黄鹰
- 作品数：34 被引量：42H指数：3
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生环境科学与工程农业科学更多>>
- 粟酒裂殖酵母tRNA前体3′末端加工酶Trz1p功能的研究
- 2009年
- [目的]研究粟酒裂殖酵母tRNA前体3′末端加工酶Trz1p在体内的功能,为以后进一步探索Trz1p的功能奠定基础。[方法]构建Trz1+的表达载体pREP82x-trz1-5 flag,通过醋酸锂转化法将pREP82x-trz1-5 flag转入yYH1菌株和Trz1+的缺失菌株ySS0319中,并进行随机孢子分析。[结果]Trz1p C-端添加5FLAG仍能促进tRNA前体3′末端的加工成熟,但Trz1-5flag不能救活Trz1+的缺失菌株。[结论]粟酒裂殖酵母Trz1p具有tRNA前体3′末端加工功能。
- 苏文陈赵振冯振华黄鹰
- 关键词：粟酒裂殖酵母
- Loss of ppr3,ppr4,ppr6 or ppr10 perturbs iron homeostasis and leads to apoptotic cell death in Schizosaccharomyces pombe
- 苏杨杨艳梅黄鹰
- 裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)PPR蛋白Ppr10和Ppr11参与细胞色素c氧化酶(复合体Ⅳ)亚基的翻译
- 闫建华汪一荣王平张清珍马旭亭苏敏慧黄鹰
- 粟酒裂殖酵母Cyc2定位及功能的研究
- 2020年
- 芽殖酵母中CYC2蛋白与Cyt c的装配有关,对线粒体功能的发挥十分重要.但该蛋白在粟酒裂殖酵母中的同源蛋白Cyc2的功能还未可知,本文研究了粟酒裂殖酵母中Cyc2的定位及其对线粒体功能的影响.构建Δcyc2菌株后观察其在甘油培养基上的表型,并构建回补菌株验证表型,结果发现Δcyc2在甘油板上表现出了生长缺陷;通过检测Δcyc2菌株内由mtDNA编码的呼吸链蛋白的表达量,结果发现Cyc2的缺失并不会影响呼吸链蛋白的表达;利用生物信息学分析Cyc2序列,发现它的N端含有一段线粒体定位序列(MTS)且该蛋白没有跨膜区域,为确定该蛋白在细胞中的具体定位,分别构建Cyc-GFP和Tom20-Flag/Cyc2-Myc菌株,通过荧光观察及生化方法确定该蛋白为线粒体内膜外周蛋白.综上所述,粟酒裂殖酵母Cyc2为线粒体内膜外周蛋白,不会影响线粒体呼吸链蛋白的表达,可能通过其他途径参与线粒体功能的发挥.
- 杨贵红黄鹰
- 关键词：粟酒裂殖酵母线粒体
- 丙酮醛降解酶基因的克隆与高效表达
- 2016年
- 由于丙酮醛降解酶(methylglyoxal degradation enzyme,MD)是生物体内代谢丙酮醛的一种关键酶,实现MD的高效表达对调控丙酮醛的代谢途径具有重要意义。所以根据Schizosaccharomyces pombe_Gene DB中MD的基因序列(SPAC22E12.03C)设计引物,以粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)c DNA文库为模板通过PCR扩增技术得到目标基因,目的片段全长576 bp。将SPAC22E12.03C连接到p ET-28a(+)上,得到重组质粒p ET-28a(+)-SPAC22E12.03C,并在Escherichia coli BL2l(DE3)中实现表达。同时,对其目的蛋白的表达条件进行了优化,获得最佳表达条件:诱导温度37℃,诱导起始菌体D600 nm为0.5~0.6,诱导剂IPTG浓度为0.8 mmol/L。这为研究粟酒裂殖酵母体内丙酮醛的降解途径打下了坚实基础。
- 王平赵巧巧黄鹰
- 关键词：粟酒裂殖酵母丙酮醛基因克隆基因表达
- 人源化抗Cry1B毒素蛋白单链抗体的原核表达及生物学活性测定被引量：5
- 2013年
