗后，固醇调节元件结合蛋白（SREBP）-1cmRNA和蛋白水平明显升高，IRS-1mRNA和蛋白水平明显降低。胰岛素干预后，SREBP-1c表达下降，IRS-1表达升高。3组中肿瘤坏死因子（TNF）-α、star3mRNA表达无明显变化。结论高脂诱导骨骼肌胰岛素抵抗下，胰岛素干预可能通过影响脂质代谢通路中关键的转录因子改善胰岛素抵抗。
- 孙婧汤孙寅焱陈莹莹朱大龙毕艳
- 关键词：骨骼肌细胞棕榈酸胰岛素抵抗SREBP-1C
- 胰岛素治疗对糖尿病大鼠骨骼肌脂肪酸转运相关蛋白表达影响的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨胰岛素干预治疗对骨骼肌细胞内脂肪酸转运蛋白表达的影响。方法建立高脂喂养联合小剂量STZ诱导的糖尿病SD大鼠模型,在FPG升高后3d予中效胰岛素或格列齐特(GLI)治疗3周,血糖控制目标随机血糖<8 mmol/L。Western blot检测骨骼肌细胞内脂蛋白脂酶(LPL),脂肪酸转位酶(FAT)、脂肪酸转运蛋白1(FATP-1)、脂肪酸结合蛋白(FABP)及肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)蛋白表达水平。结果与NC组比较,DM组骨骼肌细胞内LPL蛋白表达上调30%,Ins组和GLI组治疗下调了LPL蛋白表达;DM组骨骼肌细胞内CPT-1和FAT蛋白分别下调了45%和47%,Ins组和GLI组治疗分别上调了FAT蛋白表达31%和26%,Ins组同时上调了CPT-1蛋白表达57.5%;FATP-1和FABP蛋白表达各组间差异无统计学意义。结论胰岛素治疗改善了细胞内脂肪酸转运及线粒体氧化,可能是骨骼肌细胞内脂质沉积减少的机制之一。
- 汤孙寅焱毕艳孙婧杨慧杰陈莹莹朱大龙
- 关键词：胰岛素糖尿病骨骼肌
- 艾塞那肽对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察比较艾塞那肽和甘精胰岛素治疗对糖尿病大鼠脂肪细胞脂代谢的影响。方法7～8周龄雄性sD大鼠，体重180～200g，按随机数字表法分为2组（对照组8只，高脂组30只）：对照组仅予普通饮食，高脂组予高脂喂养5周，联合小剂量链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病SD大鼠模型，3d后将成模大鼠随机分为3组进行不同干预：对照组和糖尿病组给予生理盐水，另外2组分别予艾塞那肽或甘精胰岛素干预4周。通过Westernblotting和实时定量聚合酶链式反应检测大鼠附睾周围脂肪组织中脂肪细胞脂质合成酶如磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶-1（ACC-1）蛋白及基因表达，以及脂质水解相关酶如脂肪组织甘油三酯脂酶（ATGL）、色素上皮衍生因子（PEDF）基因表达。多组定量资料间比较采用方差分析，两两比较采用最小差异显著性分析。结果与对照组比较，糖尿病大鼠脂肪细胞脂质合成酶PEPCK和FAS基因及蛋白表达降低，ACC-1基因水平降低，脂质水解相关蛋白ATGL和PEDF基因表达升高（均P〈0．05）。艾塞那肽及甘精胰岛素治疗后，PEPCK、FAS基因及蛋白水平升高，ACC-1基因表达增加，ATGL、PEDF基因表达降低（均P〈0．05）。与甘精胰岛素组比较，艾塞那肽组PEPCK、FAS基因[艾塞那肽与甘精胰岛素：PEPCKmRNA（1．68±0．45）VS（1．15±0．24）；FASmRNA（7．12±0．13）vs（1．18±0．16）]及蛋白[PEPCK（1．11±0．08）vs（0．87±0．08）；FAS（1．95±0．10）VS（0．99±0．08）]水平明显升高（t=2．525、69．374、5．312、18．670，均P〈0．05）。结论艾塞那肽可促进脂肪组织甘油三酯合成、减少脂质分解，其作用强于甘精胰岛素。
- 陈莹莹房其军李晓倩沈山梅汤孙寅焱张红孙婧尹雯雯朱大龙毕艳
- 关键词：糖尿病胰岛素脂肪细胞
