祁培培 作品数:14 被引量:14 H指数:3 供职机构: 第二军医大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市科学技术委员会基础研究重点项目 安徽省高校省级自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
基孔肯雅病毒包膜蛋白E2的全基因合成及原核表达 被引量:3 2012年 目的通过对全长基孔肯雅病毒包膜蛋白E2(CHIKV-E2,1~404 aa)及其跨膜疏水区(351~378 aa)缺失突变体E2(1~350 aa)进行原核表达,分析跨膜疏水区对E2蛋白在大肠杆菌中表达的影响。方法利用ExPasy预测软件对E2蛋白跨膜疏水区进行预测分析,根据GenBank数据库中CHIKV-E2氨基酸序列获得其对应的基因序列。结合重叠延伸PCR(OE-PCR)原理设计用于全基因合成的核酸引物对CHIKV-E2全长基因(404 aa)进行体外合成,构建全长E2蛋白及其缺失突变体原核表达质粒,将序列正确的两种重组质粒分别转至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组质粒的表达情况。结果 OE-PCR法成功合成了大小为1 212 bp的编码CHIKV-E2(1~404 aa)蛋白的全长基因,构建了全长E2蛋白及其缺失突变体重组表达质粒pET21b-E2(1~404)和pET21b-E2(1~350),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE结果显示缺失突变体pET21b-E2(1~350)融合蛋白表达量较pET21b-E2(1~404)有明显提高。结论 E2蛋白跨膜疏水区(351~378 aa)对该蛋白的原核表达具有重要影响,缺失该疏水区的突变体在大肠杆菌中表达量比全长E2蛋白表达量明显提高。 章萍萍 潘卫 曹洁 陈秋莉 王锦红 张华群 葛宜兵 祁培培 刘超 邓松华关键词:缺失突变体 原核表达 人IgG四亚类对噬菌体展示Ig结合蛋白单结构域随机组合文库的体外进化筛选 被引量:3 2012年 金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SpA)和链球菌蛋白G(Streptococcal protein G,SpG)是细菌产生的特异结合宿主抗体的细菌免疫球蛋白结合蛋白(Immunoglobulin(Ig)-binding proteins,IBPs)的代表分子。SpA和SpG均包含由多个序列高度同源的结合结构域重复组成的抗体结合区,各单结构域都具有完全的结合IgG的功能。为研究这些单结构域随机组合能否产生具有新结合特性的组合分子,将SpA的A、B、C、D、E以及SpG的B2、B3共7个单结合结构域随机组合构建成噬菌体展示文库后,应用人IgG1、2、3、4为诱饵分子对该文库进行4轮筛选,获得了SpA天然分子中不存在的单结构域排列组合分子D-C。在筛选过程中,阴性对照噬菌体的逐渐减少、展示两个结构域以上的噬菌体比例不断增多,尤其是D-C组合的选择性富集和其随机连接肽的严格筛选都显示了筛选的有效性和D-C组合的重要性。噬菌体ELISA进一步证实D-C与人IgG四亚类的结合能力远强于天然SpA分子。该研究应用分子进化技术首次获得了一种与人IgG四亚类具有结合优势的新型组合分子D-C,不仅可为IgG纯化、制备、检测等方面的应用提供新的候选分子,还为细菌IBP结构功能的进一步研究提供新的手段。 祁培培 丁莹莹 吴莉莉 陈秋莉 王锦红 刘超 廖文婷 张婧 曹洁 潘卫关键词:噬菌体 IGG 亚类 人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析 被引量:2 2013年 目的全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能。方法根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)体外基因合成人IgMμ链恒定区全长(CH1-CH4)及其截断片段CH1-CH2和CH3-CH4。原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,并分别免疫BALB/c小鼠。同时设天然人IgM、IgMμ链和IgG免疫组为对照。再用ELISA法检测6种血清,分析比较其抗原性及免疫原性。结果利用OE-PCR方法体外成功合成1 359 bp的IgMμ链(CH1-CH4)全长基因、651 bp的IgMμ链CH1CH2和708 bp的IgMμ链CH3CH4,并构建相应原核表达质粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA检测结果显示:①IgG免疫原性>IgM>IgMμ链>rMμ1-4>rMμ1-2>rMμ3-4;②IgM免疫的血清与IgG有较强的交叉反应性,IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交叉反应性;IgMμ链和重组μ链的各肽段免疫的血清与IgG均无明显的交叉反应性。