- 利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立了Cry1B毒素蛋白的ELISA检测方法。方法以展示scFv抗体的重组噬菌体感染E.coli HB2151,经PCR和基因测序检测克隆scFv基因片段的完整性,用SDS-PAGE方法检测scFv在E.coli HB2151宿主菌中的表达水平,用ELISA测定法检测scFv的抗原结合活性,通过时间梯度优化获得可溶性表达蛋白的最佳培养时间。结果表明:经PCR、DNA电泳及基因测序等,均证实重组噬菌体对E.coli HB2151宿主菌侵染成功,SDS-PAGE电泳结果表明scFv抗体表达成功,纯化后的蛋白质量浓度为132μg.mL-1。以纯化的scFv蛋白为基础建立了对Cry1B毒素蛋白的间接竞争ELISA法,方法的抑制中质量浓度(IC50)为1.398μg.mL-1,最低检测限(IC10)为0.025 7μg.mL-1,线性检测范围为0.5～5.0μg.mL-1,scFv对Cry1C的交叉反应率为7.51%;与Cry1Ab、Cry1Ac的交叉反应率均小于0.1%;在培养温度30℃,1 mmol.L-1IPTG诱导条件下,scFv在E.coliHB2151宿主中的最佳诱导表达时间为12 h。本研究成功地将抗Cry1B毒素蛋白的scFv在E.coli HB2151中进行了可溶性表达,获得了具有抗原结合活性的scFv融合型抗体,为实际生产应用与试剂盒研发提供了基础。
- 徐重新张存政张霄刘媛黄鹰刘贤金
- 关键词：单链抗体可溶性表达
- A Survey of green plant tRNA3'-end processing enzyme tRNAase Zs,homologs of the candidate prostate cancer susceptibility protein ELAC2
- Background:tRNase Z removes the 3’-trailer sequences from precursor tRNAs,which is an essential step preceding...
- 黄鹰
- 关键词：TRNABIOINFORMATICS
- 文献传递
- 粟酒裂殖酵母Atp25蛋白定位和功能研究
- 2021年
- 通过荧光显微镜观察、线粒体提取、基因敲除和免疫印迹等技术,研究粟酒裂殖酵母Atp25蛋白定位和Atp25蛋白缺失对线粒体功能的影响.Atp25是核基因组编码蛋白质,生物信息学预测和荧光显微镜观察结果显示Atp25蛋白定位在线粒体中,免疫印迹技术进一步验证了Atp25蛋白的定位.表型研究结果显示,Δatp25菌株存在生长及呼吸缺陷.Δatp25菌株中线粒体呼吸链复合体亚基蛋白(Cox1、Cox2、Cox3、Cob1、Atp6)水平显著降低.实时荧光定量PCR结果表明,Δatp25菌株中这些复合体亚基的mRNA水平没有变化.
- 张云黄鹰
- 关键词：线粒体粟酒裂殖酵母
- 抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定被引量：1
- 2013年
- 通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体（Bacmid-scFv）侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度（IC50）为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.
- 徐重新张霄张存政刘媛谢雅晶黄鹰刘贤金
- 关键词：单链抗体真核表达系统酶联免疫分析
- 亚致死剂量二嗪农对锦鲫的毒性效应及鱼体富集研究被引量：2
- 2009年
- 采用半静态法测定了二嗪农对锦鲫的急性毒性,并以AChE活性为毒性指标,研究了亚致死作用剂量(96h-LC50的1/5、1/10、1/20、1/40)下持续暴露30 d和在清水中恢复30 d时二嗪农对锦鲫的慢性毒性效应,以及锦鲫不同组织对二嗪农的富集作用,为评价二嗪农环境生态风险提供依据。结果表明:二嗪农对锦鲫的96h-LC50为11.04 mg/L,乙酰胆碱酯酶活性的抑制率随剂量的增加而增大,最高抑制率可达91%;酶活恢复过程缓慢,最高恢复率仅为21.6%;组织中的富集量大小依次为肝>肉,恢复30d后各组织仍有二嗪农残留且富集大小顺序保持不变。
- 侯方浩余向阳赵于丁刘贤进黄鹰
- 关键词：毒性效应乙酰胆碱酯酶生物富集