结论重组的IgMμ链及其各肽段与天然IgMμ链有着相似的免疫原性和特异性,为基因工程得到抗人IgMμ链单克隆抗体奠定了研究基础。 张婧 章萍萍 祁培培 吴莉莉 刘超 潘卫 邓松华关键词:免疫球蛋白M 酶联免疫吸附测定法 单克隆 人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用 本发明涉及生物医药工程技术领域。HIV-1型转录反式激活因子(trans-activator of transcription,Tat)是HIV-1感染早期产生的重要调控蛋白。本发明的目的在于筛选到分子构象相对稳定且能引... 曹洁 潘卫 张华群 陈秋莉 王锦红 廖文婷 葛宜兵 祁培培 刘超 章萍萍 杨界 何婷文献传递 一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用 本发明涉及生物医药工程技术领域,具体涉及一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用。本发明提供的一种人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体,是缺失疏水区的Tat△(31-45)突变体,其氨基酸序列如S... 曹洁 杨界 潘卫 张华群 王锦红 廖文婷 祁培培 陈秋莉 丁超 何婷 丁莹莹文献传递 人免疫球蛋白GFcγ受体的细胞分布及其功能研究进展 被引量:3 2012年 存在于人免疫细胞表面的IgG Fcγ受体(FcγRs)在功能上分为活化性受体和抑制性受体两类,其主要的免疫学作用是对细胞反应的正向和负向调节,两者间相互作用的平衡是维持机体正常免疫应答或免疫耐受的重要因素,由此FcγRs也成为潜在的治疗自身免疫病、过敏及感染性疾病等理想的作用靶标。现就人FcγRs在不同免疫效应细胞表面的分布及其免疫调节功能的研究进展作一概述。 祁培培 曹洁关键词:细胞分布 活化性受体 抑制性受体 免疫调节 人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用 本发明涉及生物医药工程技术领域。HIV-1型转录反式激活因子(trans-activator of transcription,Tat)是HIV-1感染早期产生的重要调控蛋白。本发明的目的在于筛选到分子构象相对稳定且能引... 曹洁 潘卫 张华群 陈秋莉 王锦红 廖文婷 葛宜兵 祁培培 刘超 章萍萍 杨界 何婷一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用 本发明涉及生物医药工程技术领域,具体涉及一种缺失疏水区的人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体序列及其应用。本发明提供的一种人类免疫缺陷病毒I型Tat蛋白突变体,是缺失疏水区的Tat△(31-45)突变体,其氨基酸序列如S... 曹洁 杨界 潘卫 张华群 王锦红 廖文婷 祁培培 陈秋莉 丁超 何婷 丁莹莹文献传递 人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白N末端缺失突变体融合蛋白的表达及其免疫原性分析 被引量:1 2011年 本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni^(2+)-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。 张华群 廖文婷 陈秋莉 葛宜兵 杨界 章萍萍 祁培培 刘超 何婷 王锦红 潘卫 曹洁关键词:人类免疫缺陷病毒1型 TAT蛋白 缺失突变 免疫原性 人和羊IgG对噬菌体展示细菌免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的体外进化筛选 被引量:1 2013年 目的使用人和羊不同物种IgG来诱导噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同的Fc段构像是否具有特异的结合优势,同时探索其优势结合序列的组合特点。方法通过PCR获得金黄色葡萄球菌蛋白A(SpA)的A、B、D、E和链球菌(C和G群)蛋白G(SpG)的B2、B3各单结构域片段,构建由该6个片段随机组合的噬菌体展示文库。再分别使用人和羊IgG对文库进行体外亲和筛选,以期能够获得具有特异优势结合能力的组合分子,并在Phage ELISA的水平上进一步验证筛选结果。结果成功构建了符合进行体外进化筛选要求的噬菌体展示单结合结构域随机组合文库后,经过6轮人IgG诱导筛选,文库的展示片段大小统一为3个结构域组合分子,E-B-B3;经过6轮羊IgG诱导筛选,文库的展示片段大小也统一为4个结构域组合分子,D-A-B3-B3。Phage ELISA进一步验证最终组合序列的对人和羊IgG的结合能力。结论首次得到两种天然SpA、SpG分子中不存在的,且分别特异地与人和羊IgG具有强结合作用的新型组合分子E-B-B3、D-A-B3-B3,在人和羊IgG的纯化和检测具有很大的应用前景。 吴莉莉 祁培培 章萍萍 王锦红 张婧 何婷 潘卫 邓松华关键词:细菌噬菌体 免疫球蛋白G 基因文库